牛卵母细胞体外受精技术

Ｖｏ１．３６。Ｎｏ５　综述与专论　４ｌ　牛卵母细胞体外受精技术　李　魁　（甘肃农业职业技术学院，甘肃兰州　７３０５００）　中国图书分类号：Ｓ　８２３．３　５文献标识码：Ａ文章编号：１００６－－７９９Ｘ（２００６）Ｏ５—似１—０５　胚胎移植技术作为种公牛的引进、高产　奶牛和优质肉牛扩繁的技术手段，在生产中　发挥了良好作用。但是，胚胎移植技术在应　用过程中均存在胚胎资源短缺、胚胎价格过　值不大；②利用腹腔镜进行活体采卵，可充分　利用优良母牛的卵母细胞。试验表明，此法　对供体牛的生产性能和性周期无显著影响；　③采自屠宰场的遗弃牛卵巢。目前，家畜体　外受精研究中使用最多的是屠宰场遗弃卵　高的问题。利用牛卵母细胞的体外受精　（ⅣＦ）和体外培养（ＩＶＣ），可显著降低胚胎成　本，扩大胚胎移植技术的应用范围。　１　卵母细胞的来源　巢，它成本低、取材方便，能满足胚胎体外生　产的大批量需求，但若要用于生产性移植，必　须详细掌握供体牛的相关数据，做好建档　工作。　２牛精子体外获能　卵母细胞的来源主要有三个途径：①利　用超排技术，从输卵管获得成熟卵母细胞，适　用于小型动物，对牛等大型动物而言，适用价　直接将精子输入输卵管或注入卵巢周　ｓｏｍｅ　ｂａｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ　ｓｕｐｐｏｒｔ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　传图谱。此外，随着经济的发展，许多研究毛　性状的资源参考家系都是经过对毛性状的选　择的群体。因此，建立更多更完善的羊毛性　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｓｔｎｌｃｔｕｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃａｔｔｌｅ　ａｎｄ　ｓｈｅｅｐ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．　Ｃｅｌｌ　Ｇｅｎｅｔ．１９９１，５７：１２７—１３４。　状ＱＴＬ作图参考家系，是更迅速开展这方面　研究的首要任务。同时也有一些研究报道已　经确定部分ＱＴＬ，然而这些因为数据少且不　［２］Ｐａｒｓｏｎｓ＇ｔｉｍ，Ｐｉｐｅｒ　ＬＲ，Ｃｏｏｐｅｒ　ＤＷ．Ｌｉｎｋａｇｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ－　ｓｈｉｐｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｋｅｒａｔｉｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＫＲＴＡＰ）ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｉｎ　ｓｈｅｅｐ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９４，２０（３）：５ｏｏ一５０２．　【３］Ｓｍｌｔ　Ｍ．Ａ．，Ｓｈａｙ　Ｔ．Ｌ．，Ｂｅｅｖｅｒ】．Ｅ．，ｎ　０２　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｅａ－　适合的设计群体，过时的分析技术，落后的研　究，重新检测这些数据对于已经确定影响羊　毛性状或产量的重要ＱＴＬ是必要的。　