泰山医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＡＩＳＨＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＶｏＬ ３３ Ｎｏ．５ ２０１２ 大鼠ＣＤ４＋ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞的分选和提取 周国庆唐琴杨明峰黄丽孙保亮 （山东省高校脑微循环重点实验室，泰山医学院附属医院神经内科，山东泰安２７１０００） 摘要：目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞并进行纯度和活性检测。方法 用免疫 磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞，流式细胞仪检测细胞纯度，台盼蓝染 色计算细胞存活率。结果 免疫磁珠分选提取的ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞纯度在８６％以上，并且活性良好，活 细胞百分率大于９７％。结论通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞。 关键词：大鼠；ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞；免疫磁珠分选 中图分类号：Ｒ３９２文献标识码：Ａ文章编号：１００４－７１１５（２０１２）０５－０３２５－０３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—７１１５．２０１２．０５．００２ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ＣＤ４ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＺＨＯＵ Ｇｕｏ—ｑｉｎｇ ＴＡＮＧ Ｑｉｎ ＹＡＮＧ Ｍ ｇ一 ｎｇ ＨＵＡＮＧ Ｌｉ ＳＵＮ Ｂａｏ—ｌｉａｎｇ （Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｔａｉｓｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｉａｎ ２７１０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｈｅ ｒａｔ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅｓ ＣＩＭ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅＵｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ＣＩＭ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｕｓｉｎｇ ａ ｔｗｏ—ｓｔｅｐ ｐｒｏｅｅ— ｄｕｒｅ．ＣＤ４ Ｔ ｃｅＨｓ ｗｅｒｅ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ＣＤ２５ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＣＩＭ Ｔ ｃｅｌｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｗａｓ ｎａａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｙｒ（ＦＣＭ）．Ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ ｗａｓ ｓｔａｉｎｅｄ ｔｏ ｃａｌｃｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆＣＤ４ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８６％ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆＯ— ｖｅｒ ９７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｍｍｕｎｏｍａｇｕｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ（ＭＡＣＳ）ｃａｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｎａｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏ— ｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒａｔｓ；ＣＤ４ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅＨｓ；ＭＡＣＳ ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞是一组具有免疫抑 细胞，并对其进行流式检测和细胞活性检测。 制功能的Ｔ细胞亚群，此亚群为某些组成性表达 ＣＤ２５（ＩＬ一２受体Ｏ／．链）的ＣＤ４ Ｔ细胞。其可以分 １材料和方法 为天然调节性Ｔ细胞（ｎａｔｕｒａｌ Ｔｒｅｇ，ｎＴｒｅｇ）和获得性 １．