维普资讯 http://www.cqvip.com 第２７卷第１期 ２００８年３月 武汉工业学院学报 Ｖ０１．２７Ｎｏ．１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２ｏｏ８ 文章编号：１００９—４８８１（２００８）０ｌ一０００５—０３ 玉米中转基因成分的定性ＰＣＲ检测 许芳，李鑫，罗欣，刘志国 （武汉工业学院生物与制药工程系，湖北武汉４３００２３） 摘要：利用改良ＣＴＡＢ法提取玉米产品的基因组ＤＮＡ，应用ＰＣＲ检测方法，并以玉米特异 性内源基因ＩＶＲ为内参，花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子（ＣａＭＶ３５Ｓ启动子）、农杆菌胭脂碱合成 酶终止子（ＮＯＳ终止子）为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分。实验结果表明，有些玉米 样品中存在转基因成分，表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品。 关键词：转基因玉米；改良ＣＴＡＢ；ＰＣＲ 中图分类号：Ｑ ９３ 文献标识码：Ａ Ｏ 引言 玉米是世界三大谷类作物之一，在世界农业 生产中占有相当重要的地位，对粮食和饲料生产 起着举足轻重的作用。２００６年，全球转基因玉米 ＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ８５００、ＺＦ．９０型暗箱式紫外透 射仪、ＰＣＲ扩增仪（４８００）、电泳仪（ＤＹＹ－２Ｃ型）、制 冰机、自动三重纯水蒸馏器、取液（１０ Ｌ、２０ Ｌ、 ２００ 、１０００ ｖ，Ｌ）、玻璃器皿（研钵、烧杯、玻璃棒、容 量瓶）、消耗性器材（Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ管、各种规格头） １．１．２ 试剂 ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ、１０ Ｘ ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ、５０ ｂｐ ＤＮＡ 种植面积仅次于转基因大豆，达到２ ３００万平方公 顷，占转基因作物总面积的２２．５％ 。在转基因 玉米及其产品对人类健康和生态环境是否有害没 有定论之前，转基因玉米及其产品的检测是非常 重要的 。为了加强对农业转基因生物安全管 Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ、２０００ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ、Ｔａｑ酶、 核糖核酸酶（ＲＮａｓｅＡ）等均购自宝生物工程（大连） 有限公司，其它试剂均为国产分析纯， 十六烷基三甲溴化铵（ＣＴＡＢ）提取液１００ ｍＬ： １０ ｍＬ Ｔｒｉｓ－Ｈｃｌ（１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ８．０）；５ ｍＬ ＥＤＴＡ 理，保障人类健康和动植物、微生物安全，保护生 态环境，应科学的对转基因产品进行长期有效的 监控，建立快速、有效的检测方法体系，这也是对 食品环境、人类、动物和可持续农业发展的重要保 （０．５ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ８．０）；２ｇ十六烷溴化（ＣＴＡＢ）；８．２ ｇ ＮａＣ！，定容至１００ ｍＬ。使用前需要１２０℃灭菌 ３０ｍｉｎ。 障。本实验通过ＰＣＲ检测市场常见玉米产品，结果 表明市场上确实存在未经标识的转基因产品，这为 有关部门对转基因产品的监管提供了依据。 十六烷基三甲溴化铵（ＣＴＡＢ）沉淀液１００ｍＬ： ０．５ｇ ＣＴＡＢ；２．３３７６ｇ ＮａＣ１；定容至１００ｍＬ。使用前 需要１２０℃灭菌３０ｍｉｎ。 １．１、３ 引物 １材料与方法 １．１实验材料 实验检测对象主要是农贸市场上未有任何标识 的玉米。 １．１、１主要仪器 ＣａＭＶ３５Ｓ启动子基因、ＮＯＳ终止子基因以引物 设计分别参考文献 “ 。玉米内源基因ＩＶＲ基因 引物的设计以ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＢａｎｋ序列为基础而设计 的。实验所需特异性引物由宝生物工程（大连）有 限公司合成，各引物序列、所检测基因片段的长度及 自动凝胶成像分析系统、台式高速离心机、ｕＶ． 收稿日期：２００７—１１．