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａＩｌ　ａｇｏｕｔｉ—ｌｉｋｅ　ｌｏｃｕｓ　ｉｎ　ｓｈｅｅｐ，Ａｎｉｍ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔ．２００２，３３：　３８３—３８５．　［４］马玉萍．绵羊主要经济性状的微卫星标记研究　【Ｄ］．石河子大学硕士学位论文．２００３．　［５］张明亚．凉山半细毛羊１号染色体遗传连锁图和　在以后的研究中，合理地设计实验参考　家系，增大样本含量，集中在侯选区域增加标　记的数目，进一步减小搜索范围，进一步验证结　果，最终得到进行标记辅助选择所要求的与　ＱＴＬ紧密连锁的微卫星标记是完全可能的。　主要参考文献　［１］Ｈｅｄｉｇｅｒ　Ｒ．，Ａｎｓａｒｉ　Ｈ．Ａ．，Ｓｔｒａｎｚｉｇｅｒ　Ｇ．Ｆ．Ｃｈｒｏｍｏ．　羊毛性状ＱＴＬ定位研究【Ｄ］．四川农业大学硕士学位论文．　２００４．　【６］Ａｌｌａｉｎ　Ｄ．，Ｌａｎｔｉｅｒ　１．，Ｅｌｓｅｎ】．Ｍ．，Ａ．，Ｂｅｒｔｈｏｎ　Ｐ．，　Ｌａｎｔｉｅｒ　Ｆ．Ａ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｉｍｉｎｇ　ａｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＱＴＬ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ　ｗｏｏｌ　ｔｒａｉｔｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｔｒａｉｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＩＮＲＡ４０１　ｓｈｅｅｐ　ｌｉｎｅ［］］．Ｐｒｏｅ．６山ｗｎｒ１ｄ　Ｃｏｎｇ．Ｇｅｎｅｔ．Ａｐｐ１．Ｌｉｖｅｓｔ．Ｐｒｏｄ．．Ａｒｍｉｄａｌｅ．１９９８，２４：５１—５４．　维普资讯 http://www.cqvip.com

甘肃畜牧兽医　２００６年５（总１９０）期　，卵母细胞的受精率很低，碴　有　ｉ：　－　０．嗡道内停留一定　日寸闸¨ｔ一・系列的童　匕　．才能具备受精能力，此过程称为精　获　能。精子体外获能技术是推　卵母细ｌ陶体外　要精技术发展的具有划时｛　意义的重：戈突　破，是现代胚胎体外操作的戈踺技术。　．１　影响精子体外荻能的　素　精子获能过程中伴随着一系列生理　童　．匕变化。精子体外获能必须　量接近精于体　内获能的生理生化条件。现有资料表明．Ｆ　刈因素可在精子体外获能过程中诱导精子获　钱和发生精子顶体反应，促使精子在体外条　件卜获得受精的能力。　．１．１　精子本身：不同物种的精子体外获能　需时间有所不同，如兔子情予的获能时间　为数小时，而人和小鼠精　｛本外获能彳Ｅ　ｌ　ｈ　以内，牛在１　ｈ左右；同种动物不同个体的精　子体外获能的时间也有差肄；此外采精部位　不同，所得精子其获能情况也不相同。因此　精子来源是影响体外获能的一个重要因索　２．ｊ．２温度：大多数哺乳动物精子获能温度　为３７～３８℃，牛羊精子体外获能的适宜温度　为３８．５～３９　ｃ【二　有关研究表明，细微的温差　会影响精子膜脂的物理状态．从而影响剁精　子获能效果。　２．ｉ．３　ｐＨ值：精子获能的最适ｉ。