１实验动物 调节性Ｔ细胞（ａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｒｅｇ，ａＴｒｅｇ），ｎＴｒｅｇ主要指 胸腺髓质Ｔ细胞发育成熟后进入外周的Ｔｒｅｇ细胞， 雄性Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ｓＤ）大鼠，由山东中医 在预防病理性自身免疫反应中发挥作用；ａＴｒｅｇ是由 药大学动物中心提供，体重２７５—３００ ｇ。 感染、移植、癌症等抗原诱导ＣＤ４ Ｔ细胞转化形成， １．２实验试剂和仪器 在感染和移植免疫等发挥重要作用…。由于ＣＤ４ 大鼠ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞提取试剂盒、 ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞约占正常人或大小鼠外周血 ＭａｇＣｅｌｌｅｃｔ磁性分离仪购于Ｒ＆Ｄ公司；Ａｎｔｉ—ｒａｔ ＣＤ４ Ｔ细胞的５％一１０％，由于其数量少，极大 ＣＤ４（ＡＰＣ）、Ａｎｔｉ—ｒａｔ ＣＤ２５（ＰＥ）购于ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公 了其在多种疾病中的临床应用。本实验通过近年发 展较快的免疫磁性分选技术，应用免疫磁珠两步法 司；ＨＡＮＫＳ培养液购于Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司；ＦＡＣＳ溶血素 分离纯化大鼠脾脏和淋巴结ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ 购于ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司；流式细胞仪购于美国ＢＤ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１０７０９４７）。 作者简介：周国庆（１９８５一）男，山东泰安人，硕士研究生，研究方向：脑血管疾病防治。 通讯作者：孙保亮（１９６３一），男，山东单县人，教授，主任医师，博士，研究生导师。 ３２６ 公司；立式压力蒸汽灭菌器购于上海精宏实验设备 有限公司。 １．３实验方法 １．３．１大鼠脾脏和淋巴结细胞悬液制备 将大鼠麻醉过量处死，无菌取脾脏和淋巴结 （头颈部，腋窝，腹股沟等部位），放入已高压消毒的 无菌培养皿中，加入ｌ０ ｍｌ ＨＡＮＫＳ培养液；将其用 磨砂玻璃片研磨，过１００目滤网过滤转至１５ｍｌ的离 心管中；１１００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，去上清后加入５ ｍｌ ＦＡＣＳ溶血素，混匀后静置５ ｍｉｎ；加入１Ｏ ｍ１的 ＰＢＳ，１１００ ｒ／ｍｉｎ离心８ ｍｉｎ；去上清，加１５ ｍｌ ＨＡＮＫ Ｓ培养液离心洗涤一次，弃上清，用１×ＭａｇＣｅｌｌｅｃｔ Ｂｕｆｆｅｒ将其悬浮，调整细胞悬液浓度至１ Ｘ １０ ／ｍｌ。 １．３．２ 阴性选择ＣＤ４ Ｔ细胞后阳性选择ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞 根据说明书进行磁性分选。首先阴性选择 ＣＤ４ Ｔ细胞，将２×１０ 个细胞（２ ｍ１）转移到５ ｍｌ 试管中，分别加入２００ １ ＭａｇＣｅｌｌｅｃｔ ＣＤ４ Ｔ细胞抗 体和２５０ ｔｘｌ ＭａｇＣｅｌｌｅｃｔ抗鼠ＩｇＧ磁珠，依次轻轻混 匀，分别在２～８℃孵育１５ ｍｉｎ；加入５５０ Ｉｘｌ Ｂｕｆｆｅｒ 轻轻混匀，调整悬液体积至３ ｍｌ，将试管放于磁体中 静置１０ ｍｉｎ；当试管在磁体中时用无菌移液管将上 清液吸出至于一新的５ ｍｌ试管中，放于磁体中静置 １０ ｍｉｎ；取出上清至１５ ｍ１离心管中，并计数。然后 阳性选择ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞，加入Ｂｕｆｆｅｒ至１５ ｍｌ，１１００转离心８ ｒａｉｎ；去上清，加１００ ｔｘｌ Ｂｕｆｆｅｒ混悬 细胞，转移到５ｍｌ试管中；每１×１０ 个细胞分别加 １０ ｌ生物素标记的抗鼠ＣＤ２５抗体和１Ｏ ｔｘｌ Ｍａｇ－ Ｃｅｌｌｅｃｔ抗生物素磁珠，依次在２～８℃冰箱中孵育 １５ ｍｉｎ；加Ｂｕｆｆｅｒ定容至１ ｍｌ，轻轻混匀，使溶液处 于悬浮状态，将试管放于磁体中静置６ ｒａｉｎ，当试管 在磁体中时，用消毒的移液管吸出上清液并去除；从 磁体中取出试管，加１ｍｌ Ｂｕｆｆｅｒ混悬细胞，重复一次 后从磁体中取出试管，加１ ｍｌ Ｂｕｆｆｅｒ混悬细胞，此为 富含ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞的细胞悬液，进行细胞计 数。 １．３．３ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞纯度和活性检测 将ＣＤ４ Ｔ细胞和ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞进行抗 体标记（ＣＤ４一ＡＰＣ、ＣＤ２５一ＰＥ），流式细胞仪检测 细胞纯度。用台盼蓝对ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ细胞进行染 色，镜下计数２００个细胞计算细胞存活率，细胞存活 率＝（染色阴性细胞数／细胞总数）Ｘ １００％。 ２ 结 果 分选前ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇｓ在正常大鼠脾脏和淋 巴结单个核细胞中的比例为１．５６％，第一步阴性选 泰山医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＡＩＳＨＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ Ｖｏ１．