油脂加工 粮油食品科技第２０卷２０１２年第５期 固相萃取一气相色谱法测定 食用植物油中多种有机磷 田忙雀，吴丽华，杨勤元 （西安市粮油质量检验中心，陕西西安７１０００３） 摘要：针对国标方法规定的植物油中有机磷农药前处理方法操作复杂、提取效果不好的情况，通 过反复试验，建立了混合溶剂提取、氟罗里硅土固相萃取柱净化的样品前处理方法，该方法操作简 单，农药的回收率高。 关键词：固相萃取；气相色谱；有机磷农药；植物油 中图分类号：ＴＳ ２０１．６；ＴＳ ２０７．５ ３文献标识码：Ａ文章编号：１００７—７５６１（２０１２）０５—００３６—０３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ ｂｙ ｓｏｌｉｄ—ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ＴＩＡＮ Ｍａｎｇ—ｑｕｅ，ＷＵ Ｌｉ—ｈｕａ，ＹＡＮＧ Ｑｉｎ—ｙｕａｎ （Ｘｉ ａｎ Ｇｒａｉｎ＆Ｏｉｌ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｘｉ ａｎ Ｓｈａａｎｘｉ ７１０００３） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ｉｎ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＧＢ／Ｔ５００９．２０—２００３ ｉｓ ｖｅｒｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｎｏｔ ｖｅｒｙ ｗｅｌｌ ｅｉｔｈｅｒ．Ａ ｎｅｗ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｍｉｘｅｄ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｌｕｍｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ｅｓｔａｂ— ｌｉｓｈｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｉａｌｒ ａｎｄ ｅｒｒｏｒ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｐｒｏｖｅｄ ｓｉｍｐｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉ ｇｈ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ａｌｌ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｏｌｉｄ—ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ；ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ 从２０世纪７０年代起，有机磷农药就开始用于 防治农作物病虫害，由于其具有药效高、品种多、防 １材料与方法 １．１实验仪器与试剂 治范围广、成本低、选择性强、在环境中降解快、残毒 低等优点，现仍在世界范围内广泛应用¨ 。因此， 对于农作物中有机磷农药残留的研究一直是一个重 岛津ＧＣ一１４Ｃ气相色谱仪，配火焰光度检测器 （ＦＰＤ）；ＤＢ一１７０１毛细管柱（３０ ｍ×２５０ ｍ×０．３２ Ｉｘｍ），购于美捷司；Ｆｌｏｒｉｓｉｌ ＳＰＥ，规格：３ ｍＬ，５００ ｍｇ，购于美捷司； 乙腈、石油醚、丙酮均为色谱纯。农药标准品： 敌敌畏、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、对硫磷，规格：１．０ ｍｌＭ支，浓度为１００ 科研监测所。 １．２实验方法 要课题。我国是世界第一植物油消费大国，研究食 用植物油的安全问题具有重要的意义。近年来在植 物油中检出残留农药的情况也时有发生，因此检测 食用植物油中农药残留也很有必要。 在开展食用植物油中有机磷农药检测工作时， 笔者发现ＧＢ／Ｔ ５００９．２０—２０Ｏ３＿２ 中植物油中有机 磷农药检测的前处理方法操作复杂，费时费力，容易 乳化，有时操作稍不注意会导致实验失败，回收率也 较低。笔者参考了一些文献资料，并进行了大量的 试验和比较，最终找到了一种操作相对简单而且效 果较好的前处理方法。 收稿日期：２０１２—０４—１６ 作者简介：田忙雀，女，１９６０年出生，陕西华县人，工程师 ｍＬ，均购于农业部环境保护 １．２．１标准溶液的配制与标准曲线 将５支有机磷农药标准物质分别转移到５个 ２５ ｍＬ的容量瓶中，用丙酮作溶剂冲洗安醅瓶并定 容，配成４．