Ｈ值为７．４　～２．０，低于６．７获能时间延长；高于８　２获　能时间缩短；但ｐＨ值偏高　利于精子存活。　２．１．４渗透压：渗透压低予２７０　Ｏｓｍ／ｋｇ　ｔｔ，Ｏ　戏高于３４３　Ｏｓｍ／ｋｇ　Ｈ　Ｏ都会影响精于正誊　能．牛精子获能的适宜渗透压范围是２９５～　３］０　Ｏｓｍ／ｋｇ　Ｈ２Ｏ。　２．１．５钙离子载体（ＩＡ）：Ｙａｎ　ａｇｉｍａｃｈｉ等发现　情　Ｆ的顶体反应是一个窳赖ｃａ　的过程．另　舛　，ｃａ　可以刺激糖酵解过程为精子活动提　供所需能量，从而加强糕子运动，ＩＡ呵与　ｃａ　形成复合物，携带ｃ　进入精子内，从　而诱发精子的顶体反应并激活顶体酶。ＩＡ　ｘ十精子的　曩　刹烈，处珲时闻过长或浓度　过岛　全　｛ｆ　产的急割死ｆ：，在操作中‘圮成　注意。　２．ｉ．６氨琏多键　ＧＡＧ）：母畜发情期输卵管　液中的ＧＡＣ可促进铺子对ｃａ　哎收，诱发顶　体夏吱　试验征　．ＧＡＧ能诱导寸、兔、人精　子体外获能　顶停反应，不同类型ＧＡＧ对精　子获能的　婀程度不同。现在精　获能液常　添均　素（庙ＧＡ（；）促进精于获能。　２．１．　高离子设度液（ＨＩＳ）：Ｂｒａｃｋｅｔｔ首先报　导了　甩１７９～１９９ｍＭ高离子强度液ＮａＣ１　使龟精子体外获能，获缛了试管仔兔　用同　样渗透乐的ＩｊｌＳ处理牛精子，与成熟卵泡卵　母细胞体外受ｌ精后移植，有试管犊牛产生。　栩关研究表明高离　强度液可置换精子表面　抗原物质或ｌ去能因子，从而诱发顶体反应。　２。｛．８咖啡　：咖啡因主要通过抑制环腺背　酸二酯酶来细胞内的ｃＡＭＰ水平，增强　精子活动能力．同时与肝素、ＢＳＡ协同作用促　进精子获能。　２．１。９血清白蛋白（ＳＡ）：血清白蛋白可凋整　精子膜的脂肪水平，改变精子膜的稳定性，精　子一旦获能，血清白蛋白可促进其迅速穿透　卵子。据报道，在丙酮酸钠和乳酸钠存在的　情况下，应用ＢＳＡ可使鼠卵受精率高达８３％　～９５％。现在在精子获能实验中最常用的是　牛血清白蛋白（ＢＳＡ）。　另外，血小板激活因子（ＰＡＦ）、谷胱甘肽　（ＧＳＨ）、ＦＩｌＥｆ青霉胺、亚牛磺酸和肾上腺素混　合物）、透明质酸酶、已酮可可碱和茶碱等均　可不同程蛮的提高精子的活力。　２．２精子体外获能方法　２．２．１精　冼洚：精子洗涤就是筛选精子、　去除有害物质的过程，即将洗涤液加入鲜精　冻锖中，经过离心、精子七浮等方法除去精　清、瓦精、弱精，　及鲜精稀释液卵黄液尊物　质和冻精的冷冻保护剂，以获得高密度、高质　量和高活力的精子。目前最常用的牛精子洗　维普资讯 http://www.cqvip.com

Ｖｏ１．３６．Ｎｏ５　综述与专论　４３　涤液为ＢＯ液和台氏液ＴＡＬＰ，常用的洗涤处　理方法为直接洗涤法、Ｐｅｒｅｏｌｌ密度梯度分离　法和精子上浮法。其中精子上浮法是体外受　精技术中用于精子筛选的最佳方法。　２．２．２精子体外获能：牛体外获能液现在一　般以ＢＯ液作为基础液，然后在其中添加肝　素钠２０～３０ｔ，ｓ／ｍＬ，ＢＳＡ　６　ｍｇ／ｍＬ，配成ｐＨ为　７．８的平衡盐溶液。常用获能方法是将５０—　８０　的精子悬浮液加入等量的上述获能液　中，放人ＣＯ　培养箱培育１５ｍｉｎ。在直径　３０ｎｌｌｎ的培养皿中制作３个１００　Ｌ的受精液　微滴，在每个微滴中加入２～５　Ｌ精子悬浮　液，使精子最终密度为１～１．５×１０６个／ｍＬ。　将培养皿放入３９ｃＩ＝、５％ＣＯ　和饱和湿度的　ＣＯ　培养箱中平衡１　ｈ备用。　２．３获能精子的判定　获能精子的快速检测方法一直是人们研　究热点。