３３ Ｎ０．５ ２０１２ 择之后ＣＤ４ Ｔ细胞的纯度为９０．７５％，第二步阳性 选择之后ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇｓ的纯度为８６．７０％， ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇｓ经台盼蓝染色其活性９７．００％。 图１为分选后流式细胞仪检测结果。 筮 谷 ＣＤ４ ＡＰＣ 图１ 免疫磁珠分选ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇｓ比例为８６．７０％ ３讨论 调节性Ｔ细胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ，Ｔｒｅｇｓ）最初被 描述为ＣＩＭ ＣＤ２５ 的Ｔ细胞。新近的研究表明， Ｔｒｅｇｓ由不同种类Ｔ细胞（主要包括ＣＤ４ Ｔ细胞、部 分ＣＤ８ Ｔ细胞和自然杀伤Ｔ细胞）所组成。功能 性或活化的Ｔｒｅｇｓ表达一种关键的转录因子ＦｏｘＰ３， ＦｏｘＰ３是Ｔｒｅｇｓ发生、维持及发挥功能所必须的。 Ｔｒｅｇｓ在抑制免疫系统激活中起关键性作用，因此而 维持免疫稳态、预防自身免疫反应及抑制各种因素 所致的炎症反应。Ｔｒｅｇｓ功能破坏使免疫系统失调 从而导致炎症和自身免疫性疾病的发生。Ｔｒｅｇｓ通 过对效应Ｔ细胞和其它免疫细胞的负向调节而发 挥免疫调节作用 。 ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞可以抑制性调节 ＣＤ４ 或ＣＤ８ Ｔ细胞活化与增值，在维持机体免疫 耐受和免疫应答稳态中起着非常重要的调节作用。 该群细胞的另一个作用特点是能同时抑制初始Ｔ 细胞和记忆性Ｔ细胞的增殖反应。Ｓａｋａｇｕｃｈｉ等 在１９９５年研究发现，将小鼠外周ＣＤ４ Ｔ细胞中的 ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞去除后能引起各种自身 免疫性疾病，而将此类细胞输注到裸鼠体内，可以预 防因缺少这类Ｔ细胞亚群所导致的自身免疫性疾 病。还可以抑制同种异体移植排斥反应，具有巨大 的临床治疗应用潜能。从而引起研究者对ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞亚群的浓厚兴趣。 Ｔｒｅｇｓ具有免疫无反应性和免疫抑制性两大特 性。Ｔｒｅｇｓ自身的免疫无反应性，表现在其对于ＩＬ 一２以及共刺激分子的作用无反应，即使在ＴＣＲ信 号和ＩＬ一２的共同刺激下其增殖活化能力也很低； 泰山医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＡＩＳＨＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＶｏＬ ３３ Ｎｏ．５ ２０１２ Ｔｒｅｇｓ的免疫抑制性，则表现为抑制Ｔ细胞的增殖、 分化，阻碍抗原提呈细胞（ＡＰＣ）的抗原提呈作用 和直接介导靶细胞死亡，这些功能主要通过细胞一 细胞接触依赖机制或抑制性细胞因子依赖机制而发 挥。Ｔｒｅｇｓ的细胞一细胞接触抑制机制尚未完全研 究清楚，然而近年来的研究表明Ｔｒｅｇｓ表达的细胞 表面分子ＴＧＦ—Ｂ、ＣＴＬＡ一４、ＧＩＴＲ等在Ｔｒｅｇｓ介导 的细胞一细胞接触抑制中发挥重要的作用。调节性 Ｔ细胞可以直接杀死ＣＤ４ 或ＣＤ８ Ｔ细胞通过穿孔 素或粒酶依赖的机制。新近研究还发现，Ｔｒｅｇｓ还 可通过分泌可溶性细胞因子ＴＧＦ一１３、ＩＬ—ｌ０、ＩＬ一 ３５等细胞因子方式抑制Ｔ细胞的活化和增殖，并且 Ｔｒｅｇｓ与Ｔ细胞的直接接触可提升上述细胞因子对 Ｔ细胞的抑制作用。Ｔｒｅｇｓ免疫调节功能在体内的 正常发挥，可抑制自身免疫细胞的活化，维持自身 免疫耐受 ，引。 磁性细胞分选（也称免疫磁珠法）分离提取细 胞的原理是：根据细胞表面抗原能和连接有磁珠的 特异性单克隆抗体相结合，将其置于外加强磁场中， 通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在强磁场 中，没有此种表面抗原的细胞由于不能和连接着磁 珠的特异性单克隆抗体结合而无磁性，在强磁场中 不滞留，从而分离出目的细胞。具有快速、高效、对 靶细胞的功能活性干扰小的优点，并且不需要大型 的仪器设备，还可以在试管中进行，容易进行无菌操 作，对细胞的功能活性影响很小，提取分离后可以进 行体外扩增培养，还可以直接进行流式细胞学的检 查。因此在对特定细胞亚群的功能研究中得到了广 泛的应用。ＣＩＭ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞约占正常人 或大小鼠外周血ＣＤ４ Ｔ细胞的５％～１０％［７ｌ。本 实验我们采用免疫磁珠两步法（阴性选择和阳性选 择）提取分离大鼠脾脏和淋巴结ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节 性Ｔ细胞，先用阴性选择提取ＣＤ４ Ｔ细胞，向试管 内细胞悬液中加入非ＣＤ４抗体混合剂，得到富集的 ＣＤ４ Ｔ细胞，再用抗ＣＤ２５生物素化抗体和抗生蛋 白链菌素磁珠阳性选择ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细 胞，并对提取的细胞进行流式检测，最终获得的 ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞纯度在８６．００％以上， 并且活性良好（活细胞百分率＞９７％）。 最近，Ｌｉｅｓｚ等人 的研究发现，Ｔｒｅｇ细胞是缺 血性脑卒中后主要的抗免疫脑保护调节剂。Ｔｒｅｇ细 胞通过抵消过量产生的促炎性细胞因子和调节淋巴 细胞和小胶质细胞入侵和／或激活阻止继发性梗死 增长。