菜克多巴胺残留分析方法研究进展 刘星 谢柱彬 谢志良。 （１广东省惠州市出入境检验检疫局５１６００６；２广东省东莞市东坑镇畜牧兽医站５２３４５０） 摘要：本文综述了近年来莱克多巴胺 磺酸盐溶液为流动相，采用Ｃ１８柱进 分析方法的研究进展，包括液相色谱 行药物峰与杂质峰的分离。莱克多巴 法、气相色谱一质谱法、液相色谱一质 胺含酚羟基．具有荧光性，可采用荧 谱法及免疫分析法，旨在为建立完善 光检测器测定，激发波长约为２２６ｎｍ， 的检测标准提供参考。 发射波长约为３０５ｎｍ，该方法灵敏， 关键词：莱克多巴胺；残留检测；分 可排除杂质干扰。因其紫外最大吸收 析方法：研究进展 波长为２２４ｎｍ，检测干扰很大，通常 不采用紫外检测器检测。 莱克多巴胺（Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ１作为 孙建文等翻采用液相色谱荧光法 促生长剂，用于美国、加拿大等２０多 测定动物组织中的莱克多巴胺，乙腈一 个国家，但被欧盟、日本等１５０多个 戊烷磺酸钠溶液作为流动相，Ｃ１８柱分 国家禁用。我国先后发布了《食品动 离．该方法在１．０￣１００ｐ，ｇ／Ｌ线性范围 物禁用的兽药及其化合物清单》和 内，相关系数大于０．９９９８，检测限为 《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药 ０．３￣ｇ／Ｌ，定量限为１．Ｏｂ￣ｇ／Ｌ。邓国东 物品种目录》明确规定禁止使用莱克 等［４１采用反相高效液相色谱法测定猪 多巴胺 。虽然世界各国相继禁止 尿中的莱克多巴胺，比较了不同离子 使用莱克多巴胺作为饲料添加剂，但 盐环境对色谱峰的影响。采用乙腈 该药物的非法添加仍日趋严重。 （２００）一水（８００）一冰乙酸（２０）一戊烷磺 要彻底杜绝莱克多巴胺的非法添 酸钠（０．８７ｇ）则莱克多巴胺出双头峰； 加，就要监控食品动物饲养的每一个 采用乙腈（３００）一水（７００）一冰乙酸 环节，重点监测饲料中的非法添加物， （２０）一戊烷磺酸钠（０．８７ｇ）则莱克多巴 以及对动物尿液、屠宰后动物组织等 胺｝｝；峰过于靠前，有杂质干扰；乙腈 进行多方位的抽查检测。本文从对莱 （３００）一水（７００）一冰乙酸（２０）一辛烷磺 克多巴胺各种仪器测定分析方法等方 酸钠ｆ０．Ｏ０５ｍｏｌ／Ｌ）最为适宜，莱克多 面进行综述。旨在为其尽快建立完善 巴胺四种异构体作为一种成分出峰且 检测标准提供参考依据。 无杂质干扰。该方法在ｌＯ－２０００１ａ，ｇ／Ｌ １测定方法 范围内线性关系良好，相关系数达到 检测莱克多巴胺的方法包括：高 ０．９９９９，检测限为ｌＯ￣ｇ／Ｌ，定量限为 效液相色谱法、气相色谱一质谱法、液 ５０ｔ￣ｇ／Ｌ。 相色谱一质谱法、免疫分析法。 １．２气相色谱一质谱法 １．１高效液相色谱法 气相色谱一质谱法是莱克多巴胺检 高效液相色谱法是测定莱克多巴 测中最常用的定量和确证方法。莱克 胺常用的定量分析方法，通常以乙腈一 多巴胺化学结构中具有不易气化的羟 作者简介：刘星（１９８３一），男，四川省人，助理兽医师，从事动物检疫工作。 ４２口叵目匿田 ２０１ １．８ 基和氨基．属于高沸点、难拘发的化 合物，衍生后才能测定１５］。译用的衍 生剂有ＢＳＴＦＡ（双了甲基硅 基 氟 乙酰胺１和ＢＳＴＦＡ＋１％ＴＭＣＳ Ｉ 甲基 氯硅烷）。衍生温度为８０ｏＣ，ｉ｛生时间 为１小时。