鍪 一一班 Ｏｎｌｉｎ ｅ ｓ ｙｓｔｅｍ：…毫ｈｔｐ：／ ｗｗｗ ．ｊａｂｉｏｔ ｅｃｈ ．ｏｒｇ ｇｙ 陆 糍羹熊秘按礁 獭 大口黑鲈高密度脂蛋白结合蛋白基因（ＨＢＰ）ＳＮＰｓ的筛选及与生长 性状关联性分析 周春龙 白俊杰 李胜杰‘樊佳佳 马冬梅 ｌ中国水产科学研究院珠江水产研究所，农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广州５１０３８０；２上海海洋大学生命与水产学 院，上海２０ｌ３０６ 通讯作者，ｊｊｂａｉ＠１６３ ｎｅｔ 摘要 高密度脂蛋白结合蛋白（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＢＰ）在动物的脂肪代谢中发挥 重要的作用。脂类是鱼类的重要能源物质，尤其是那些对糖类利用率很低的肉食性鱼类。ＨＢＰ基因的单 核苷酸多态 Ｉ￣（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＮＰ）可能会影响脂肪代谢，而对大口黑鲈的生长性状产生 影响，研究其ＳＮＰ与生长性状的相关性可为其分子标记辅助选择提供候选标记。本研究根据大口黑鲈 （Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）ＥＳＴ－ＳＮＰ库中ＨＢＰ基因的序￣ｌＪ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＫＦ６５２２４１），用直接测序法 在ＨＢＰ基因３’非编码区获得了３个ＳＮＰｓ位点：Ｈｌ（Ｇ＋２７８２Ｔ），Ｈ２（Ｔ＋２８１７Ｃ）￣ＢＨ３（Ｇ＋２８５７Ａ）；随机选择同 批繁殖、同塘养殖的１６５尾大口黑鲈样本，对３个ＳＮＰｓ位点用ＳｎａＰｓｈｏｔ方法进行检测和分型，分型结果用 软件Ｐｏｐｇｅｎｅ３２进行遗传结构分析；运用软件ｓｐｓｓ１７．０的一般线性模型（ｇｅｎｅｒａｌ ｌｉｎｅａｒｍｏｄｅ１．ＧＬＭ）对获 得的不同基因型与生长性状进行关联分析。结果表明，３个位点均处于哈温平衡，其中Ｈｌ和Ｈ２位点组 成了两种单倍型（Ａ和Ｂ），观测到３种基因型（ＡＡ、ＡＢ和ＢＢ）；Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３共组成６种双倍型（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、 Ｄ４、Ｄ５和Ｄ６）。不同基因型与生长性状的相关性分析显示，基因型ＢＢ在体质量和全长形态指标显著高 于基因型ＡＢ（Ｐ＜０．０５），双倍型Ｄ６在体质量和全长形态指标显著高于双倍型Ｄ４（Ｐ＜０．０５）。本研究在大 口黑鲈ＨＢＰ基因３’非编码区获得了与生长性状相关的ＳＮＰｓ标记，可应用于大口黑鲈分子标记辅助选择 育种。 关键词大口黑鲈，单核苷酸多态 Ｉｌｆ！（ＳＮＰ），高密度脂蛋白结合蛋白基因（ＨＢＰ），单倍型，双倍型 ＳＮＰｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｎｅ （ＨＢＰ）ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｇｒｏｗｔｈ Ｔｒａｉｔｓ ｉｎ Ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ Ｂａｓｓ （Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ） ＺＨＯＵ Ｃｈｕｎ—Ｌｏｎｇ ＇。ＢＡＩ Ｊｕｎ—Ｊｉｅ ＬＩ Ｓｈｅｎｇ—Ｊｉｅ ＦＡＮ Ｊｉａ—Ｊｉａ ＭＡ Ｄｏｎｇ—Ｍｅｉ １ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ＆Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ＆Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｎｃｕｌｔｕｒｅ．Ｐｅａｒｌ Ｒｉｖｅｒ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＦｉｓｈｅｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３８０，Ｃｈｉｎａ；２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１３０６，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，ｊｊｂａｉ＠１６３．ｎｅｔ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｙ ｔｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＨＢＰ）ｐｌａｙｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｆａｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｌｉｐｉｄ ｉｓ ｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ ｔｏ ｆｉｓｈ ｅｎｅｒｇｙ ｍａｔｅｒｉａｌ，ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｖｅｒｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｃａｒｎｉｖｏｒｏｕｓ ｆｉｓｈ ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｌｏｗ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｔｏ ｕｓｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ．Ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ）ｉｎ ＨＢＰ ｇｅｎｅ ｍａｙ ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｆａｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ．Ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＳＮＰ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ 基金项目：国家科技支撑计划（Ｎｏ．２０１２ＢＡＤ２６Ｂ０３）、农业科技成果转化资金项目（Ｎｏ．２０１２ＧＢ２３２６０５６２）和农业部“９４８”计 划重点项目ｆＮｏ．２０１ Ｉ－Ｇ１２１ 收稿日期：２０１３－０８．０６ 接受日期：２０１３—０９．０４ 大口黑鲈高密度脂蛋白结合蛋白基Ｎ（ＨＢＰ）ＳＮＰｓ的筛选及与生长性状关联性分析 ＳＮＰｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＰ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｇｒｏｗｔｈ Ｔｒａｉｔｓ ｉｎ Ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ Ｂａｓｓ … ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｐａｒｔｉａｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ＨＢＰ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｉｅｄ ｂａｓｅｄ ｆｏｎ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｏｎｅ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｃｏｎｔｉｇ ｉｎ ｔｈｅ ＥＳＴ－ＳＮＰ ｄａｔａｂａｓｅ ｏｆ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）．Ｔｈｒｅｅ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ）ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ａｆｔｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｗｅｎｔｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ（Ｈ１：Ｇ＋２７８２ Ｔ，Ｈ２：Ｔ＋２８１７Ｃ，Ｈ３：Ｇ＋２８５７Ａ），ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ Ｙｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ．Ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ＳＮＰｓ，ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ １ ６５ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ ｗｅｒｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ａｓｓａｙｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＳｎａＰｓｈｏｔ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＰＯＰＧＥＮＥ３２ ｓｏｆｗａｒｅ．Ａ ｔｇｅｎｅｒａｌ ｌｉｎｅａｒ ｍｏｄｅｌ（ＧＬＭ）ｗａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＮＰｓ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｒｅｅ ｌｈｏｃｕｓ ｗｅｒｅ ｉｎ Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ．Ｔｈｅ ｓｉｔｅｓ ｏｆ Ｈ １ ａｎｄ Ｈ２ ｆｏｒｍｅｄ ｔｗｏ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ（Ａ ａｎｄ Ｂ）ａｎｄ ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（ＡＡ，ＡＢ，ａｎｄ ＢＢ）．Ｔｈｅ ｓｉｔｅｓ ｏｆ Ｈ １，Ｈ２ ａｎｄ Ｈ３ ｆｏｒｍｅｄ ｓｉｘ ｄｉｐｌｏｔｙｐｅｓ（Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３，Ｄ４，Ｄ５ ａｎｄ Ｄ６）．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｅａｃｈ ＳＮＰ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ．Ｔｈｅ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ＢＢ ａｎｄ ＡＢ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｄｉｐｌｏｔｙｐｅｓ Ｄ２ ａｎｄ Ｄ６ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｒＰ＜０．０５）．Ｏｕｒ ｄａｔａ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ ＨＢＰ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ．Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＳＮＰ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｕｎｄｅｄ ｉｎ ＨＢＰ ｇｅｎｅ Ｙｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｗｅｒｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ，Ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ），Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ（ＨＢＰ），Ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ，Ｄｉｐｌｏｔｙｐｅ ０引言 高密度脂蛋白结合蛋￣ｔ（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＢＰ）普遍存在于成纤维细胞、主动 脉内皮细胞和肝细胞中，它可与高密度脂蛋￣ｔ（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｙ ｌｉｔｐｏｐｒｏｔｅｉｎ．ＨＤＬ）和载脂蛋白ＡＩ （ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＡＩ．ａｐｏＡＩ）结合，参与细胞中脂类的 转运（ＭｃＫｎｉｇｈｔ ｅｔ ａ１．．２００１：Ｋｕｍａｇａｉ ｅｔ ａ１．，２００７）。 对斑马鱼（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）的研究发现，该基因能够 是一种肉质鲜美、生长快、适温广的重要经济淡水 养殖鱼类ｆ李胜杰等，２００７）。本实验室在大口黑鲈 良种选育中已经取得了较好的效果，获得了具有生 长优势的新品种（樊佳佳等，２０１２），为了进一步缩 短育种周期，提高选择的效率，拟采用分子标记辅 助选择方法对大口黑鲈的生长性状继续进行选 育。本研究以ＨＢＰ基因作为大口黑鲈生长性状的 候选基因，通过直接测序法检测ＳＮＰ，并与生长相 关性状进行关联分析，以期获得与大口黑鲈体质 量、体长等生长性状相关联的ＳＮＰ标记，为下一步 大口黑鲈分子标记辅助提供候选标记。 脂类的转移，并且对脂类的摄食效率有影ｎＩ￣（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａ１．，２００３）。脂类是鱼类重要的能源物质，为鱼类 提供生长发育的能量和必须脂肪酸，尤其是那些对 糖类利用率很低的肉食性鱼类，但是食物中过多的 １材料与方法 脂肪不仅会造成鱼类的脂肪肝，也会使鱼类的生长 减缓（梁洪，钱云霞，２００７；涂永芹等，２０１２）。对春鲤 （Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｌｏｎｇｉｐｅｃｔｏｒａｌｉｓ），尖吻鲈（Ｌａｔｅｓ ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ）， １．１材料 用于筛选ＳＮＰｓ位点的样本来源于珠江水产研 Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ 长吻觥（Ｌｅｉｏｃａｓｓｉｓ ｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ Ｇｕｎｔｈｅｒ）的研究进一步 究所水产良种基地养殖的大口黑鲈（ｍｏｉｄｅｓ），取２０尾鱼的鳍条样本，一２０℃保存于无 说明饲料中高的脂肪含量对生长不利（涂永芹等， ｓａｌ２０１２；Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａ１．，２００３；Ｐｅｉ ｅｔ ａ１．，２００４）。但鱼 水乙醇中。 脂肪代谢相关基因的突变会影响其对脂肪的代谢 生长性状关联性分析的大口黑鲈样品采白广 乃至影响生长 ０小献等，２０１２）。鉴于船Ｐ在脂类 东省佛山市九江镇金汇农场。于２０１１年１２月，选 转移和代谢中的重要作用，推测ＨＢＰ基因的突变 择亲鱼约５００尾放入一个面积为８００ ｍ 进行培育 会影响鱼类对脂肪的消化和吸收，对鱼类的生长产 及繁殖，翌年４月１５日共收集约１００万受精卵，并 生影响。 集中放于面积为ｌ０ ｍ２的水泥池中孵化，然后将孵 大口黑鲈（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）俗称加州鲈， 化出的鱼苗转入池塘中进行人工培育，将培育出的 ２３４ … ｇｙ 大口黑鲈鱼种约６万尾放入一个面积为５ ３３６ ｍ 大 某性状第ｉ个标记在第 个体上的观测值； 表示实 表示 塘中饲养。于２０１２年ｌ２月从该池塘中随机选择大 验观测所有个体的平均值（即总体平均值）；Ｂ 口黑鲈成鱼１６５尾，测量体质量、全长、体长、体高、 第ｉ个标记的效应值；％表示对应个体观测值的随 尾柄长和尾柄高６项形态指标，同时剪取尾鳍放入 机残差效应。酒精一２０℃保存。 １．２ ＳＮＰｓ位点筛选 ２．１ ＨＢＰ基因部分序列的ＳＮＰ位点获得和分析 用广州欣研生物科技有限公司９６孔板组织 ＤＮＡ提取试剂盒提取组织ＤＮＡ。