Ｔｒｅｇｓ发挥抑制免疫和炎症反应作用的分子 机制尚未完全阐明，但可能通过两种主要模式即通 过与被抑制的细胞的细胞间接触，或者通过免疫抑 制性细胞因子ＩＬ—ｌＯ和ＴＧＦ—Ｂ等而起作用。这 些作用使Ｔ细胞在炎症部位自我耐受，免疫稳态， 损害控制等领域成为关键因素 ．１ｏＪ。 因此，通过提取高纯度有巨大潜力的Ｔｒｅｇ细 胞，拮抗促炎性细胞因子的产生和调节缺血脑组织 中淋巴细胞和小胶质细胞活化，防止继发性梗死的 增长。这些结果为急性缺血性脑卒中免疫发病机制 提供了的新见解，并有可能产生包括使用Ｔｒｅｇ细胞 进行免疫调节治疗的新方法。 参考文献： ［１］Ｐａｅｈｏｌｅｚｙｋ Ｒ，Ｋｍｊ Ｐ，Ｌｇｎａｔｏｗｉｅｚ Ｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｙｍｉｃ ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，１６８（２）： ６１３—６２０． ［２］Ｌｅｈｎｅｒ Ｔ．Ｓｐｅｃｉａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｖｉｅｗ：Ｔｈｅ ｒｅｓｕｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ－ ｏｇｙ，２００８，１２３（１）：４０—４４． ［３］Ｃｏｒｔｈａｙ Ａ．Ｈｏｗ ｄｏ ｅｒｕｇｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｏｒｋ［Ｊ］．Ｓｃａｎｄ Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ， ２００９，７０（４）：３２６—３３６． ［４］Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ，Ａｓａｎｏ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｅｌｆ—ｔｏ１． ｅｒａｎｃｅ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＩＬ一２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌａｐｈａｃｈａｉｎｓ（ＣＤ２５）．Ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ｏｆ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｅｌｆｔｏ１． ｅｒａｎｃｅ ｃａｕｓｅｓ ｖａｒｉｏｕｓ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ，１９９５， １５５（３）：１１５１—１１６４． ［５］Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ：ｋｅｙ ｃｏｎｔｒｏｎｅｒｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｅｌｆ—ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２０００，１０１（５）：４５５—４５８． ［６］Ｔａｎｇ Ｑ，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ Ｊ．Ａ．Ｔｈｅ Ｆｏｘｐ３十ｒｅｕｇｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ：ａ ｊａｃｋ ｆｏ ａｌｌ ｔｒａｄｅｓ，ｍａｓｔｅｒ ｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，９：２３９ —２４４． ［７］ 印永祥，韩晓枫，何阳．免疫磁珠两步法分离小鼠脾脏ＣＩＭ ４－ ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞［Ｊ］．标记免疫分析与临床，２００９，１６ （４）：２４４—２４６． ［８］Ｌｉｅｓｚ Ａ，Ｓｕｒｉ—Ｐａｙｅｒ Ｅ，Ｖｅｌｔｋａｍｐ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｕｇｌａｔｏｙｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａ／＇ｅ ｋｅｙ ｅｅｒｅｂｒｏｐｒｏｔｅｅｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｍ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２００９，１５：１３８—１３９． ［９］ＯＣｏｎｎｏｒ Ｒ．Ａ．Ａｎｄｅｒｔｏｎ Ｓ．Ｍ．Ｆｏｘｐ３＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ ＣＮＳ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｅｉｍ— ｍｕｎｏｌ，２００８，１９３：１—１１． ［１０］０Ｇ町ａ Ａ，Ｖｉｅｉｒａ Ｐ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｙｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｉｍ． ｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２００４，１０：８０１—８０５． （收稿日期２０１２－０４－０４）