１４ 作者简介：许芳（１９７９一），女，湖北省武穴市人，助教。 维普资讯 http://www.cqvip.com ６ 武汉工业学院学报 ２００８年 其性质见表１。 表１检测转基因玉米内、外源基因引物信息 １．２方法 弃上清液，用７５％乙醇洗涤沉淀两三次后，在室温 下自然风干用三重蒸馏水溶解储存于４℃。 １．２．１ 玉米基因组ＤＮＡ的提取及检测 取５ Ｌ样品溶于９５ Ｌ三重蒸馏水中，用ＵＶ． 称取０．１ｇ样品，在研钵中充分研磨。加人 ＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ８５００分析ＤＮＡ的浓度，通过 １ Ｏ００１￣Ｌ ＣＴＡＢ提取液，继续研磨充分后加人到 它对提取玉米ＤＮＡ测ＯＤ值，并记录数据。由 １．５ｍＬ Ｅｐ管中；向Ｅｐ管加人４ Ｌ ＲＮａｓｅＡ，至于６５ ０Ｄ２６０ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ判定基因组ＤＮＡ的浓度，其比 ℃水浴 ，过程中混匀３～５次，３０ｍｉｎ，１２０００ ｒ／ｍｉｎ 值在１．７～２．０之间较好，符合ＰＣＲ检测要求。。 。 室温离心１０ｍｉｎ；取上清于新的Ｅｐ管中，加人等体 １．２．２ ＰＣＲ扩增及检测方法 积氯仿：异戊醇（２４：１），轻缓颠倒数次（或至于漩 检测４种样品中内源和外源基因的ＰＣＲ检测 涡震荡器上混匀），室温静置５ ｍｉｎ，室温１２ ０００ ｒ／ 采用５０ Ｌ反应体系 ：Ｔａｑ（５ Ｕ／ｐ￣Ｌ）０．５ Ｌ；１０× ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ；重复加人氯仿异戊醇一到两次（过 ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｍｇ—Ｐｌｕｓ）５ Ｌ；ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（各２．５ 程中如上清液量太少，可适量加人三重蒸馏水）；取 ｍＭ）４ Ｌ；样品ＤＮＡ １ Ｌ；上引物１ ｐ，Ｌ；下引物１ 上清于新的Ｅｐ管（千万不要吸人下层液体），再加 ｐ，Ｌ；灭菌蒸馏水３７．５ Ｌ。注：进行ＰＣＲ检测时必须 入等体积的ＣＴＡＢ沉淀液，轻缓颠倒混匀后室温静 设置一个空白对照（用配置反应体系的试验用水代 置１ｈ，１５ ０００ｒ／ｍｉｎ室温离心１０ｍｉｎ；弃上清液，加人 替模板） 。 ４００ Ｌ １．２ｍｏ］／Ｌ氯化钠溶解沉淀，５６℃温浴１５ｍｉｎ， 样品中内源基因和外源基因的ＰＣＲ检测的参 期间轻摇Ｅｐ管数次助溶；加人８００ 的．２０℃无水 考反应条件见表２。反应条件需要根据检测仪器的 乙醇，＿２０℃静置１ ｈ，１５ ０００ ｒ／ｍｉｎ室温离心１０ｍｉｎ； 性能做相应调整 。 表２玉米样品内外源基因ＰＣＲ反应条件 取ＰＣＲ产物５ 加１ 点样液混合后点人上 结果见图１。图１的结果表明：扩增出的片段与预 样孔，于１２０Ｖ电压电泳３０～４０ ｍｉｎ。电泳结束后， 期相符，成功提取出玉米的基因组ＤＮＡ。 取出凝胶用自动凝胶成像分析系统检测。 、 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ２实验结果及讨论 ２．１内源基因检测 —２２５ｂｐ 以玉米内源基因ＩＶＲ为参照基因，用该基因的 特异性引物对４种玉米样品ＤＮＡ进行扩增，可以用 于检测玉米样品基因组ＤＮＡ提取是否成功。为保 图１ 内源基因（ＩＶＲ）特异性扩增产物凝胶电泳结果 证检测结果的可靠性，对玉米样品进行转基因成分 泳道ｌ：５０ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ；泳道２：空白对照（未 的单一ＰＣＲ检测时，设置了空白对照（ＰＣＲ时加引 加ＤＮＡ模板）；泳道３：ｌ号玉米；泳道４：２号玉米；泳道５：３ 物，不加模板）和阴性对照（非转基因玉米）。检测 号玉米；泳道６：４号玉米；泳道７：阴性对照。 维普资讯 http://www.cqvip.com １期 许芳，李鑫，罗欣，等：玉米中转基因成分的定性ＰＣＲ检测 ７ ２．２外源基因终止子（ＮＯＳ）和启动子（ＣａＭＶ３５Ｓ） 将法规落到实处，必须建立起一整套完善对转基因 检测 的安全性评价体系、严格的实施标准和技术监督措 同样为保证检测结果的可靠性，设置了空白对 施。而实验正是从技术监督的角度出发而设计的。 照。用ＮＯＳ终止子特异性引物对样品是否为转基 玉米基因组ＤＮＡ的提取是整个实验的基础，此 因产品进行定性ＰＣＲ扩增，扩增产物为１８０ ｂｐ。检 实验则应用改良的ＣＴＡＢ法，主要是为了更有效地 测结果见图２。 