重庆医科大学学报２０１５年第４０卷第８期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１５．Ｖｏ１．４０ Ｎｏ．８） 一１ １ １ ３一 ＤＯＩ：１０．１３４０６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｙｘｂ．０００５５３ 鼻咽上皮细胞中过表达ＰＩＮ１激活ＪＮＫ信号通路 上调ＣｙｃｌｉｎＤ１的研究 徐（１．遵义医学院珠海校区口腔系，珠海萌 ，李五一 ，罗国炜。 ５１９０００； ５１９０４１；２．遵义医学院附属第五（珠海）医院口腔科，珠海３．中文大学病理解剖及细胞学系，威尔斯亲王医院，华南国家肿瘤重点实验室，新界） 【摘要】目的：研究肽脯氨酰异构酶ＰＩＮ１（ｐｒｏｌｙｌｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＩＮ１）可能影响的肿瘤信号通路和相关基因，探讨鼻咽癌早期发生发 展的机制。方法：运用慢病毒表达系统在鼻咽上皮细胞系ＮＰ６９中建立ＰＩＮ１过表达细胞克隆株，ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检 测ＰＩＮ１表达情况；肿瘤信号通路阵列荧光素酶实验筛选ＰＩＮ１可能影响的细胞信号通路，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ加以验证。结果：稳定表 达ＰＩＮ１的ＮＰ６９细胞可激活一系列肿瘤信号通路其中激活丝裂原活化蛋白激酶ＭＡＰＫ／ｃ－Ｊｕｎ氨基末端激酶ＪＮＫ（ＭＡＰＫ／ＪＮＫ） 信号通路，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１），核转录因子一ＫＢ（Ｐ＝０．０３６）、癌基因Ｍｙｃ（Ｐ＝０．０４８）信号通路变化具有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）。Ｗｅｓｔｅｎ ｒｂｌｏｔ结果显示与对照组相比，稳定表达ＰＩＮ１的ＮＰ６９实验组可明显上调ＪＮＫ信号通路重要的下游转录因子ｅ— Ｊｕｎ、Ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｒ６３、ｃ－ＪｕｎＳｅｒ７３的表达量，最终上调下游基因细胞周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１（ 一７．２９５，Ｐ＝－０．００２）的表达。结论：稳定表达 ＰＩＮ１的ＮＰ６９细胞可激活ＭＡＰＫ／ＪＮＫ信号通路，明显上调ＪＮＫ信号通路重要的下游转录因子ｃ＿Ｊｕｎ、ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｔ６３、ｃ－ＪｕｎＳｅｒ７３的 表达量，最终上调下游基因细胞周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达，ＰＩＮ１与鼻咽癌早期的发生发展密切相关。 【关键词】慢病毒载体；ＰＩＮ１；ＮＰ６９细胞；ＪＮＫ信号通路；ＣｙｃｌｉｎＤ１；鼻咽癌 【中图分类号】Ｒ７３ 【文献标志码】Ａ 【收稿日期】２０１４—０９—１９ ＰＩＮ１ ＯＶｅｒｅｘｐｒｅＳＳｉＯｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ＪＮＫ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＣｙｃｌｉｎＤ１ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｃｅｌｌ Ｘｕ Ｍｅｎ Ｌｉ Ｗｕｙｉ２ Ｌｕｏ Ｋｗｏｋｗａｉ３ （，．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｚｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｕｈａｉ Ｃａｍｐｕｓ；２．Ｄｅｐａｒｔｅｎｔｍ ｆＳｔｏｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｎｏ．５ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔｌａ ｏｆＺｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＡｎａｔｏｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌｒ ａＰａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏａｔｏｒｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ，Ｐｒｉｎｃｅ ｏｆＷａｌｅｓ Ｈｏｓｐｉｔｌ，Ｔｈｅａ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆＨｏｎｇＫｏｎｇ）ｏ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｌｙｌｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ＰＩＮ１）ｍａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＰＩＮ１ ｏｖｅｒｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ＮＰ６９ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｔｉ－ｖｉｒａｌ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｔｈｅ ＰＩＮ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｑ－ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｔｈｅｎ ＰＩＮＩ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ １０－ｐａｔｈｗａｙ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ａｓｓａｙ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ： ＰＩＮ１ ｏｖｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａ ｃｅｌｌ ｍａｙ ａｃｔｉｖａｔｅ ａ ｓｅｒｉｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｉａｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＭＡＰＫ／ＪＮＫ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈ ｗａｙ，ＮＦ－ＫＢ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ Ｍｙｃ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ＮＰ６９－Ｌｅｎｔｉ— ＰＩＮ１ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｈｉｇｈｅｒ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｃ－Ｊｕｎ，Ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｒ６３，ｃ—ＪｕｎＳｅｒ７３ ａｎｄ ＣｙｃｌｉｎＤ１（ｔ＝－７．２９５，Ｐ＝０．００２）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｈｅ Ｔｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＩＮ１ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＣｙｃｌｉｎＤ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｈｅ ＭＡＰＫ／ＪＮＫ ｐａｔｈｗａｙ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ—Ｊｕｎ ａｔ Ｓｅｔ６３ ａｎｄ Ｓｅｒ７３．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ＰＩＮ １ ｍａｙ ｃｏｎｔｉｂｕｔｒｅ ｔｏ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｌｅｎｔｉ－ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ；ＰＩＮ１；ＮＰ６９ ｃｅｌｌ；ＪＮＫ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ；ＣｙｃｌｉｎＤ１；ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ 作者介绍：徐萌，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｍｅｎｇｇｒｅ＠１６３．ｃｏｍ， 研究方向：头颈部肿瘤研究。 通信作者：罗国炜，Ｅｍａｉｌ：ｋｗｏｋｗａｉｌｏ＠１６３．ｃｏｒｎ。 基金项目：遵义医学院博士启动基金Ｆ６６４：贵州省科技创新人才团 队建设项目（编号：黔科合人才团Ｆ＆（２０１３）４０２６）。 优先出版：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／５０．１０４６．ｒ．２０１５０３１０．２１４５．００６．ｈｔｍｌ （２０１５—０３—１０） 一１ １ １ ４一 重庆医科大学学报２０１５年第４０卷第８期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１５．Ｖｏ１．４０ Ｎｏ．８） 肿瘤发生是一个复杂的过程．涉及一系列基因 及信号转导通路的异 ”．包括癌基因的激活以及 抑癌基因的失活等。肽脯氨酰异构酶ＰＩＮ１（ｐｒｏｌｙｌｉ— ｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＩＮ１）可特异性地催化蛋白质中磷酸化的 ＳｅｒＦｆｈｒ－Ｐｒｏ酰胺键的顺反异构，改变蛋白质的构象； 蛋白质的活性、磷酸化状态、蛋白与蛋白的相 互作用、蛋白的稳定及亚细胞定位：调节一系列与 Ｓｅｒｉｎｅ—ｔｈｒｅｏｎｉｅ相关的细胞信号通路、激活一系列肿 瘤基因、生长因子、抑制抑癌基因和生长抑制因子， 促进肿瘤的发生［２－４］。研究显示ＰＩＮ１可以在前列腺 癌、宫颈癌、恶性黑色素瘤等多种肿瘤中高表达，且 ＰＩＮ１的高表达预示着较差的预后和较短时间的肿 瘤复发翻。课题组前期免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ研究显 示ＰＩＮ１在鼻咽癌组织中高表达。提示ＰＩＮ１与鼻咽 癌的发生发展密切相关。为了研究ＰＩＮ１在鼻咽癌 中的潜在作用，课题组运用慢病毒表达系统在鼻咽 上皮细胞系ＮＰ６９中建立ＰＩＮ １过表达细胞克隆株， 研究ＰＩＮ１可能影响的肿瘤信号通路和相关基因。 １材料与方法 １．１材料 正常鼻咽上皮细胞株ＮＰ６９、２９３ＴＮ细胞，由中文大 学鼻咽癌研究室保存。