中国药事２０１０年第２４卷第８期 ８０９ ２００９年度甲胎蛋白（ＡＦＰ）体外诊断试剂抽验质量分析 张春涛，黄定所，北京颖，于 婷，李丽莉，孙彬裕，沈 舒，高尚先（中国药品生物制品检 １０００５Ｏ） 摘要： 目的对ｌ４家企业的１９批次的甲胎蛋白（ＡＦＰ）体外诊断试剂进行评价，考察我国该类试剂的 质量。方法依据产品注册标准和自拟标准对所有试剂进行检测。结果与结论１８批次试剂符合产品注册标 准，自拟标准检测１６批次试剂符合关于剂量反应曲线的线性相关系数的要求，１６批次试剂符合准确性的 要求，ｌ５批次试剂检测４份临床质控血结果差别显著（Ｐｄ０．０５）。各企业ＡＦＰ体外诊断试剂产品注册标 准存在差异，直接影响产品质量，建议加强该类标准的制修订工作，对三类体外诊断试剂的注册检验实行 统一管理。 关键词： 甲胎蛋白；体外诊断试剂；质量分析 中图分类号：Ｒ９２７．１１；Ｒ９８１．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—７７７７（２０１０）０８—０８０９－０３ Ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＦＰ Ｒｅａｇｅｎｔ ｏｆ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｋｉｔ ｉｎ ２００９ Ｚｈａｎｇ Ｃｈｕｎｔａｏ，Ｈｕａｎｇ Ｙｉｎ，Ｙｕ Ｔｉｎｇ，Ｌｉ Ｌｉｌｉ，Ｓｕｎ Ｂｉｎｇｙｕ，Ｓｈｅｎ Ｓｈｕ，Ｇａｏ Ｓｈａｎｇｘｉａｎ（Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｒｏ１ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００５０） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ １９ ｂａｔｃｈｅｓ ＡＦＰ ｒｅａｇｅｎｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ １４ ｃｏｍｐａｎｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｔｅｓｔ ａｌｌ ｔｈｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １ ８ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｃｏｍｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｄｕｃｔ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｓ，１ ６ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｃｏｍｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ ｄｏｓｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｉｎｅａｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ａｎｏｔｈｅｒ １ ６ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｃｏｍｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄｓ，ａｎｄ １ ５ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｉｎｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ４ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ（Ｐ％０．０５）．