／０１蝌广２０１３年第１５期 ４７ 检测分析 鱼粉中牛磺酸含量测定 杨曦刘成模摘 要：本试验对鱼粉中测定牛磺酸含量的方法进行 了研究。采用超纯水提取鱼粉中牛磺酸．与１％２．４一二硝 基氟苯（ＤＮＦＢ）衍生后经高效液相色谱仪测定。结果表明， 该方法平均回收率１００．３２％．鱼粉中牛磺酸检出限和定量 限分别为０．０３％和０．０６％ 该方法适合鱼粉中牛磺酸的定 量分析 关键词：鱼粉：牛磺酸：高效液相色谱 牛磺酸（Ｔａｕｒｉｎｅ）俗称牛胆碱．化学名２一氨基 乙磺酸。分子量１２５．１５，无毒、无臭、味微苦，对热 稳定．是一种游离非蛋白质氨基酸。牛磺酸在自 然界普遍存在于有机体内．动物体内牛磺酸含量 远高于植物，其中．海洋生物中含量最高。如鱼类 的青花鱼、沙丁鱼、墨鱼、章鱼，贝类的牡蛎、海 螺、蛤蜊等牛磺酸含量都很丰富。鱼不同位置的 牛磺酸含量也不一样．鱼背上深色鱼肉中牛磺酸 含量是其白色部分的５～ｌ０倍．而鱼内脏中牛磺 酸含量明显高于肌肉组织中含量 牛磺酸能促进 大脑发育，增强视力，调节神经组织兴奋性，具有 增加心肌收缩力．促进脂类物质消化等作用。在 水产动物中应用主要集中于牛磺酸诱食作用上． 还能提高机体抗缺氧能力。增强机体免疫力。由 于鱼粉是富含牛磺酸和蛋白质的重要饲料原料． 准确测量牛磺酸含量，对于优化饲料配方、提高 养殖效率具有十分重要的意义。 国内外有关牛磺酸检测方法主要有分光光 度计法、荧光法、液相色谱法、薄层扫描法和氨基 酸分析仪测定法等（杨涓等。２００６：李珊和刘玉 兰，２００１；苏玉永等，２００６；惠秋沙，２０１１；曹让和 生，２００７）。分光光度计法检测灵敏度较低； 荧光法对前处理要求比较高：氨基酸分析仪测定 杨 曦：广东恒兴饲料实业股份有限公司。 刘成模、杨丽云、黄智成：单位同第一作者。 杨丽云黄智成 法检测成本高、耗时长不利于完成大批量检测任 务：而用高效液相色谱法检测鱼粉中牛磺酸含量 尚不多见．同时液相色谱法具有前处理步骤简 单、耗时短等优点。本文用超纯水提取鱼粉中牛 磺酸，与１％２，４一二硝基氟苯（ＤＮＦＢ）衍生后（汤 志刚等，１９９９）用高效液相色谱测定其含量 １材料与方法 １．１仪器和试剂 高效液相色谱仪．美国Ｗａｔｅｒｓ公司：１５２５型 二元泵；２４８７型紫外检测器；超声波清洗器；恒温 箱；一次性注射式过滤器；０．４５ ｍ水系滤膜，牛 磺酸标准品，Ｓｉｇｍａ公司；其他试剂均为分析纯， 水为超纯水 １．２溶液配制 ０．０５ ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ７磷酸盐缓冲液：称取３．４０ ｇ 磷酸二氢钠于５００ ｍＬ容量瓶中．加入１４５．５ ｍＬ Ｏ．１ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液．用水定容： 流动相：乙腈：水：０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液：１５： １５：７０（体积比）： ０．５ ｍｏｌ／Ｌ碳酸氢钠溶液：称４．２ ｇ碳酸氢钠 溶液，加１００ ｍＬ水溶解： ｌ％２，４一二硝基氟苯：称取１．００ ｇ ２，４一二硝基 氟苯于１００ ｍＬ容量瓶中。加入乙腈溶解并定容 １．３标准溶液配制 １ ０００ ｍｇ／Ｌ牛磺酸标准储备液：准确称取 １００．