角质形成细胞无血清培养基（ｋｅｒ— ａｔｉｎｏｃｙｔｏ ｓｅｎｎ—ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ，ＫＳＦＭ）、牛脑垂体提取液（ＢＰＥ）、 重组表皮生长因子（ｒＥＧＦ）购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＲＰＩＭ１６４０培 养液购自Ｓｉｇｍａ公司，１０％胎牛血清购自Ｇｉｂｉｃｏ公司。Ｌｉｐｏ— ｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００脂质转染试剂，ＯＰＴＩ—ＭＥＭ ｍｅｄｉｕｍ购自Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司。Ｌｅｎｔｉ Ｓｔａｒｔｅｒ ｋｉｔ第三代慢病毒包装系统， 购自Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司。ＲＮＡ抽提试剂ＴＲＩＺＯＬ，购自 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，ＲＴ—ｑＰＣＲ试剂盒，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ相关试剂及 Ｈ：Ｏ 溶液购自Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司。ＢＣＡ蛋白含量测定试 剂盒，购自Ｐｉｅｒｃｅ公司。ＰＩＮ１引物和１３－ａｅｔｉｎ引物由Ｌｉｆｅ Ｔｅｅｈ— ｎｏｌｏｇｉｅｓ公司合成。慢病毒载体质粒ｐＣＤＨ—ＣＭＶ—ＭＣＳ—ＥＦ１一 ｃｏｐＧＦＰ－ＰＩＮ１（ｐＣＤＨ－ＰＩＮ１）及ｐＣＤＨ—ＣＭＶ－ＭＣＳ—ＥＦ１一ｃｏｐ ＧＦＰ（ｐＣＤＨ）由大学Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔａ Ｐａｎｇ惠赠。肿瘤信号通 路阵列荧光素酶试剂盒Ｃａｎｃｅｒ １０一Ｐａｔｈｗａｙ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｌｕ— ｃｉｆｅｒａｓｅ Ｋｉｔ购自ＳＢＩ公司。Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ Ｒｅａｇｅｎｔ，购自Ｒｏｃｈｅ公 司。荧光素酶报告基因实验试剂盒（Ｄｕａｌ—Ｌｕｅｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ），购自Ｐｍｍｅｇａ公司。兔源性一抗ＰＩＮ１购自Ｃａｌ— ｂｉｏｃｈｅｍ公司，羊源性一抗ｐ—ａｃｔｉｎ购自Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司，兔源 性一抗ｃ—Ｊｕｎ、ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｒ６３、ｃ—ＪｕｎＳｅｒ７３购自Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公 司。相对应二抗购自Ｄａｋｏ公司。 １．２方法 １．２．１慢病毒转染系统构建稳定的ＰＩＮ１过表达鼻咽癌上皮 细胞株（ＮＰ６９一Ｌｅｎｔｉ—ＰＩＮ１） 将３×１０６个２９３ＴＮ细胞接种 到１０ ｅｍ的细胞培养皿中，加入２ Ｉｘｇ的ｐＣＤＨ－ＰＩＮ１或ｐＣＤＨ、 １０ Ｉｘｇ ｐＡＣＫＨ１一Ｐｌａｍｉｄ ｍｉｘ及Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００进行共转 染，４８ ｈ后收集含有ＰＩＮ１病毒颗粒的培养液．加入ＰＥＧ—ｉｔ 析出病毒颗粒。将ＮＰ６９接种到Ｔ２５培养瓶中，于含有ＢＰＥ 及ｒＥＧＦ的ＫＳＭＦ培养液中培养。加入含有ＰＩＮ１病毒颗粒及 Ｔｒａｎｓ Ｄｕｘａｎｄ混合物新培养液共培养７２ ｈ后换入新的培养 液常规培养。随机检测５个高倍视野．记录荧光显微镜下含 有ＧＦＰ细胞占总细胞数的百分比．确定ＮＰ６９中ＰＩＮ１的导 人情况。ｑＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验ＮＰ６９一Ｌｅｎｔｉ—ＰＩＮ１组及ＮＰ６９～ ｖｅｃｔｏｒ组细胞中ＰＩＮ１表达情况。 １．２．２采用肿瘤信号通路阵列荧光素酶试剂盒测试ＮＰ６９一 Ｌｅｎｔｉ—ＰＩＮ１可能影响的细胞信号通路加入０．８ ｌ Ｆｕｇｅｎｅ— ＨＤ及１００ ｌ ＯＰＴＩ—ＭＥＭ到肿瘤信号通路阵列９６孔板中溶 解板上含有报告基因的质粒，混匀静置２０ ｍｉｎ。接种ＮＰ６９一 Ｌｅｎｔｉ－ＰＩＮ１组、ＮＰ６９一ｖｅｃｔｏｒ组细胞到已准备好的肿瘤信号通 路阵列９６孔板中（４．０×１０。个／孑Ｌ），进行逆转染。２４ ｈ后，根据 使用说明，加入细胞裂解液，配置好Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ ＲｅａｇｅｎｔＩＩ 及Ｓｔｏｐ＆Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ，上机读数，完成荧光素酶报告基因实 验。以上实验重复３次，取平均值。 １．２．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测目标蛋白的表达 接种３×１０５ ＮＰ６９一Ｌｅｎｔｉ—ＰＩＮ１组、ＮＰ６９一ｖｅｃｔｏｒ组接种到１０ ｃｍ的细胞培 养皿中，待细胞达到８０％融合时，更换含有Ｈ２０ 的新鲜培养 液（培养液中Ｈ２０：终浓度为１ ｍｍｏｌ／Ｌ），作用２４ ｈ后收集细 胞，加入ＲＩＰＡ（含有ｌ％ＮＰ４０、０．５％脱氧胆酸钠和０．Ｉ％ＳＤＳ 的ＰＢＳ）和蛋白酶抑制剂，冰上裂解蛋白２０ ｍｉｎ。离心取上 清，ＢＣＡ法测定蛋白浓度。取适当蛋白加入ＳＤＳ上样缓冲液， 煮沸５ ｒａｉｎ，冰上冷却，ＳＤＳ ＰＡＧＥ电泳，转膜，５％脱脂牛奶封 闭，力口入——抗ＰＩＮ１、Ｂ—ａｃｔｉｎ、ｃ－Ｊｕｎ、ｃ－Ｊｕｎ Ｓｅｒ６３、ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｔ７３、 相对应二抗。