目前主要采用观察精子运动形式来　确定精子是否获能。精子开始获能时，运动　非常活跃，尾部振幅大而有力，获能后精子即　出现超活化现象或超激活运动，表现为头部　侧向曲线运动，鞭打幅度加宽，不同动物精子　尾部运动不同，但均表现出一种强有力的鞭　打运动。　３卵母细胞的体外成熟　卵母细胞进行体外成熟和体外受精是一　种不同于体内生产牛胚胎的方法，随着牛体　外受精技术及相关技术的发展，卵母细胞体　外成熟技术将越来越重要。　３．１基础培养基　家畜卵子体外培养的基础培养基主要有　ＴＣＭ１９９、Ｈａｍ’ｓＦ１０和Ｈａｍ’ｓＦ１２，其中牛以应　用ＴＣＭ１９９的最多，体外成熟率可以达到　８０％以上。　３．２添加成分对卵母细胞体外成熟的影响　研究表明，在基础培养基的基础上，添加　促性腺激素和雌激素、牛卵泡液等成分对卵　母细胞的体外成熟有不同程度的促进作用。　３．２．１促性腺激素和雌激素：卵母细胞在体　内成熟过程中促性腺激素起了重要的作用。　因而许多研究者在卵母细胞体外成熟培养液　中也加入激素成分。Ｂｒａｃｋｅｔｔ（１９８８）、旭日干　（１９８９）等认为，ＦＳＨ、Ｉ．１－Ｉ、ｈＣＧ也能显著提高　ＩＶＭ卵母细胞的ＩＶＦ能力及早期胚胎的发育　能力。适量添加可促进卵母细胞的完全成　熟。一般培养液中都同时添加ＦＳＨ、ＬＨ　和Ｅ２。　３．２．２牛卵泡液（ｂＦｒ）：牛卵泡液为卵母细　胞成熟的介质，含有大量来自血清的生长因　子和颗粒细胞及卵泡细胞的分泌因子。ｂＦＦ　作为卵母细胞发育的微环境在决定卵母细胞　未来命运中起主要调节作用（Ｋｈａｔｉｒ等，　１９９６）。根据Ｆｕｋｕｉ报道，体内卵母细胞的成　熟与卵泡液中所含雌激素的量有极大的关　系，特别是由雌激素代谢而来的某种有效物　质可促进细胞质的成熟。卵泡液中足够的孕　酮含量对卵母细胞的成熟具有促进作用。周　颂成等认为在成熟卵泡液中含有多种有效物　质，甚至包括某些未知成分，这些物质对于完　善卵母细胞的成熟不仅具有单一的作用，还　起有相互协同的促进作用。多数研究结果表　明在成熟培养液中添加适量的卵泡液可提高　卵母细胞成熟率，同时促进牛卵母细胞获得　胚胎发育能力，而过量的卵泡液则抑制卵母　细胞的成熟。　３．２．３血清：培养液中添加血清可促进卵母　细胞成熟，它为ＣＯＣ提供所必需的蛋白质并　与卵母细胞周围的卵丘细胞一起能防止透明　带变硬，有利于精子的穿人。江金益（１９８９）　研究发现，在奶牛卵母细胞成熟培养液中添　加１０％犊牛血清，卵母细胞的成熟率、受精　率都显著高于添加２０％发情母牛血清组。　３．２．４共培养细胞：在培养基中添加体细胞　（Ｇｒｏｃｈｏｌｏｖａ等，１９９５）、输卵管上皮细胞都有　助于提高卵母细胞的成熟率，并影响受精率　和早期胚胎发育。在ⅣＭ培养多采用　维普资讯 http://www.cqvip.com

４４　甘肃畜牧兽医　２００６年５（总１９０）期　卵泡细胞，卵泡细胞主要包括卵丘细胞、颗粒　细胞和内膜细胞。卵母细胞的成熟、受精以　及随后的发育需要卵丘细胞的存在和扩散。　卵丘细胞提供卵母细胞成熟所必需的物质。　据认为，卵丘细胞的扩散是伴随细胞质成熟　同时发生的。扩散的卵丘细胞能够调节物质　的通透性，诱捕从卵子排出的有害因子，从而　有效地抑制卵子的退化。大量研究（Ｆｕｋｕｉ　等）表明，卵丘细胞对卵母细胞的体外成熟有　促进作用，同时影响随后的受精和卵裂以及　胚胎发育。颗粒细胞对卵母细胞作用与细胞　浓度有关。