Ｂｅｃａｕｓｅ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｃｏｍｐａｎｙ ｖａｒｉｅｄ ｇｒｅａｔｌｙ ａｎｄ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｇｅｎｔ，ｉｔ ｗａｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｔｏ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ—ｓｅｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｖｉｓｉｏｎ，ｔｏ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｕｎｉｆｉｅｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｎ ｔｙｐｅｓ ｔｈｒｅｅ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔｓ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ： ａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔｓ：ｑｕａｌｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｌ一甲胎蛋白（ａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ）是来源于 升高 。妊娠母亲血清和羊水中ＡＦＰ水平的升高 可提示胎儿脊柱裂、无脑畸形、（先天性）食管闭 锁或多胎 。 。 检测已经广泛用于临床原发性肝 癌、病毒性肝炎、生殖腺胚胎性肿瘤的辅助诊断。 卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道的一种分子量 为７００００ｄ的糖基化白蛋白 。正常情况下，正常 人血清中甲胎蛋白的正常值量不到２Ｏ ｇ・Ｌ 。但 当肝细胞发生癌变时，随着病情恶化ＡＦＰ在血清 中的含量会急剧增加。有报道７Ｏ ～９５ 的原发 ２００９年３月至２００９年１１月我们对市场监督抽样的１９ 批ＡＦＰ诊断试剂进行检测，现将结果汇报如下。 １基本信息 性肝癌患者体内可检测到高水平的ＡＦＰ，而转移 性肝癌的ＡＦＰ水平一般低于３５０￣４００ＩＵ・ｍＵ ， 酒精性肝硬化、急性病毒性肝炎以及ＨＢｓＡｇ携带 从使用单位和生产企业共抽检到１４家企业生 产的ＡＦＰ检测试剂共计１９批，其中３家企业各抽 到２批试剂，１家企业抽到３批试剂，其余企业各 者在肝脏组织代偿性再生时ＡＦＰ水平会出现轻度 作者简介：张春涛，副主任技师；研究方向：免疫诊断技术；Ｔｅｌ：６７０９５４３３；Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｕｎｔａｏｚｈａｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ ８１０ 抽到１批试剂（其中１个批次为进口试剂）。 ２检验依据和方法 中国药事２０１０年第２４卷第８期 ３检验结果 ３．１依据企业注册标准进行检验的结果 ＩⅡⅢⅣ ２．１企业注册标准检验 １４家企业的ｌ９批检测试剂盒，均按照企业注 按照各企业注册标准，对ｌ４个企业生产的１９ 批ＡＦＰ诊断试剂盒进行检测，ｌ８批产品符合企业 注册标准，ｌ批试剂不符合产品注册标准，不符合 项目为剂量一反应曲线的线性和质控血清测定值。 ３．２依据自拟方案进行检验的结果 １ ２ ｌ 册申报的产品注册标准进行检验，检验项目包括物 理检查、外观、溶解时间、准确性、灵敏度、剂量 碍∞ 蝎 反应曲线的线性、质控血清测定值、阴性符合率、 阳性参考品和阴性参考品符合率等项目。试验中所 应用试剂盒自身校准品建立剂量一反应曲线，３ 蛇ｎ 个企业的３批试剂剂量一反应曲线的线性相关系数 ｌ ２ 有校准品和质控品均由各企业提供，操作步骤严格 按照各自说明书进行。 ２．２自拟标准检验 为了对所有试剂进行统一评价，比较各试剂之 间的差别，必须建立统一的实验要求和方法。我们 针对ＡＦＰ定量检测试剂盒的特点，对该试剂的剂 量反应曲线的线性和准确性设定了统一标准。要求 ∞¨ 为０．９８，不符合自拟标准要求，其余１６批次试剂 的剂量一反应曲线的线性相关系数均不低于０．９９， ｌ ２ 符合自拟标准的要求。 ∞约 １ ４ ／Ｏ ５ １ 准确性检测是利用国家标准品与试剂盒校准品 同时建立各自的剂量一反应曲线，应用ｚ检验进行 平行性分析，ｔ值ｄ０．０５，则表示２条曲线不明显 １ ４ ／６ ８ ９ （１）应用试剂盒自身校准品建立剂量一反应曲线，剂 量一反应曲线的线性相关系数≥Ｏ．