显影．照片。显影结果经Ｉｍａｇｅ Ｊ软件进行半定 量分析，计算净光密度值，结果以相对平均灰度值（Ｍｅａｎ Ｇｒａｙ Ｖａｌｕｅ ＭＧＶ）×面积ｍｍ ）表示。蛋白的相对含量＝（目的 蛋白条带ＭＧＶ×ｍｍ ）／（Ｂ—ａｃｔｉｎ条带ＭＧＶ Ｘ ｍｍ ）。 １．３统计学处理 采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件包进行统计学分析。ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ＣＴ值、肿瘤信号通路阵列荧光素酶试验数据、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ数据为计量资料，以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，采用两 样本ｔ检验。检验水准 ＝０．０５。 ２结果 ２．１ 利用慢病毒系统载体在鼻咽细胞中构建ＰＩＮ１过表达 细胞株 荧光显微镜观察结果发现（９４．４±２．３）％的ＮＰ６９细胞携 重庆医科大学学报２０１５年第４Ｏ卷第８期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓ￣２０１５．Ｖｏ１．４ｏ Ｎｏ．８） 一１１１７一 位点。以上结果提示ＰＩＮ１可能通过激活ＡＰ一１来 ＣｙｃｌｉｎＤ１的转录，增加ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达量。 ＭＡＰＫ，ＪＮＫ信号途径参与如胚胎发育、免疫反 应、细胞分化等许多正常的生理过程，ＭＡＰＫ／ＪＮＫ信 号途径的异常活化与多种人类肿瘤的发生发展密 切相关［１３］。ＡＰ一１是ＭＡＰＫ／ＪＮＫ信号通路重要的转 录因子．课题组采用肿瘤信号通路阵列荧光素酶试 验Ｇａｆｆｅｒ １０一Ｐａｔｈｗａｙ Ａｒｒａｙ）发现稳定转染ＰＩＮ１的 ＮＰ６９细胞可启动与Ｓｅｒｉｎｅ—ｔｈｒｅｏｎｉｅ相关的细胞信 号通路如ＭＡＰＫ／ＪＮＫ信号通路、Ｍｙｃ信号通路及 ＮＦ—ｋＢ信号通路。且可以明显上调ＪＮＫ信号通路 重要的下游转录因子ｃ—Ｊｕｎ的表达量。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测显示ｃ—Ｊｕｎ Ｓｅｒ６３．ｃ—ＪｕｎＳｅｒ７３的表达量明显上 调。ｃ—Ｊｕｎ具有Ｓｅｒ／Ｔｈｒ—Ｐｒｏ酰胺键，其中包括ｃ— Ｊｕｎ６３及７３两个重要的丝氨酸磷酸化位点。本研究 推测鼻咽上皮细胞中ＰＩＮ１直接与磷酸化的ｃ—Ｊｕｎ 在氨基末端６３及７３位结合。激活ｃ—Ｊｕｎ而增强其 转录活性，增加ｃ—Ｊｕｎ的表达量，激活ＡＰ一１，上调 下游基因ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达。 综上所述课题组运用慢病毒表达系统在鼻咽 上皮细胞系ＮＰ６９中建立ＰＩＮ１过表达细胞克隆 株。发现ＰＩＮ１可以通过激活ＭＡＰＫ／ＪＮＫ肿瘤信号 通路，上调细胞周期蛋白Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１）的表达量， 对了解鼻咽癌早期的发生发展非常有意义，为ＰＩＮ１ 成为治疗鼻咽癌的新的抗癌靶点提供理论和实验 依据。 参考文献 【１】Ｈａｎａｈａｎ Ｄ，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ＲＡ．Ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ 啪．Ｃｅｌｌ，２０１１，１４４（５）：６４６—６７４． 【２】Ｌｕ，ＫＰ，Ｈａｎｅｓ，ＳＤ，Ｈｕｎｔｅｒ Ｔ．Ａ ｈｕｍａｎ ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ ｅｓ－ ｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８０（６５７４）：５４４—５４７． 【３】Ｌｉｏｕ ＹＣ，Ｚｈｏｕ ＸＺ，Ｌｕ ＫＰ．Ｐｒｏｌｙｌ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ Ｐｉｎｌ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌｒａ ｓｗｉｔｃｈ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｆａｔｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ。２０１１，３６（１０）：５０１—５１４． 【４】Ｌｅｅ ＴＨ，Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ Ｌ，Ｌｕ ＫＰ．Ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌ ｃｉｓ－ｔｒｎａｓ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ Ｐｉｎｌ ｉｎ ａｇｅｉｎｇ，ｃａ／＇ｌｃｅｒ ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｅｘｐｅ￣Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｍｅｄ， ２０１１，１３：ｅ２１． 【５】Ｂａｏ Ｌ，Ｋｉｍｚｅｙ Ａ，Ｓａｕｔｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｔ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｌｙｌ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ Ｐｉｎｌ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２００４，１６４（５）：１７２７－ １７３７． 