除去玉米中的蛋白质，使得提取出的玉米基因纯度 ｌ ２ ４ ６ ７ 更高。此方法利用多次的氯仿异戊醇混合液抽提尽 ■ 量去除蛋白质；通过适当延长ＤＮＡ沉淀时间，提高 离心转速等方法，使基因组ＤＮＡ能充分沉淀下来。 嚣从实验结果来看，用改良的ＣＴＡＢ法提取玉米基因 组ＤＮＡ效果很好。 ＰＣＲ技术非常成熟，反应体系固定，易于操作， 图２外源终止子（ＮＯＳ）特异性扩增产物凝胶电泳结果 也比较方便快捷。现在市面上８５．７％的转基因玉 泳道１：５０ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ；泳道２：空白对照（未 米转入的是ＣａＭＶ３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子，针对 加ＤＮＡ模板）；泳道３：１号玉米；泳道４：２号玉米；泳道５：３ ＣａＭＶ３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子等外源基因设计特 号玉米；泳道６：４号玉米；泳道７：阴性对照。 异性引物进行ＰＣＲ检测，结果的特异性高，覆盖率 用ＣａＭＶ３５Ｓ启动子特异性引物对样品是否为 广。而且相对于其它的检测方法如Ｅｌｉｓａ法和试纸 转基因产品进行定性ＰＣＲ扩增，扩增产物为１９５ ｂｐ。 条法，ＰＣＲ法的灵敏度高，且受基因表达产物和产 检测结果见图３。 品加工程度的影响相对较小，因此ＰＣＲ法是农产品 ｌ ２ ４ ６ ７ 及其加工品中转基因成分检测的有效方法。 置 瑟 实验一方面是通过改变实验方法，完善转基因 作物及其加工品的检测手段；另一方面则是提出警 示：食品市场上对于转基因食品的管理、监督及检测 有待进一步加强。 参考文献： 图３外源启动子（ＣａＭＶ３５Ｓ）特异性扩 ［１］ 李余良，胡建广．转基因玉米研究进展［Ｊ］．中 增产物凝胶电泳结果 国农业通报，２００６，２（２）． 泳道１：１号玉米；泳道２：２号玉米；泳道３：３号玉米；泳 ［２］ 肖一争，唐咏．国内外转基因玉米检测方法研 道４：４号玉米；泳道５：阴性对照；泳道６：空白对照（未加 究概况［Ｊ］．河南农业科学，２００７．３２（５）：０５． ＤＮＡ模板）；泳道７：５０ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ。 １０． 以上检测结果表明，１号、２号玉米均有可能含 ［３］ 周建嫦，杨杏芬，黄俊明，等．聚合酶链式反应 有转基因成分。２号玉米外源ＮＯＳ终止子没有扩增 鉴定转基因大豆和玉米［Ｊ］．中国公共卫生， 出特异性的条带，其原因可能是样品中的大豆基因 ２００５，１０（２３）：１２２６．１２２７． 组受到不同程度的破坏。 ［４］ 郑文杰，刘煊，刘伟，等．转基因大豆加工产品 ２．３ 讨论 的定性ＰＣＲ检测［Ｊ］．农业生物技术学报， ２００３，１１（５）：４６７－４７１． ２００２年４月８日，卫生部根据《中华人民共和 ［５］ 甘玉冬，阳成波、转基因产品检测方法研究进 国食品卫生法》和《农业转基因生物安全管理条 展［Ｊ］．中国饲料，２００４（１４）：２２．２３． 例》，制定并公布了《转基因食品卫生管理办法》。 ［６］ 曹际娟，陈明生，卢行安，等．ＰＣＲ检测转基 其目的是为了加强对转基因食品的监督管理，保障 因玉米及其粗加工食品［Ｊ］．玉米科学，２００１， 消费者的健康权和知情权。而以上实验结果证实了 ９（２）：８７．９１． 未有任何标识的玉米中也存在转基因玉米，证明现 （下转第２７页） 在转基因食品市场还比较混乱，管理上存在一些漏 洞。法规的执行需要强大的技术作为支持。真正要 维普资讯 http://www.cqvip.com
ｌ期 杨建斌，陈明锴，汤世华，等：超声波辅助制备生物柴油的研究 ２７ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｏｉｌ Ｍｅｔｈｙｌ Ｅｓｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｓｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ，１９９６，１１（１）：４３—５０． Ｔｒａｎｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｏｉｌ［Ｊ］． １９８６，（６３）：１３７５． Ｓｂｌｏｍ Ｊ．Ｅｍｕｌｓｉｏｓ ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ［１２］ Ｓｊ［Ｍ］．