水和盐的存存都含降低衍 生效果。常采用ＨＰ一５ＭＳ５％ 基甲基 聚硅氧烷弹性毛细管柱分离，选择离 子监测，监测离子（ｍ／ｚ）：１７ Ｉ、２５０、 ２６７、５０２，定量离子（ｍ／ｚ）：２ ｉＯ。 吴平谷等［６１测定猪肉中自莱克多 巴胺时，采用ＢＳＴＦＡ＋１％ＴＭＣ５为衍生 剂．８０ 衍生１小时，ＨＰ一５Ｍ ５％苯基 甲基聚硅氧烷弹性毛细管柱 离。该 方法在５０～ｌＯ００ｎｇ／ｍＬ范围内，线性相 关系数Ｒ为０．９９１３，检测限 ｆ １．０１ｚｇ／ 。朱永林等ｍ测定猪肝中 克多巴 胺时，采用ＢＳＴＦＡ试剂衍生，外标法 测定。该方法在１０～ｌＯ００ｎｇｈ ｔＬ范围 内，线性关系良好，检测限 １．ｏ￣ｇ／ ｋｇ。朱馨乐等［８１测定猪尿中 克多巴 胺时，采用ＢＳＴＦＡ衍生，外标去测定。 该方法存１０～５００１ｘｇ／Ｌ范围内，线性关 系良好，检测限为０．３１￣ｇ／Ｌ。梁春来 等１９］采用气相色谱一质谱法－坝定饲料 中莱克多巴胺，该方法测定酉合饲料 的检测限和定量限分别为０．：Ｉ－￣ｇ／ｇ和 １．０ｌ￣ｇ／ｇ，预混合饲料的检测陬和定量 限分别为Ｏ．３￣ｇ／ｇ和０．７ｔｘｇ／ｇ。 １－３液相色谱一质谱法 气相质谱测定时需要衍 ，衍生 效率对测定结果影响很大。 相质谱 法不需要衍生，提高效率的 时提高 检测的准确度［５１。该方法常采用Ｃ１８ 柱分离，也有用ＣＮ柱。选择离子监 测，监测离子（ｍ／ｚ）：３０２、２８４、１６４， 定量离子（ｎＹｚ）：３０２ ０常用流动相的 种类有：乙腈一乙酸铵溶液、甲醇一水一 甲酸溶液。 高燕红等［ ｑ测定饲料中的莱克多 巴胺时，采用ＺＯＢＡＸ Ｃ１８柱分离，乙 腈一乙酸铵溶液为流动相。该方法的检 测限为１．５３１－ｔｇ／ｋｇ，浓度在１．５３— １３．８ｔｘｇ／ｍＬ范围内相关系数为０．９９５３。 臧勇军等［１１１采用液相色谱质谱法测定 肉类中的莱克多巴胺残留．样品经Ｃ１８ 柱分离，甲醇一水一０．１％甲酸为流动相， 并认为在流动相中添加甲酸可以增强 ＨＰＬＣ分辨率和ＥＳＩ—ＭＳ灵敏度。浓度 在５￣５００￣ｇ／Ｌ范围内．相关系数为 ０．９９５，定量限为０．２ｐ￣ｇ／ｋｇ。聂建荣等 ０２］采用液相色谱串联质谱法测定动物 尿液中的莱克多巴胺，Ｋｒｏｍａｓｉｌ ＣＮ色 谱柱分离，乙腈一乙酸铵溶液为流动 相。通过电喷雾ｆＥＳＩ）离子源电离多 反应监测（ＭＲＭ）对莱克多巴胺作定性 和定量分析。该方法在１．０～５００．０￣ｇ／Ｌ 的范围内线性良好ｆｒ＞０．９９９）。检测限 （Ｓ／Ｎ＝５）为Ｏ．１ ｇ，Ｌ。 １．４免疫分析法 常用的免疫分析法包括胶体金 免疫层析法、生物传感器法和酶联免 疫分析法，其中酶联免疫分析法最为 常用。 １．４．１胶体金免疫层析法 张志健等旧采用胶体金免疫层析 法检测饲料中莱克多巴胺的含量，该 方法可靠的检出限为Ｏ．００５ ｍｇ／ｋｇ。Ｊｉｎｇ Ｊｉｎ等㈣采用胶体金免疫层析法测定 猪尿中的莱克多巴胺，该方法检测限 为５￣ｇ／Ｌ，与气相质谱结果比较发现， 假阳性率为３．５％，假阴性率为０％， 与莱克多巴胺交叉反应率为１００％，与 其他１３一受体激动剂交叉反应率小于 Ｏ．５％。 １．４－２生物传感器法 Ｃｏｌｉｎ Ｓ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ等㈣采用生物 传感器测定动物组织中残留的莱克多 巴胺。该方法在尿液和肝脏中的检测 限分别为０．