根据ＨＢＰ基因 ＰＣＲ扩增获得６３９ ｂｐ的片段并进行测序。将 ２结果与分析 （ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＫＦ６５２２４１）序列设计上下 游引物： Ｆ：５＇－ＣＧＣＴＧＡＡＴＡＴＡＡＣＴＣＴＴＡＣＡＡＧＡＣＧ一３’： Ｒ：５’一ＡＧＣＧＡＧＴＧＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＧＡＧＴＧＡ．３’。 委托广州吉格生物科技有限公司合成。ＰＣＲ 反应体系为２０ ，包括５０ ｎｇ的模板ＤＮＡ，１０ ｇＬ ２ｘＴａｑ ＰＣＲ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ，上、下游引物（２０ ｐｍｏｌ／ｇＬ） 各０．５ ｇＬ，加ｄｄＨ Ｏ至２０ ｇＬ。ＰＣＲ扩增程序为 ９４℃３ ｍｉｎ；９４℃３０ Ｓ，６１．３℃３０ Ｓ，７２℃３０ Ｓ，共３０ 个循环；７２℃７ ｍｉｎ，最后４℃保存。用１．５％琼脂 糖凝胶电泳对扩增产物进行检测，扩增片段委托上 海博尚生物技术有限公司进行测序，测序结果运用 软件Ｂｉｏ Ｅｄｉｔ进行比对和筛选ＳＮＰｓ位点。 １．３ ＳｎａＰｓｈｏｔ分型 提供１６５尾大口黑鲈样品的鳍条ＤＮＡ和已获 得的３个ＳＮＰｓ位点序列信息，委托上海捷瑞生物 工程有限公司用ＳｎａＰｓｈｏｔ方法分型。ＳｎａＰｓｈｏｔ分 型的步骤如下：根据测序获得的３个ＳＮＰｓ位点信 息，用ｐｒｉｍｅｒ ５软件设计引物ｆ引物由上海捷瑞公司 合成）进行多重ＰＣＲ扩增；取３ ｇＬ ＰＣＲ扩增产物用 ＥｘｏＩ和ＦａｓｔＡＰ纯化，分别用于除去产物中剩余的 引物和ｄＮＴＰ；根据ＡＢＩ公司提供的ＳｎａＰｓｈｏｔ试剂 盒，取纯化后的产物按试剂盒说明进行延伸反应； 然后在ＡＢＩ ３７３０ＸＬ测序仪上进行检测：取１ ｇＬ的 延伸产物，然后加８ ｕＬ上样ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ，在９５℃ 变性３ ｍｉｎ后立即进行冰水浴。 １．４数据统计分析 采用ＳＰＳＳ１７软件一般线性模型（ｇｅｎｅｒａｌ ｌｉｎｅａｒ ｍｏｄｅｌ，ＧＬＭ）中的多元方差分析模块进行相关分 析，因变量为体质量、全长、体长、体高、尾柄长和尾 柄高６个形态性状，自变量为筛选到的ＳＮＰｓ位点 的不同基因型。其模型为Ｙｏ＝ｌｘ＋Ｂ ＋ 其中 表示 测序结果比对获得３个ＳＮＰ位点，见图１。３个位点 均位于３ 非编码区，以起始密码子ＡＴＧ第一个碱基 为１，分别命名为Ｈｌ（Ｇ＋２７８２Ｔ）、Ｈ２（Ｔ＋２８１７Ｃ）和Ｈ３ （Ｇ＋２８５７Ａ）。 ２．２ ＨＢＰ基因上ＳＮＰｓ位点在群体中的遗传结构分析 运用ＳｎａＰｓｈｏｔ分型技术对１６５尾大口黑鲈进 行分型，分型结果采用Ｐｏｐｇｅｎｅ３２软件进行处理， 获得了３个ＳＮＰｓ突变点的遗传参数见表１。从表１ 中可见，Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３的遗传多态信息含量 （ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ， Ｃ）分别为 ０．３７０１、０．３７０１和０．３６４８，根据ＰＩＣ值介于０．２５～０．５０ 之间为中度多态，可知３个多态性位点（Ｈ１、Ｈ２和 Ｈ３）都属于中度多态位点，且均处于Ｈａｒｄｙ． Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。 ＳＮＰ位点基因型及等位基因频率的统计结果 见表２。Ｈ１位点碱基Ｇ和Ｈ２位点的碱基Ｔ连锁， 组成单倍型Ａ，Ｈ１位点碱基Ｔ和Ｈ２位点碱基Ｃ连 锁，组成单倍型Ｂ，Ｈ１和Ｈ２位点共同组成ＡＡ、ＡＢ 和ＢＢ ３种基因型；Ｈ３位点有ＡＡ、ＡＧ和ＧＧ三种碱 基组合，分别命名为ＡＡ、ＡＢ和ＢＢ ３种基因型。 ２．３ ＨＢＰ基因的Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３位点与生长性状 相关性分析 运用ＧＬＭ进行关联分析，Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３位点与 生长性状相关性结果见表３。Ｈ１和Ｈ２位点共同组 成３种基因型，分别ＡＡ、ＡＢ和ＢＢ。ＢＢ基因型个 体测量的６个生长性状（体质量、全长、体长、体高、 尾柄长、尾柄高１的平均表型值均高于ＡＢ型和ＡＡ 型个体的均值，其中ＢＢ型与ＡＢ型在体质量和全 长上存在显著差异ｆＰ＜Ｏ．０５），而ＡＡ型个体各生长 性状均值与ＡＢ型和ＢＢ型个体的均值均不存在显 著差异（Ｐ＞Ｏ．０５）；Ｈ３位点不同基因型个体间的生 长性状均不存在显著差异（Ｐ＞Ｏ．０５ 。 Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３位点共同组成６种双倍型：Ｄ１ … 农业生物技术学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３ ６ 表中数值为Ｘ＋＿ＳＥ，同一列不同上标字母表示差异显著（Ｐ＜０．０ｓ），下同 Ｄａｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｔａｂｌｅ ａｒｅ Ｘ＋ＳＥ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ＜０．０５，ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅ— ｌｏｗ 表４ ＨＢＰ基因双倍型与生长－陛状的相关性 Ｔａｂｌｅ ４ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＰ ｇｅｎｅ ｄｉｐｌｏｔｙｐｅｓ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ Ｈ１、Ｈ２和Ｈ３：ＳＮＰ位点 Ｈ１，Ｈ２ ａｎｄＨ３：ＳＮＰ ｓｉｔｅ 点与性状的关联性（Ｄａｌｙ ｅｔ ａ１．