第9卷第1期2003年2月中国实验方剂学杂志
ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeVol.9,No.1Feb.,2003
三七药材指纹图谱研究
高增平,陆蕴如,王宝华
(北京中医药大学中药学院,北京 100029)
摘要:目的:应用HPLC法制定三七药材指纹图谱检测标准。方法:Nova-PakÒC18分析柱,乙腈-水梯度洗脱,流速110mlPmin,检测波长210nm。结果和结论:建立了三七药材的指纹图谱检测标准,实验方法简便、准确、重复性好。
关键词:三七;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R28411 文献标识码:B 文章编号:1005-9903(2003)01-0011-02
StudiesontheFingerprintofRadixNotoginsengGAOZeng-ping,LUYun-ru,WANGBao-hua
(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029China)
Abstract:Objective:Tostudythefingerprintsoftheradixnotoginseng.Method:Nova-PakÒC18columnwasused,withmixtureliquidofacetonitrileandwaterasmobilephaseinagradientmode.Thewavelengthofmeasurementwas210nm.ResultandConclusion:Thestandardfingerprintoftheradixnotoginsenghasbeengotten.Themethodissimpleandreliable.
Keywords:Radixnotoginseng;HPLC;Fingerprint 本文按国家药品监督管理局2000年8月关于/中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)的通知0,对10批三七药材进行了指纹图谱测定,建立了指纹图谱检测标准,实验方法的精密度、稳定性、重现性良好,操作简便可行。
1 仪器、试剂、样品
Waters515泵,Waters2487双波长紫外检测器,Millennium色谱工作站;乙腈(美国Fisher公司)为色谱纯,甲醇(北京化工厂)为分析纯;三七药材Pan-axnotoginseng(Burk.)F.H.Chen由厂方提供(产地为云南文山,采集季节为9~10月,北京中医药大学中药学院阎玉凝教授鉴定);人参皂苷Rg1对照品购自中国药品生物制品检定所(批号0703-9914)。2 色谱条件
Nova-PakÒC18分析柱(150mm@416mm,4Lm),乙腈-水二元梯度洗脱(17%~100%的乙腈水溶液),流速110mlPmin,检测波长210nm。3 供试品溶液的制备
311 药材粉碎粒度考察 将药材分别粉碎成20目和40目,均用75%乙醇超声提取30min,按照21214制备成供试液,依法测定,结果表明粉碎过40目筛
收稿日期:2002-07-15
32
的供试液测得图谱峰数比20目的供试液多,说明粉碎成20目时成分提取不够完全,故选择粉碎过40
目筛。
312 提取时间的考察 取过40目筛的三七粉2份,分别超声提取30min和40min,依21214法制成供试液,并测定指纹图谱,结果图谱相同,故选择超声提取30min即可。
313 净化柱洗脱量考查 取过40目筛的三七粉,依法超声提取30min,过滤于10ml刻度试管中,精密吸取1100ml上中性氧化铝柱,用75%乙醇洗脱,依次收集洗脱液30ml,10ml,10ml,将收集的三份洗脱液分别减压回收至干,用甲醇定容至5ml容量瓶中,依法测定指纹图谱,结果显示,第2份和第3份洗脱液中剩余成分很少,且与第1份洗脱液相比也无新的色谱峰出现,故确定收集洗脱液40ml即可。
314 供试品溶液的制备 取三七粉末(过40目筛)015g,精密称定,置25ml三角瓶中,加75%乙醇10ml超声提取30min,过滤于10ml刻度试管中,精密吸取1100ml上中性氧化铝柱(层析用中性氧化铝100~200目,1100g)用75%乙醇洗脱40ml,洗脱液减压回收至干,残渣用甲醇定容至5ml容量瓶中,摇匀,过0145Lm滤膜,即得供试品溶液。4 参照物的选择和制备
#11#第9卷第1期2003年2月中国实验方剂学杂志
ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeVol.9,No.1Feb.,2003
人参皂苷Rg1为指纹图谱中峰面积积分值较大、出峰时间较早、很稳定的一个峰,而且可以购买到对照品,故选择人参皂苷Rg1作为参照物。取人参皂苷Rg1对照品,用甲醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。5 指纹图谱的测定
精密吸取供试品溶液20Ll,注入液相色谱仪,记录60min的色谱图。以人参皂苷Rg1色谱峰(S峰)的保留时间和峰面积积分值为1,计算相对保留时间和峰面积积分值的比值。6 实验方法考察
611 精密度试验 取同一批三七药材,按21214方法制备供试品溶液,连续进样5次,测定指纹图谱,结果各峰面积积分值比值的RSD在1171%~2162%之间,相对保留时间差别在01006~0126min之间。
612 稳定性实验 取同一批三七药材,按21214方法制备供试品溶液,分别在0h,6h,12h,16h,20h检测指纹图谱,结果各峰面积积分值比值的RSD在1190%~2149%之间,相对保留时间差别在01006~0126min之间。
613 重现性实验 取同一批三七药材,按21214方法制备供试品溶液,平行操作制备5份,分别检测指纹图谱,结果各峰面积积分值比值的RSD在3147%~3157%之间,相对保留时间差别在01006~0126min之间。
7 实验结果
711 指纹图谱 测得十批三七药材的指纹图谱见附图1,标定共有指纹峰24个,其中包括作为参照物的人参皂苷Rg1色谱峰(S峰)。
712 共有指纹峰的峰号及其相对保留时间
表1 共有指纹峰的峰号及其相对保留时间
峰号14S912151821
相对保留时间峰号相对保留时间
01058010951100011284114011159311221061
2571013161922
0107401109110181130511442118201191921076
峰号3681114172023
相对保留时间
0108201904112741134011575118561192821436
713 峰面积积分值比值 按照指纹图谱技术要求,对单峰面积积分值占总峰面积积分值5%以上的色谱峰(1~5号、10号、21号,S峰为参照物Rg1峰)计算了峰面积积分值比值,结果见表2。
表2 峰面积积分值比值及准许误差范围
峰号1~5S1021
峰面积%>20%10~20%5~10%10~20%
峰面积比值(n=10)
21657110000154701739
01383~0171101554~01924准许误差范围21126~31188
8 讨论
本文用梯度洗脱法使三七药材得到了较好的分
离,方法考察实验结果证明该方法准确可靠,可用于三七指纹图谱测定。
经过对10批三七药材进行测定,制定了其指纹图谱检测标准及相应的技术参数(10批平均值),非共有峰占总峰面积的百分比均小于10%。
附图1 十批三七药材指纹图谱
#12#