【６］Ｖｅｒｄｅｃｉａ ＭＡ，Ｂｏｗｍａｎ ＭＥ，Ｌｕ ＫＰ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｐｈｏｓ－ ｐｈｏｓｅｒｉｎｅ—ｐｒａｌｉｎｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ ｇｒｏｕｐ ＩＶ ＷＷ ｄｏｍａｉｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ，２０００，７（８）：６３９－６４３． ｆ７】Ｎｉｓｈｉ Ｋ，Ｉｎｏｕｅ Ｈ，Ｓｃｈｎｉｅｒ ＪＢ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｉｍｐｏ￣ａｎｔ ｆｏｒ ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｅｘｉｔ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｎａｃｈｏｒａｇｅ－ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｋｅｒａｔｉｎｅｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ－ ｃｈｅｍ，２００９，１０６（１）：６３－７２． ［８】Ｗｕｌｆ ＧＭ，Ｒｙｏ Ａ，Ｗｕｌｆ ＧＧ，ｅｔ ａ１．Ｐｉｎｌ ｉｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｃｏｏｐｅｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｒａｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｒｎａｓｃｒｉｐ— ｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃ－Ｊｕｎｔｏｗａｒｄｓ ｃｙｃｌｉｎＤＩ［Ｊ］．ＥＭＢＯ Ｊ，２０ｏｌ，２０（１３）：３４５９－ ３４７２． ［９】Ｒｙｏ Ａ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｍ，Ｗｕｌｆ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｉｎｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ａｎｄ ｓｕｂ－ ｃｅｌｌｕｌｒａ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｔａ—ｅａｔｅｎｉｎ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｉｔｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＡＰＥ ．Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００１，３（９）：７９３—８０１． 【１０１ Ｒｙｏ Ａ，Ｓｕｉｚｕ Ｆ，Ｙｏｓｈｉｄａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｓｉｎｇａｌ－ ｉｎｇ ｂｙ Ｐｉｎｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｅｌｙｌ ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐ６５／ＲｅｌＡ［］Ｊ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ，２００３，１２（６）：１４１３－１４２６． 【１１】Ｔｓａｎｇ ＣＭ，Ｙｉｐ ＹＬ，Ｌｏ ＫＷ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｐ ｐｏｒｔｓ ｓｔａｂｌｅ ＥＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ［Ｊ】．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，２０１２，１０９（５０）：Ｅ３４７３－Ｅ３４８２． 【１２】Ｈｕｉ ＡＢ，Ｏｒ ＹＹ，Ｔａｋａｎｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｒｒａｙ－ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ ａｓ ａ ｔｒａｇｅｔ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｔ １ ｌｑ１３．３ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ】．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００５，６５（１８）：８１２５—８１３３． ［１３】 Ｗａｇｎｅｒ ＥＦ，Ｎｅｂｒｅｄａ ＡＲ．Ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｂｙ ＪＮＫ ａｎｄ ｐ３８ ＭＡＰＫ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ叨．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００９，９（８）： ５３７—５４９． （责任编辑：冉明会）