，２００１；张森，李辉， 长性状的影响作用随着位点数的增加而提高。这 ２００７）。在大口黑鲈（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）ＩＧＦＩＩ基 可能由于不同的ＳＮＰｓ之间存在相互作用，多个突 因上发现了４个ＳＮＰｓ位点，单个位点与生长性状 变位点间的相互作用可能会大于一个位点的作用。 关联分析发现无显著性差异，通过单倍型分析发现 本研究筛选出的３个ＳＮＰｓ位于ＨＢＰ基因３’端 基因型Ｈ１Ｈ３和Ｈ１Ｈ５的双倍型与其它的双倍型存 非编码区，将其与生长性状进行关联分析，结果显 在显著差异（Ｐ＜０．０５）（Ｌｉ ｅｔ ａ１．，２０１２）。在罗非鱼 示，其对生长性状具有影响作用。ｍＲＮＡ ３’非编码 （Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）黑素皮质素受体．４基因 区虽然不编码氨基酸，但其在基因表达中具有 （ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ一４，ＭＣ４Ｒ）￣ｒＪ大口黑鲈肌肉生 重要的作用。３’区不仅能ｍＲＮＡ稳定性 长抑制素基因ｆｍｙｏｓｔａｔｉｎ．ＭＳＴＮ）的研究中采用单 和降解速率以及ｍＲＮＡ的利用效率，而且还在特 倍型的分析方法，也获得了与生长性状相关的标记 定氨基酸的编码过程中起指导作用（王莹，刘定干， ｆ刘福平等，２００９；于凌云等，２０１０）。本研究采用单 ２００８）。对Ｂ族Ｉ型清道夫受体基因ｆｓｃａｖｅｎｇｅｒ 位点分析和单倍型分析的方法对大口黑鲈ＨＢＰ基 ｃｌａｓｓ Ｂ ｔｙｐｅ Ｉ，ＳＲ．ＢＩ）的研究发现，３＇ＵＴＲ对其 因筛选的３个ＳＮＰｓ标记与其生长性状进行关联分 ｍＲＮＡ的稳定性有显著影响（Ｐ＜０．０５），是 一Ｂ，基 析。结果显示，单个位点的不同基因型与生长性状 因转录后水平的关键ｆ王丽等 ２０１３）。功能基 不存在显著性差异；单倍型分析发现不同基因型与 因中３’非编码区碱基的突变或缺失可通过影响正 生长性状存在显著差异ｆＰ＜０．０５），且候选标记对生 常的剪切和拼接而导致基因表达量的变化甚至功 大口黑鲈高密度脂蛋白结合蛋白基因（ＨＢＰ）ＳＮＰｓ的筛选及与生长性状关联性分析 Ｓ Ｐｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢｐ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｇｒｏｗｔｈ Ｔｒａｉｔｓ ｉｎ Ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ Ｂａｓｓ ．． ‘Ｊ｜ 能的丧失（Ｋａｍｂａｄｕｒ ｅｔ ａ１．，１９９７）。在草鱼载脂蛋白 因型（ＡＡ、ＡＢ和ＢＢ）；ＨＩ、Ｈ２和Ｈ３共组成６种双倍 Ａ—Ｉ一１基因３’非编码区发现２个ＳＮＰｓ位点，其组成 型（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５和Ｄ６）。不同基因型与生长 的双倍型Ｄ３和Ｄ６在体长、体高和头长均存在显著 性状的相关性分析显示，基因型ＢＢ在体质量和全 ０５），双倍型 差异（Ｐ＜０．０５），双倍型Ｄ３可作为草鱼分子标记辅 长形态指标显著高于基因型ＡＢ ＜０．助选择的候选标记ｆ刘小献等，２０１２）。在其他动物 Ｄ６在体质量和全长形态指标显著高于双倍型Ｄ４ 中也发现不同基因３’区的ＳＮＰｓ会对基因的功 ＜０．０５）。本研究在册Ｐ基因上获得与生长性状 能产生影响，而造成性状差异ｆ顾志良等，２００２； 相关的ＳＮＰｓ标记，可应用于大口黑鲈分子标记辅 Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａ１．。２ＯＯ１）。本研究也表明，ＨＢＰ基因的３’非 助选择育种。编码区多态性引起ＨＩ和Ｈ２位点组成的基因型ＢＢ 在体重和全长性状显著优于ＡＢ型ｆＰ＜０．ｏ５）；Ｈ１、 Ｈ２和Ｈ３位点组成的双倍型Ｄ６在体重和全长性状 显著优于双倍型Ｄ４（Ｐ＜０．０５）。 基因的基因型存在纯合和杂合基因型，已有研 究也表明，两者都有可能成为劣势基因型。如建鲤 生长激素受体基因上的５个ＳＮＰ位点多态性与生 长性状关联分析结果显示，５个位点的多态性均与 增重显著相关（Ｐ＜Ｏ．０５），并且增重快的基因型除了 一个位点为杂合型外，其他４个均为纯合型ｆ陶文静 等，２０１１）。建鲤胰岛素样生长因子一Ｉ基因第４内含 子上的ＳＮＰ位点与增重关联分析也发现其劣势基 因型为杂合型（李红霞等，２０１２）。本研究结果显 示，Ｈ１和Ｈ２组成的基因型杂合ＡＢ型经关联分析 为劣势基因型，推测可能是两个等位基因之间存在 相互抑制的作用，而引起杂合基因型在体质量和全 长性状上劣于纯合基因型。 对鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａｊａｐｏｎｉｃａ）的研究指出ＨＢＰ作 为配体特异性的与载脂蛋白（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＡＩ， ａｐｏＡＩ）结合，能够脂类的转运过程（Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａ１．，２００１）。对斑马鱼（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）ＨＢＰ基因的研究 表明册Ｐ基因在摄食脂肪能量的积累和脂类的转 移中发挥重要作用（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａ１．，２００３）。