３４ｐ￣ｇ／Ｌ和０．１９１ｘｇ／ｋｇ。 １．４．３酶联免疫分析法 刘建等【ｌ刮利用偶联的莱克多巴胺 作为免疫原，筛选出能稳定分泌对莱 克多巴胺的单克隆抗体的细胞株 Ｄ１２Ｂ９，其分泌的单克隆抗体免疫球蛋 白亚类为ＩｇＧ１，单抗腹水的效价不低 于１：１ｘｌ０’．与同类药物不发生交叉反 应。该方法标准曲线的线性范围在 ０．０１￣１０￣ｇ／Ｌ，相关系数ｒ２为０．９３５３。 陶文初等旧用酶联免疫法检测猪肉中 莱克多巴胺含量，结果显示方法可行、 灵敏度较高是一种简单快捷的筛选方 法。贾涛等【ｌ引用酶联免疫法检测饲料 中莱克多巴胺，该方法线性良好．相 关系数达到０．９９６４。熊浩山等［１９１用酶 联免疫法测定猪尿中莱克多巴胺．该 方法检测限为０．９２￣ｇ／Ｌ，５０％抑制浓度 的平均值为２．７ｔｚｇ／Ｌ。可见．酶联免疫 法可用于测定各种基质（饲料、猪肉、 猪尿）中莱克多巴胺含量。 ２展望 莱克多巴胺的检测方法很多．各 有优缺点。酶联免疫法简单、快捷， 可进行大批量样品的初步筛选．但假 阳性较多，需用气相质谱或液相质谱 进行确证。液相色谱法是测定莱克多 巴胺常用的定量分析方法，所需仪器 多数实验室可以满足，便于检测方法 的推广，但其灵敏度略低，不能确证， 在应用方面也相应受到。气相质 谱法是莱克多巴胺测定中最常用的定 量和确证方法，但样品需要衍生，衍 生效率对测定结果影响很大．且＿Ｔ作 较繁琐。液相质谱法能提供较气相质 谱法更详细的结构信息、背景干扰少， 在特异性和灵敏度方面均优于气相质 谱，且不需要衍生化，提取好的样品 可以直接上机测定，但需要昂贵的仪 器。各地方可根据自己实验室的实际 情况及检测目标物的基质种类，合理 选择不同的检测方法，开发出更快捷、 更准确的方法，为有效打击非法添加 莱克多巴胺行为，保障食品安全奠定 坚实的基础。 参考文献： …１中华人民共和国农业部文件，农牧发 ［２０Ｏ２１１号．食品动物禁用的兽药及其它化合 物清单［ｓ】． 『２】农业部、卫生部、国家药品监督管理 局２００２年第１７６号公告．禁止在饲料和动物 饮用水中使用的药物品种目录［ｓ］． Ｉ３Ｊ－ｌｌ，、建文，彭志妮，王乾，等．固相萃取一 液相色谱荧光测定动物组织中盐酸莱克多 巴胺Ｄ］．分析试验室，２００８，２７（９）：９，１９，２９，３９． 邓国东，昊荔琴，李云峰，等．反相高效 液相色谱法测定猪尿中的莱克多巴胺［Ｊ］．广 东饲料．２００７，１６（５）：４０—４２． ［５］吴永宁，邵兵，沈建忠．兽药残留检测 与监控技术ｆＭ］．北京：化学工业出版社，２００７： ５１６－５１８． ［６］吴平谷，沈向红，管健，等．动物组织中 莱克多巴胺残留的气相色谱一质谱法测定口］． 中华预防医学杂志，２００６，４０（６）：４４４—４４６． ｆ７】朱永林，邵德佳气相色谱一质谱法同 时测定猪肝中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残 留Ⅱ］．中国兽药杂志，２００６，４ｏ（１１）：５—８． 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作用；②香菇多糖是典型的Ｔ细胞激活剂。另 外可激活巨噬细胞、Ｂ淋巴细胞、杀伤细胞、 自然杀伤细胞、细胞毒性细胞等免疫细胞，并 可以促进Ｂ淋巴细胞增生并转化成为浆细胞， 抗体生成增加，起到体液免疫增强作用。