０ ｍｇ牛磺酸于１００ ｍＬ容量瓶中，用超纯水 溶解并定容： 牛磺酸标准工作溶液：依次移取１ ０００ ｍｇ／Ｌ 牛磺酸标准储备液０、１００、２００、４００、８００、１ ０００ Ｌ于进样瓶中，依次加入１ ０００、９００、８００、６００、 ２００、０ Ｌ超纯水混匀，配制浓度分别为０、１００、 ２００ ４００ ８００ １ ０００ ｍｇ／Ｌ 检测分析 ４８ 钥料广￣２０１３年第１５期 Ｄｅ￡ｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ １．４仪器条件 表２鱼粉中牛磺酸的（ｎ＝６）变异系数 ｍｇ／ｋｇ 色谱柱：４．６ｘ２５０ｍｍ，ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ一１８，５ ｍ， 检测波长３６０ ｎｉｎ，进样量１０ Ｌ，柱温２５℃，流 动相：乙腈：水：０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液＝１５：１５：７０ （体积比）．流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ。 １．５样品前处理 称取１．００００ ｇ已粉碎好的鱼粉样品于５０ ｍＬ 离心管中．加入２０ ｍＬ ０．５ ｍｏｌ／Ｌ碳酸氢钠溶液， 超声波中振荡１０ ｍｉｎ、４ ０００ ｒ／ｍｉｎ转速离心５ ｍｉｎ．上清液用滤纸过滤．取１ ｍＬ滤液再经０．４５ ｍ滤膜过滤，准确移取１００ Ｌ于小试管中，加 ２结果与分析 ２．１方法的线性响应 ．取配制好的标准工作溶液衍生好后在选定 仪器条件下进行测定，结果表明：在上机浓度为 １００～１ ０００ ｍｇ／Ｌ范围内仪器响应值与浓度呈线 入１００ ｔｘＬ １％２．４一二硝基氟苯．旋涡ｌ ｍｉｎ后，用 封口膜封口．置于６０℃水浴中避光加热１ ｈ，取 性相关．其回归方程为ｙ＝４０８５．Ｉｘ一１７０７７。相关系 数ｒ＝Ｏ．９９８ 线性响应范围完全满足测定要求．表 出后稍冷，加入８００ Ｌ ０．０５ ｍｏＦＬ磷酸盐缓冲 液．涡旋后待上机。 １．６回收率测定 明该仪器方法定量测定的可靠性 ２．２方法的灵敏度 将鱼粉样品中分别添加一定浓度牛磺酸标 准品，采用本试验方法进行测定．并根据理论值 在本试验条件下．按信噪比Ｓ／Ｎ为３计算． 求得鱼粉中检出限为０．０３％．按信噪比Ｓ／Ｎ为６ 计算．求得定量限为０．０６％．满足鱼粉中牛磺酸测 定灵敏度要求 ２．３鱼粉样品中牛磺酸测定结果 用本试验方法分别对国产鱼粉和进口鱼粉 和测定值计算回收率。结果见表１，用本试验方法 测定牛磺酸回收率９６．８６％～１０７．６６％。 表１ 牛磺酸回收率试验结果 ｍｇ／ｋｇ 样品名称牛磺酸含量添加浓度实测浓度回收率，％平均回收率／％ 中牛磺酸含量作了测定（表３－４）。由结果可以看 出．由于鱼粉产地不同，加工所用到的原料种类 差异。还有加工方式差异，导致鱼粉中牛磺酸水 平参差不齐。 ３结论 本文采用高效液相色谱法柱前衍生方式测定 表３进口鱼粉中牛磺酸含量 ％ １．７精密度测试 鱼粉中牛磺酸含量．试验结果表明：该方法线性关 系良好，平均为回收率１００．３２％，检出限和定量限 分别为０．０３％和０．０６％．测定结果变异系数为 分别称取同一个鱼粉样品６份．采用本试验 方法进行测定，结果见表２，并计算其变异系数 ＣＶ。由计算结果可知变异系数为３．３２％，由此可 知，该方法符合残留分析精密度要求。 ３．３２％，是快速、可靠的测定鱼粉中牛磺酸的方法。 （参考文献略）■