基于船Ｐ 基因在脂类的代谢中有重要的作用，我们推断该基 因的变异会影响大口黑鲈对脂肪的利用，而对大口 黑鲈的生长性状产生影响。 ４结论 ＨＢＰ基因在动物的脂肪代谢中的发挥重要作 用。本研究以该基因作为研究目标，采用直接测序 法筛选到３个位于基因３ 非编码区的ＳＮＰ位点，进 一步用ＳｎａＰｓｈｏｔ方法分析这３个ＳＮＰｓ位点在同批 繁殖、同塘养殖的大口黑鲈群体中的基因型，Ｈ１和 Ｈ２位点组成了两种单倍型（Ａ和Ｂ），观测到３种基 参考文献 樊佳佳，白俊杰，李胜杰，等．２０１２．大口黑鲈“优鲈１号”选 育群体肌肉营养成分和品质评价［Ｊ］．中国水产科学， １９（３）：４２３—４２９．（Ｆａｎ Ｊ Ｊ，Ｂａｉ Ｊ Ｊ，Ｌｉ Ｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．２０１２． Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｖｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｍｕｓｃｌｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓｓａｌｍｏｉｄｅｓ，“Ｙｏｕｌｕ Ｎｏ．１”［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆＣｈｉｎａ，１９（３）：４２３－４２９．） 顾志良，张海峰，朱大海，等．２００２．鸡Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因单核苷 酸多态性的群体遗传学分析［Ｊ］．遗传学报，２９（７）：５６５— ５７０．（Ｇｕ Ｚ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｈ Ｚｈｕ Ｄ Ｈ，ｅｔ ａ１．２００２．Ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｉｃｋｅｎ Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｈｉｃｋｅｎ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｇｅｎｅｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２９（７）：５６５－５７０．） 李红霞，刘楠楠，蒲天宁，等．２０１２．建鲤ＩＧＦ－Ｉ ａ基因的 ＳＮＰｓ位点筛选及其与增重的相关性分析［Ｊ］．上海海 洋大学学报，２ｌ（１）：７—１３．（Ｌｉ Ｈ Ｘ Ｘ，Ｌｉｕ Ｎ Ｎ，Ｐｕ Ｔ Ｎ， ｅｔ ａＩ．２０ １ ２．ＳＮＰｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ ｏｆ ＩＧＦ—Ｉ ａ ｉｎ Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ ｖａｒ．ｊｉａｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２１ （１）：７－１３．） 李胜杰，白俊杰，叶星，等．２００７．加州鲈肌肉生长抑制素 （ＭＳＴＮ）ｃＤＮＡ的克隆和序列分析【Ｊ］．海洋渔业，２９ （１）：１３—１９．（Ｌｉ Ｓ Ｊ，Ｂａｉ Ｊ Ｊ，Ｙｅ Ｘ，ｅｔ ａ１．２００７．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ｉｎ ｌａ￣ｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓｓａｌ ｍｏｉｄｅｓ）［Ｊ］．Ｍａｒｉｎｅ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ，２９（１）：１３—１９．） 梁洪，钱云霞．２００７．食物对养殖鱼类脂肪代谢的影响［Ｊ］．水 产科学，２６（９）：５２１—５２４．（Ｌｉａｎｇ Ｈ，Ｑｉａｎ Ｙ ｘ．２００７．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｏｏｄ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｉｓｈ［Ｊ］． Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６（９）：５２１・５２４．） 刘福平，白俊杰，叶星，等．２００９．罗非鱼ＭＣ４Ｒ基因克隆及 与其生长相关的ＳＮＰｓ位点［Ｊ］．中国水产科学，１６（６）： ８１６—８２３．（Ｌｉｕ Ｆ Ｐ，Ｂａｉ Ｊ Ｊ，Ｙｅ Ｘ，ｅｔ ａ１．２００９．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＭＣ４Ｒ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＮＰｓ ｏｆ ＭＣ４Ｒ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔ ｉｎ ｔｉｌａｐｉａ（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，１ ６ （６）：８１６－８２３．） ２３８ … ｇｙ 刘小献，白俊杰，于凌云，等．２０１２．草鱼载脂蛋白４．，＿Ｊ基因３’ 非编码区ＳＮＰｓ筛选及其与生长性状的关联分析［Ｊ］．大 连海洋大学学报，２７（１）：１２—１７．（ＬｉｕＸＸ，Ｂａｉ Ｊ Ｊ，Ｙ＿ｕＬ ｅｔ ａ１．２０１２．