９９；（２）应用国家 标准品（中国药品生物制品检定所，编号： １５０５４２；批号：１５０５４２—０００４）与各试剂盒自身校 准品同时建立各自的剂量一反应曲线，要求２条曲 线不明显偏离；（３）以国家标准品建立的曲线为标准 曲线对试剂盒校准品进行检测，要求实测值和标定 偏离，检验结果１６批试剂符合规定。以国家标准 品建立的曲线为准对试剂盒校准品进行检测，要求 ２ ５ ／ Ｏ ６ ｌ 实ｉ贝０值和标定值之比应在０．９０～１．１０之间，１７批 ２ ７弘／ 次试剂检测结果均符合规定，不符合规定的２批次 ８ ８ ７ 试剂的平行性分析结果亦不符合规定。 用１５批次试剂对４份临床血清进行检测，结 ２ ７５ ８ ＂ ｌ ７ 果均值分别是２Ｏ、６０、１４３、２４５＃ｇ・ｍＬ－ ，以上 结果经重复测量的方差分析统计处理，Ｐ＜０．０５， 存在显著性差异，表明不同公司对质控血清的检测 ０ ５ ３ ６ 值之比应在０．９０～１．１０之间；（４）对４份来自临床 的冻干血清同时进行检测，比较各检测结果的差 异。所有操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。 ６ ２ ＂ ２ ８９ ３ ３ 结果一致性较差。检测结果见表１。 ６ ４ ６ ３ 如 表１ １５批ＡＦＰ检测试剂对４份临床血清的检测结果 样品编号 试剂１试剂２试剂３试剂４试剂５试剂６试剂７试剂８试剂９试剂１０试剂１１试剂ｌ２试剂１３试剂１４试剂１５ ６ ６ ９ ２ ４ ５ ０ ５ 毖 注：试剂３、４、５为同一公司试剂，试剂１０、ｌ１为同一公司试剂，“／”表示未检测 ４讨论 用。 目前已在国内注册上市的ＡＦＰ进口检测试剂 依据产品注册标准，１８批试剂均符合产品注 册标准，１批试剂的剂量一反应曲线的线性和质控 血清测定值不符合规定。检验中发现虽然企业注册 标准大多已包括外观、准确性、最低检出量、剂量 约为６～８家，以联机封闭自动化操作的试剂为主， 使用单位主要集中在经济发达的东部沿海城市和各 省会城市的三甲医院。国产ＡＦＰ诊断试剂有近２０ 多家，主要以板法的化学发光法、时间分辨法和酶 联免疫法为主，考虑到实验操作的可行性，此次监 督抽样仅抽取了来自９个不同地区的生产企业和使 用单位的板法试剂，共抽取了１４家企业的１９批产 品，具有一定的代表性，产品覆盖了大部分国内 ＡＦＰ诊断试剂生产企业。目前此类试剂主要在国 内二线城市和经济欠发达的省会城市的二甲医院使 反应曲线的线性、质控品测定值等项目，但各企 业注册标准中的检验项目和检验方法不尽相同，所 使用的质控品亦不相同，各企业对以上各指标的描 一述也不一致，以剂量一反应曲线的线性和最低检出 量为例，线性相关系数的要求从０．９５～Ｏ．９９不等， 描述最低检出量所使用的单位有ｎｇ・ｍＬ－ 、Ｕ・ ｍＥ－ 、ＩＵ・ｍＥ－ ，质量标准由０．５～５ｎｇ・ｍＬ－ 不 中国药事２０１０年第２４卷第８期 ８１１ 等，剂量一反应曲线的线性和最低检出量的检验方 清的检测结果一致性较差，推测主要是与检测抗体 的特性、生产工艺和试剂盒校准品的溯源性有关， 建议应统一国内ＡＦＰ体外诊断试剂盒校准品的溯 法亦不相同。分析造成这种现象的原因可能是：产 品注册标准的修订主要在各检验机构完成，各检验 机构对标准的要求存在一定差异，再加上注册检验 时可能尚未颁布相关的国家行业标准，因此造成各 源性，各企业应利用国家体外诊断试剂标准品对各 自研发的试剂进行校对，筛选适宜的检测用抗体和 校准品，优化生产工艺，也只有这样才可以生产出 质量稳定可靠、检测结果具有可比性的ＡＦＰ诊断 企业产品注册标准的差别，从而导致产品质量的差 别，因此必须加强体外诊断试剂的标准制修订工 作，尽快出台各种常用体外诊断试剂的行业标准。 试剂盒，为临床诊疗提供科学有效的数据。 参考文献： Ｅ１３ Ｔａｋｅｔａ Ｋ．Ａｌｐｈａ－Ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ １９９０ｓ．Ｉｎ：Ｓｅｌｌ ＳＳ．Ｓｅ— ｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｍａｒｋｅｒｓ ＥＭ］．Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， １９９２：３１—４６． 另外，在标准制定时，应结合国内产品和进口产品 的特点，制定科学、可行性高的相应标准。