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６．４３７— ４６８． ［１Ｏ］ Ｓｔａｖａｒａｃｈｅ Ｃ，￣ｎａｔｏｍ Ｍ，Ｎｉｓｈｉｍｕｍ Ｒ，ｅ｝ａ１． Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｏｉｌ ｔｏ Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ Ｕｓｉｎｇ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０Ｏ３，（３２）： ７１６－７１７． ［１３］ 王萍辉．超声空化影响因素［Ｊ］．河北理工学 Ｆｒｅｅｄｍａｎ Ｂ，Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ Ｒ Ｏ，Ｐｒｙｄｅ Ｅ Ｈ． 院学报，２００３，２５（４）：１５４—１６１ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｗａｖｅ—ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭｉｃｒｏｂｉａＩ ＢｉｏｄｉｅｓｅＩ ＹＡＮＧ Ｊｉａｎ一６ 。 ，ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇ—ｋａｉ ‘，ＴＡＮＧ Ｓｈｉ—ｈｕａ ，Ｈｅ ＤＯＮＧ－ｐｉｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｔａｏ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００２３，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００６０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ｇｒｅａｓｅ ｗｉｔｈ ｓｈｏｒｔ—ｃｈａｉｎ ａｌｃｏｈｏｌｓ，ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｂａｓｅ— ｃａｔａｌｙｓｔ，ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｌｏｗ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ（２８ ａｎｄ ４０ ｋＨｚ）ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｓ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｓ ｍｕｃｈ ｓｈｏｒｔｅｒ（１０—４０ ｍｉｎ）ｔｈａｎ ｆｏｒ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｉｒｒｉｎｇ．Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｃａｔａｌｙｓｔ ｉｓ ２ ｏｒ ３ ｔｉｍｅｓ ｌｏｗｅｒ．Ｔｈｅ ｍｏｌａｒ ｒａｔｉｏ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ／ｏｉｌ ｕｓｅｄ ｉｓ ｏｎｌｙ ６：１．Ｎｏｒｍａｌ ｃｈａｉｎ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｒｅａｃｔ ｆａｓｔ，ｗｈｉｌｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｎｄ ｔｅｒｔｉａｒｙ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｓｈｏｗ ｓｏｍｅ ｏｒ ｎｏ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ａｆｔｅｒ ６０ ｍｉｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｓｕｒｐｒｉｓｉｎｇｌｙ，４０ ｋＨｚ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｓ ａｒｅ ｍｕｃｈ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ（１０—２０ ｍｉｎ）．