香菇 多糖还有促进Ｂ细胞合成ＩｇＧ、ＩｇＭ的能力， 在仔猪口粮中添』ＪｌＪ不同水平的香 多糖能 够降低腹泻频率．另外香菇多糖可以 善仔猪 的健康状况，提高生长性能。 ｝Ｊ粮巾添』ＪＩ 】并提高免疫低下者ＩｇＡ、Ｃ３水平，使脾抗体分 泌细胞数量及特异性花结形成细胞数量增多： 香菇多糖一定程度上可以提高仔猪对墨白质 ③激活补体系统，调节红细胞免疫：④影响蛋 白质的合成以及抗体的生成；⑤香菇多糖体内 的利用效率，改善体液免疫状况，提高其生产 性能 电喷雾质谱同时测定肉类中的莱克多巴胺 ｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ ｉｎ 的建立【Ｉ１．检验检疫科学，２００８（５）：５３’５６． 与克伦特罗Ⅱ】．肉类工业，２００７（１）：８３，９３． ［１２】聂建荣，洪振涛，连槿，等．ＨＰＬＣ— ＭＳ／ＭＳ快速检测动物尿液中的菜克多巴胺 ｓｗｉｎｅ ｕｒｉｎｅ ｓａｍｐｌｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 【１７１陶文初，范立英，戴绚丽．用 。联免疫 Ｕ］．２００８，１３６：７５１—７５９． ［１５】Ｃｏｌｉｎ ｓ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｓｉｍｏｎ Ａ．Ｈａｕｇｈ— ｅｙ，Ｉｍｅｌｄａ Ｍ．Ｔｒａｙｎｏｒ，ｅｔａｌ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｆｏｒ ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎｓａｍｐｌｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｏ— 法检测猪肉中莱克多巴胺含量［Ｊ Ｊｌ 代农业 科技，２００８（１５）：２８４—２８８． 和克伦特罗Ｕ】．中国兽药杂志，２００８，４２（８）：１７— ２０． 【１８１贾涛，魏秀莲，王有月．酶联 疫法检 测饲料ｑ－莱克多巴胺的探讨卟 料工业， ２００８，２９（４）：４９—５１． ［１３】张志健，王晓菲，戴绚丽．用胶体金免 ｉｒｇｉｎ ｂｙ ＳＰＲ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ａｎｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ 疫层析法检测饲料中莱克多巴胺含量卟安 徽农学通报，２００７，１３００）：５１—１６． ［１４】Ｊｉｎｇ Ｊｉｎ，Ｗｅｉｈｕａ Ｌａｉ，Ｙｏｎｇｈｕａ Ｘｉｏｎｇ， ｅｔ ａ１．Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ—ｂａｓｅｄ ｉｎｎｎｕｎｏｃｈｒｏｍａｔａ一 ［Ｊ１．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｃｔａ，２００８，６０８：２１７— ２２５． ［１９］熊浩山，彭莉，岳秀英，等酶 免疫吸 附法测定猪尿中莱克多巴胺残留 研究… 四川畜牧兽医，２００７（５）：２５—２６． ［１６】刘建，梅琳，林祥梅，等．莱克多巴胺单 克隆抗体的制备及竞争性ＥＬＩＳＡ检测方法 ４４母叵目匮口 ２０１１．８