在促性腺激素和血清存在的情况　下，低浓度颗粒细胞（１～５　Ｘ　１０　个／ｒＴｄＪ）能够　刺激卵母细胞成熟的复始；高浓度的颗　粒细胞（５０～１００　Ｘ　１０　个／ｍＬ）则抑制成熟分　裂的复始，而且可以为ｂＦＦ以及颗粒细胞与　卵丘细胞直接接触所强化（赵伟等）。　３．２．５细胞因子和生长因子：细胞因子和生　长因子对卵母细胞体外成熟和体外发育均有　影响。多肽生长因子（ＰＧＦｓ）是一系列生长因　子的总称，是细胞间传递信号和信息交流的　物质基础。ＰＧＦｓ既能促进细胞的生长。　又能在某些条件下抑制细胞生长，也能调节　细胞的分化。胚胎本身和生殖道提供的因子　都具有促进细胞增殖的作用。ＥＧＦ，ＩＧＦ一１。　ＴＧＦ—Ｑ，ＴＧＦ—ｌ３、ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ等细胞因子　都能不同程度地促进牛卵母细胞的体外成熟　（１ｏｒｅｎｚｏ等，１９９２；罗海玲等，２００２）。生长因　子的浓度、半衰期和来源影响着卵母细胞的　ＩＶＭ和胚胎的发育。卵母细胞和卵泡液中存　在着成熟抑刹因子（ＯＭＩ），可通过穿透　透明带的微绒毛与卵母细胞质膜间的间隙联　结进入卵母细胞或通过卵泡液直接被吸收。　已经证明，ＯＭＩ来源于颗粒细胞或卵泡壁细　胞，由卵丘直接输送到卵母细胞，抑制卵母细　胞的成熟。卵母细胞和卵泡液中同时存　在成熟促进因子（ＭＰＦ），ＭＰＦ是减数和　有丝的通用细胞调节因子。具有导致卵　母细胞恢复减数直至成熟的作用，主要　功能是促进微管系统形成及减数纺锤体　的形成。　３．２．６其它因素：环化核苷酸（ｃＡＭＰ）作用　于多种细胞表面的激素，主要作用之一是维　持卵母细胞成熟的静止状态。在卵母细　胞成熟过程中，细胞内游离钙离子浓度　有自发的波动，这些波动与卵母细胞的细胞　质成熟密切相关。输卵管细胞上清液（刘建民　等，１９９２）也有助于提高卵母细胞的成熟率。　３．３　卵母细胞的体外培养　综合各项研究成果，牛卵母细胞的体外　培养条件为：在温度为３８～３９℃、湿度为　９５％～１００％的５％ＣＯ，培养箱中，用微滴培　养法培养２３～２４ｈ。牛卵母细胞的体外培养　成熟液（ＯＭ）为以Ｈｅｐｅｓ或ＮａＨＣＯ，缓冲的　ＴＣＭ一１９９位基础液，并添加一种或几种其它　成分，如卵泡液、血清、激素、生长因子、颗粒　细胞和环化核苷酸等，改善培养条件，提高卵　母细胞成熟率。　３．４　卵母细胞体外成熟的判断　以卵丘细胞扩张、第一极体排出作为卵　母细胞体外成熟的标志。牛卵母细胞质较　暗，可随机抽取一部分作染色体观察。发现一　个极体和卵子ＭＩＩ期染色体团，判定为卵母　细胞已经成熟。　４　卵母细胞体外受精　卵母细胞体外受精（ⅣＦ）是指雌雄配子　在体外条件下完成成熟、获能和受精的过程。　４．１　卵母细胞体外受精的方法　将经过体外成熟培养的卵母细胞移入受　精液（ＢＯ液）中，洗涤３—５次，再移入经过平　衡处理的精子悬浮液微滴中，每个微滴各移　人１０～ｌ５枚卵母细胞，放入ＣＯ，培养箱培养　４２～４８　ｈ后，在显微镜下检查卵裂情况，计算　卵裂率。需要考虑的主要因素是精子的浓度　和精子与卵子相遇的时间。精子浓度要达到　每毫升１　Ｘ　１０　～６　Ｘ　１０　个，精卵相遇的时机　维普资讯 http://www.cqvip.com