Ｔｗｅｎｔｙ ｅｉｇｈｔ ｋｉｌｏｈｅｒｔｚ ｇｉｖｅ ｓｌｉｇｈｄｙ ｂｅｔｔｅｒ ｙｉｅｌｄｓ（９８％一９９％），ｂｕｔ ｌｏｎｇｅｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｗｈｉｌｅ ｈｉｇｈｅｒ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｕｓｅｆｕｌ ａｔ ａｌｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ｇｒｅａｓｅ；ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ；ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ；ｂａｓｅ ｃａｔａｌｙｓｉｓ；ｍｉｃｒｏｂｉｌａ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ （上接第７页） 测技术及其应用与发展［Ｊ］．广西植物，２００６， ［７］ 金芜军，郝畅，程红梅，等．用复合ＰＣＲ方法 ２６（５）：４８３４８７． 检测６种转基因玉米中外源ＤＮＡ的特异性 ［９］ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ［Ｊ］．农业生物技术学报，２００５，１３（５）：５６２— （ＳＮ／Ｔ）１２０２—２００３，食品中转基因植物成分 ５６７． 定性ＰＣＲ检测方法［ｓ］． ［８］ 兰添颖，宋文芹，张守攻，等．转基因农作物检 Ｔｈｅ ＰＣＲ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｍａｉｚｅ ＸＵ Ｆ帆ｇ，Ｈ Ｘｉｎ，ＬＵＯ Ｘｉｎ，ＵＵ Ｚｈｉ—ｇｕｏ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｗｕｈａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００２３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｍａｄｅ ｕｓｅ ｏｆ ｈｔｅ ｍｏｄｉｉｆｅｄ ＣＴＡＢ，ｃａｒｒｉｅｄ ｏｎ Ｍａｒａｒａｔｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｒｎ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｕｓｉｎｇ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｒｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｇｅｎｅ ＩＶＲ ａｓ ａ ｒｅ￣ｒｅｎｃｅ，ｗｅ ｃｏｕｌｄ ｖａｌｉｄａｔｅ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ．Ｉｆ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ．ｔｈｅｎ Ｗｅ ｃｏｕｌｄ ａｍｐｌｉｆｙ ｔｈｅ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅ ＣａＭＶ３５Ｓ ａｎｄ ＮＯＳ ｏｆ．ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｏｒｎ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＰＣＲ ｒｅｓｕｌ￣，ｗｅ ｃａｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｓｔ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｓｏｍｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｃｏｒｎｓ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｍａｒｋｅｔ ｗｉｔｈ ｎｏ ｐｅｒｍｉｔ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ＷＯｒｄｓ：ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍａｉｚｅ；ｍｏｄｉｉｆｅｄ ＣＴＡＢ：ＰＣＲ