目前， 我国体外诊断试剂是依据产品的分类来划分该类产 品隶属的检验机构Ⅲ５］，并未考虑产品的特点和历史 现状，这不利于诊断试剂产品的质量控制，建议国 家药监管理部门对体外诊断试剂的注册检验进行统 一［２］ Ｓｔｕａｒｔ Ｋ Ｅ，Ａｎａｎｄ Ａ Ｊ，Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｒ Ｌ Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉ— ｎｏｍａ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，１９９６，７７（１１）： ２２１７—２２２２． 管理，限定部分产品（如三类）检验机构，避免 为进行统一评价，我们设定了自拟实验标准， 多头检验，非良性竞争的不利态势。 按照统一的试验方法和质量标准进行检验。剂量一 ［３］ Ｂｒｅｗｅｒ Ｊ Ａ，Ｔａｎｋ Ｅ Ｓ．Ｙｏｌｋ ｓａｃ ｔｕｍｏｒｓ ａｎｄ ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏ— ｔｅｉｎ ｉｎ ｆｉｒｓｔ ｙｅａｒ ｏｆ ｌｉｆｅ［Ｊ］．Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９９３，４２（１）：７９— ８０． －１４］ ｗａ１ｄ ＮＪ，Ｋｅｎｎａｒｄ Ａ，Ｄｅｎｓｅｍ Ｊ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｅｎａｔａｌ ｍａｔｅｒ— ｎａｌ ｓｅｒｕｍ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ Ｄｏｗｎ Ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｄｅｍ— 反应曲线的线性和定量准确性是免疫定量标记分析 试剂盒最主要的考核指标，为此我们针对这２项设 定了统一的标准，检测结果表明大部分试剂盒均符 ｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｊｅａｔ［Ｊ］．ＢＩＶＵ，１９９２，３０５：３９１—３９４． ［５］ 国家食品药品监督管理局．体外诊断试剂注册管理办法（试 合我们的要求。同时应用ｌ５批次试剂对４份临床 血清进行检测，统计分析说明，不同公司对质控血 行）［ｚ］．国食药监械［２００７］２２９号，２００７． （上接第８０８页） 续使用标准黑体的方法进行傅里叶红外光谱仪的响 应函数标定。 ４小结 综上可见，该光谱治疗仪工作波长在０．４２～ ２．５“ｍ。 ３讨论 一研究了红外发射类医疗器械的波长测量，拓展 般来说，测量波长分布范围不需要得到绝对 了药检所常用的傅立叶红外光谱仪的使用范围和使 用方法。该方法具有操作简单、节约成本、兼容性 强、适用性较广的特点。 ［致谢：本文得到了德国布鲁克公司汤海涛工程师 的大力帮助。］ 参考文献： ［１］ 李昌厚．光谱带宽与分析测试误差的关系［Ｊ］．分析测试 技术与仪器，２００４，１０（２）；６５—６８． Ｅ２］ 高荣强，范世福．现代近红外光谱分析技术的原理及应用 ［Ｊ］．分析仪器，２００２，（３）：９－１２． ［３］ 刘志明，高闽光，刘文清，等．傅里叶变换红外光谱仪探测 器仪器响应函数研究口］．光谱学与光谱分析，２００８，２８ （８）：１７８６—１７８９． 强度，只需要得到相对分布即可。如果因特殊需 要，可以采用与标准黑体对比的方法进行绝对强度 标定，也可以采用使用稳定的红外光源进行传递标 定的方法＿３ Ｊ。本小组实验了第２种方法，即将待 测红外光源送中国计量院测得在０．３～１．６ ｍ范围 内的绝对强度，在对应波长点附近寻找３个点，利 用二次曲线方程，在２套数据之间建立联系。通过 对所有波长上的强度进行同样的处理，即可得到 Ｅｑｕｉｎｏｘ ５５在整个波长范围内绝对强度和相对强 度之间的转换关系。此关系建立后只要光路不再变 化就不需要重新标定。比如，对上面的某红外治疗 仪，Ｅｑｕｉｎｏｘ ５５修正后在６６６６ｃｍ （１５００ｎｍ）处 得到绝对强度为０．０７５５，对比真值（中国计量院 值）０．０７６５很接近。因此，本文提出的方法适用 于绝对强度和相对强度的光谱测量。本小组还将继 ［４］ 黄中华，李燕，王俊德，等．ＥＱＵＩＮＯＸ５５型遥感傅里叶变 换红外光谱系统的校正［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００２，２２ （３）：３９９—４００．