ＳＮＰｓ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ３＇ＵＴＲ ｉｎ ａｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ—Ｉ－ ，ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ ｇｒａｓｓ ｃａｒｐ Ｐａｒｔ Ｂ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１ ３６ｆ １）： １１７—１３０． Ｄａｌｙ Ｍ Ｊ，Ｒｉｏｕｘ Ｊ Ｄ，Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ Ｓ ｅｔ ａ１．２００１．Ｈｉｇｈ— ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２９（２）：２２９—２３２． Ｊｉａｎｇ Ｚ Ｈ，Ｇｉｂｓｏｎ Ｊ Ｐ，Ａｒｃｈｉｂａｌｄ Ａ Ｌ，ｅｔ ａ１．２００ １．Ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ—ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ ｌＪ１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｌｉａｎ Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２７（１）：１ ２—１ ７．） 陶文静，马龙俊，阮瑞霞，等．２０１１．建鲤ＧＨＲ基因多态性及 与增重相关的ＳＮＰ位点的筛选川．水生生物学报，３５ （４）：６２２—６２９．（Ｔａｏ Ｗ Ｊ，Ｍａ Ｌ Ｊ，Ｒｕａｎ Ｒ Ｘ，ｅｔ ａ１．２０１１． （ＧｎＲＨＲ）：Ｇｅｎｏｍｉｃ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｐｏｒａ ｌｕｔｅａ［Ｊ］． ＳＮＰ ｌｏｃｉ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ ｖａｒ．ｊｉａｎ［Ｊ］． Ａｃｔａ Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃ，３５（４）：６２２—６２９．） 涂永芹，韩冬，朱晓鸣，等．２０１２．饲料中不同蛋白、脂肪水平 对春鲤生长、饲料利用和体成分的影响ｌ Ｊ１．水生生物 学报３６（５）：８４３—８５０．（Ｔｕ Ｙ Ｑ，Ｈａｎ Ｄ，Ｚｈｕ Ｘ Ｍ，ｅｔ ａ１． ２０ １ ２．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｏｄｙ ｃｏｍ ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ，ｆｅｅｄ Ｃｙｐｒｉｎｕｓ Ｉｏｎｇｌｐｅｃｔｏｒａｌｉｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃ，３６（５）： ８４３—８５０．） 王海震，王莹，刘定一Ｆ．２００８，真核生物ｍＲＮＡ３’非翻译区的 功能ｆＪ］．生物化学与生物物理进展，３５（９）：９８０—９８５． （Ｗａｎｇ Ｈ Ｚ，Ｗａｎｇ Ｙ＿Ｌｉｕ Ｄ Ｇ．２００８．Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆｔｈｅ ３’ ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｍＲＮＡ［Ｊ］．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，３５（９）：９８０—９８５．） 王丽 贾晓健，姜华军，等．２０１３．人高密度脂蛋白受体基因 ３ｔ ＵＴＲ对其ｍＲＮＡ稳定性的影ｎＮ［Ｊ］．中国医药生物技 术，８（１）：２９—３５．（Ｗａｎｇ Ｌ，Ｊｉａ Ｘ Ｊ，Ｊｉａｎｇ Ｈ Ｊ，ｅｔ ａ１．２０１３． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ３’ＵＴＲ ｏｆ ｓｃａｖｅｎｇｅｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｌａｓｓ Ｂ ｔｙｐｅ Ｉ ｇｅｎｅ ｏｎ ｉｔｓ ｍＲＮＡ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８（１）：２９—３５．） ：ｊ 凌云，白俊杰，樊佳佳，等．２０１０．大口黑鲈肌肉生长抑制 素基因单核苷酸多态性位点的筛选及其与生长性状 关联性分析ｌ Ｊ１．水产学报，３４（６）：６６５—６７１．（Ｙｕ Ｌ Ｂａｉ Ｊ Ｊ．Ｆａｎ Ｊ Ｊ ｅｔ ａ１．２０１０．ＳＮＰｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ［Ｊ］．Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４（６）：６６５—６７１．） 张森，李辉．２００７．单倍型在ＱＴＬ检测中的应用研究［Ｊ］．中 国农业科学，４０（４）：８１５—８２０．（Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｌｉ Ｈ．２００７．Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＱＴＬ ｂｙ ａｐｐｌｙｉｎｇ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ［Ｊ］． Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ，４０（４）：８ １ ５－８２０．） Ｃｈｅｎ Ｊ．Ｃｈｅｎ Ｊ．Ｗｕ Ｊ．２００３．