综述与专论　是精子在遇到卵子时刚好发生了完全的顶体　反应，顶体酶及时释放，精子顺利穿透卵子透　明带。卵母细胞不成熟或老化也不能完成正　常的受精过程。　卵母细胞的体外受精的另一种方法是单　精子注入法。它是通过显微技术将精子直接　注射到卵母细胞内而受精的方法。将精子直　接注入卵内，对卵子的损伤率较高；而且这一　过程费时费力，有时还会损伤精子中的遗传　物质。　４．２　体外受精存在的问题和解决的办法　４．２．１　多精受精：多精受精一直是体外受　精的一个难点。判定卵母细胞成熟的标准是　核成熟。但是，仅仅根据核成熟来判定卵母　细胞的成熟并不全面，卵母细胞成熟应包括　核成熟、细胞质成熟、透明带成熟等。这样卵　细胞在受精过程中才能发生协调完整的生理　变化，保证多精阻拒，以及激发精子在卵母细　胞内继续发育的能力。目前减少多精受精的　技术措施包括延长４—６ｈ成熟培养时间、降　低卵母细胞周围的精子密度、调整受精液的　组方等。　４．２．２早期胚胎发育阻滞及突破：Ｂｏｗｍａｎｅ　等（１９７０）发现体外培养的哺乳动物早期胚胎　存在着发育阻滞的现象。研究表明，早期胚　胎发育阻滞多发生在胚胎母型基因向胚　型基因转化过程中，但Ｑｉｕ等（２００３）的　研究结果显示，早期胚胎发育阻滞不是胚型　基因激活不完全或激活失败，而是胚型基因　激活延迟所致。目前，为了克服阻滞现象，有　助于产生高质量的胚胎，主要采取以下方法：　一是，利用临时中间受体，即把牛体外受精卵　放入结扎的中间受体兔或绵羊的输卵管中，　培养至桑椹胚或囊胚，再移植到受体或冷冻　保存。二是，体外受精卵在体外与体细胞联　合培养。利用血清添加培养液（ＴＣＭ１９９＋血　清）与体细胞共培养，囊胚发育率可达４０％。　目前用于胚胎共培养的体细胞主要有颗粒细　胞（ＣＣｓ）、输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）之类，其中　效果最好的是ＢＯＥＣ。三是，胚胎培养在简　单的培养液中，无任何体细胞支持。　５体外受精早期胚胎的培养　早期的胚胎培育利用临时中间受体，把　牛体外受精卵放入兔或绵羊结扎的输卵管　中，培养至桑椹胚或囊胚，再移植到受体或冷　冻保存。但此方法操作过程复杂，胚胎丢失　严重，不适合胚胎的大批量生产。近年来，输　卵管上皮细胞、卵丘细胞、胚胎滋养层细胞、　子宫上皮细胞、纤维细胞等体细胞共培养系　统的确立，都在一定程度上支持早期胚胎的　发育。早期胚胎与输卵管上皮细胞共同培养　能有效改善胚胎的体外发育效果，但是有关　输卵管细胞对体外培养的早期胚胎的作用，　目前仍然不清楚。有关单层卵丘细胞能部分　克服早期胚胎发育的阻滞，Ｚｈａｏ等认为，卵　丘细胞对早期胚胎发育有重要作用，当胚胎　发育到一定时候和卵丘细胞脱离，就和输卵　管上皮细胞直接接触，接受输卵管上皮细胞　的作用。其他类型的体细胞，如胚胎滋养层　细胞、子宫上皮细胞、肾细胞及纤维细胞，对　胚胎的发育都具有不同程度的支持作用，但　是它们的作用远没有输卵管细胞那样有效。　６　小结　卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体　外培养是胚胎移植、性别鉴定、核移植和转基　因等高新生物技术研究的基础。通过ＩＶＦ技　术可提供数量更多、成本更低的胚胎。体外　受精技术是对优良公、母畜的综合充分利用。　胚胎体外生产能得到许多优秀的全同胞的后　代；也可将一头母牛的多个卵子与不同公畜　的精子分别进行体外受精，则可获得理想的　母系半同胞组。对繁殖力低、世代间隔长的　种畜更有意义。如果把牛的体外受精技术与　建立ＭＯＥＴ核心群育种体系相结合，可以迅　速加速遗传进展，快速扩散优秀基因，提高牛　的生产力。