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｚｅｂｒａ ｆｉｓｈ ｈｉｇｈ・－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ Ｇｅｎｏｍｅ，４４（１）：７—１２． Ｋａｍｂａｄｕｒ Ｒ，Ｓｈａｒｍａ Ｍ，Ｓｍｉｔｈ Ｔ Ｐ，ｅｔ ａ１．１９９７．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｙｏｓｔａｔｉｎ（ＧＤＦ８）ｉｎ ｄｏｕｂｌｅ—ｍｕｓｃｌｅｄ Ｂｅｌｇｉａｎ Ｂｌｕｅ ａｎｄ Ｐｉｅｄｍｏｎｔｅｓｅ ｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７（９）： ９１０—９１６． Ｋａｔｏｈ Ｈ Ｐｉｎｇ Ｇｅ Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａ１．２００１ Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｅｅｌ似ｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ） ｌｉｖｅｒ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｙｔ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ａｐｏＡＩ ａｓ ａ ｌｉｇａｎｄ ［Ｊ］＇Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ Ｐａｒｔ Ｂ： Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １２９（４）：８４３—８５２． Ｋｕｍａｇａｉ Ａ，Ｃｈｉｓａｄａ Ｓ，Ｋａｍｅｉ ｅｔ ａ１．２００７．Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ ｅｅｌ ｓｅｒｕｍ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ【ＨＤＬ）ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ａｓ ａ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ＨＤＬ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］． Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ Ｐａｒｔ Ｂ： Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １４７（４）：６３５—６４４． Ｌｉ Ｘ Ｈ，Ｂａｉ Ｊ Ｊ，Ｈｕ Ｙ Ｃ，ｅｔ ａ１．２０１２．Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ，ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｄｉｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ＩＧＦ—ｌＩ ＳＮＰｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ （Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓｓａｌｍｏｉｄｅｓ）［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｒｅｐｏｒｔｓ，３９ （４）：４３５９—４３６５． ＭｃＫｎｉｇｈｔ Ｇ Ｌ，Ｒｅａｓｏｎｅｒ Ｊ，Ｇｉｌｅｒｔ Ｌ ｅｔ ａ１．１ ９９２．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｉｓ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２６７（１７１： １２１３１—１２１４１． Ｐｅｉ Ｚ，Ｘｉｅ Ｓ，Ｌｅｉ Ｗ，ｅｔ ａ１．２００４．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｌｉｐｉｄｓ ｌｅｖｅｌ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｇｉｂｅｌ ｃａｒｐ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｇｉｂｅｌｉｏ）ａｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｌｏｎｇｓｎｏｕｔ ｃａｔｉｆｓｈ（Ｌｅｉｏｃａｓｓｉｓ ｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ Ｇｕｎｔｈｅｒ）［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１０（４）：２０９—２１６． Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｋ Ｃ，Ｂａｒｌｏｗ Ｃ Ｇ，Ｒｏｄｇｅｒｓ Ｌ，ｅｔ ａ１．２００３．Ａｓｉａｎ ｓｅａｂａｓｓ ｌａｔｅｓ ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ ｐｅｒｆｏｒｍ ｗｅｌｌ ｗｈｅｎ ｆｅｄ ｐｅｌｌｅｔｅｄ ｄｉｅｔｓ ｈｉｇｈ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２２５（１—４）： １９１—２０６． （责任编辑靳晓霞）