０ ｔｘｇ，／ｍＬ的农药标准溶液，单标进样确 定各个农药的出峰时间和顺序。然后再取这５种有 机磷农药各ｔ支转移到１个２５ ｍＬ的容量瓶中，用 丙酮定容配制成４．０ ｐ．ｇ／ｍＬ的５种有机磷农药的 国 粮油食品科技第２０卷２０１２年第５期 混合标准储备液。 吸取上述有机磷混合标准储备液不同体积，配 制成５个浓度梯度的标准系列。然后分别进样分 析，测定峰面积，以标准溶液的浓度为横坐标，以峰 面积为纵坐标，制作５种有机磷农药的标准曲线。 １．２．２样品的提取 油脂加工 ＤＢ一１７０１色谱柱５种有机磷农药分离度好，而且响 应值也较高；采用ＤＢ一５色谱柱，倍硫磷和对硫磷 没能完全分离，相同浓度的标准溶液在ＤＢ一５色谱 柱上的响应明显比在ＤＢ一１７０１色谱柱的响应低很 多。因此，本试验选择了ＤＢ一１７０１色谱柱进行色 谱分析。 ５ 方法１ 采用ＧＢ／Ｔ ５００９．２０—２ｏ０３中第二法 粮、油、菜中有机磷农药残留量的测定１４．１．４法。 方法２称取３．００ ｇ植物油于５０ ｍＬ离心管 中，加入１２ ＭＬ石油醚的乙腈饱和溶液，于旋涡混匀 器上低速振摇１ ｍｉｎ，转移至梨形瓶；加乙腈的石油 醚饱和溶液２５ ｍＬ，剧烈振荡，静置分层，将下层液 通过滤纸过滤转移到一平底烧瓶中，再往梨形瓶中 加入乙腈的石油醚饱和溶液２５ ｍＬ，剧烈震荡，静置 分层后，下层液再通过滤纸过滤转入平底烧瓶中；然 名４ ＼ ３ ２ ５ １Ｏ ｌ５ 时间／ｒａｉｎ 品种：１一敌敌畏；２一甲拌磷；３一稻瘟净；４一倍硫磷；５一对硫磷。 图１ ５种有机磷农药标准样品的色谱图 （ＤＢ一１７０１色谱柱，０．１６ ｇ／ｍＬ１ ３．２ 后将平底烧瓶于旋转蒸发仪上浓缩近干，氮气吹干， ５ ｍＬ丙酮溶解，待净化。 方法３称取３．００ ｇ植物油于５０ ｍＬ离心管 中，加入１２ ｍＬ石油醚溶液，于旋涡混匀器上低速振 摇１ ｍｉｎ，转移至梨形瓶，梨形瓶中加乙腈２５ ｍＬ，剧 ３．Ｏ ２．８ 矗２．６ 烈振荡，静置分层，将下层液通过滤纸过滤转移到一 平底烧瓶中，再往梨形瓶中加入乙腈２５ ＭＬ，剧烈震 ２．４ 丑］ ２＿２ ２．０ 荡，静置分层后将下层液转入平底烧瓶中，然后将平 底烧瓶于旋转蒸发仪上浓缩近干，氮气吹干，５ ｍＬ 丙酮溶解，待净化。 １．２．３样品的净化 １．８ ＩＵ ｌ ２Ｕ ２ 时间／ｒａｉｎ 品种：１一敌敌畏；２一甲拌磷；３一稻瘟净；４一倍硫磷；５一对硫磷。 图２ ５种有机磷农药标准样品的色谱图 （ＤＢ一５色谱柱，０．１６￣ｇ／ｍＬ） 将Ｆｌｏｆｉｓｉｌ固相萃取柱装在固相萃取装置上，加 上漏斗，固相萃取柱中加入６ ｇ经高温处理过的无 水硫酸钠； ＤＢ一５是弱极性色谱柱，ＤＢ一１７０１是中等极 性的色谱柱，它们都是测定农残常用的色谱柱。有 机磷农药种类较多，极性差异也较大，因此对于不同 的有机磷农药适合不同类型的色谱柱，对于本试验选 择的几种有机磷农药就适合用中等极ｆ生的色谱柱。 ２．２标准曲线和最低检出限 Ｆｌｏｒｉｓｉｌ固相萃取小柱用８．０ ｍＬ丙酮淋洗，当溶 剂液面到达无水硫酸钠层表面时，立即倒人待净化 的提取液，同时用一个５０ ｍＬ的平底烧瓶接收，然后 再用６ ｍＬ的丙酮洗脱。将盛有洗脱液的烧瓶于旋 转蒸发器上浓缩近干，氮气吹干，丙酮定容５．０ ｍＬ。 １．２．４样品测定 将４．０ ｇ／ｍＬ的５种有机磷农药的混合标准 储备液用丙酮稀释成０．１０￣ｇ／ｍＬ、０．２０ ｇ／ｍＬ、 ０．４０ ｇ／ｍＬ、１．０￣ｇ／ｍＬ、２．０ ｗｇ／ｍＬ５个浓度梯度， 色谱柱：ＤＢ一１７０１（３０ ｍ×２５０ ｍ×０．３２ ｍ）；柱前压：１４０ ｋＰａ；载气：９９．９９９％氮气；检测器 温度２５０ ｏＣ；进样口温度２３０℃；色谱柱程序升温： 起始温度１２０ ｏＣ，以８ ｃＣ／ｍｉｎ升至２３０℃，保持 ６ ｍｉｎ。进样方式：不分流进样。进样量：２．０ 。 然后由低浓度到高浓度依次进样２．０ 标准曲线，曲线方程见表１。 进行色谱 分析。以浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标制作 以仪器噪音１０倍的色谱峰高作为最小检出衡 量指标，确定每种农药的最小检出量，结果见表１。 由表１可以看出各种农药的线性好，灵敏度高，最小 检出量均远低于其在植物油中的最大残留限量 。 圆 ２结果与分析 ２．１色谱柱的选择 图１和图２是５种有机磷农药标准分别在 ＤＢ一１７０１和ＤＢ一５色谱柱上的出峰情况。采用 油脂加工 粮油食品科技第２０卷２０１２年第５期 表１ ５种有机磷类农药的线性回归方程和相关系数 代替直接用乙腈提取，这样在萃取时，不再有乙腈和 农药名称 线性方程 相关系数 艮 ） 石油醚之问的相互溶解过程，所以分层特别迅速，即 使在剧烈振摇后形成乳浊液仍然可以很快分层。在 将提取液通过滤纸过滤时，滤纸上吸附了一些油滴， 说明在乙腈层中还溶解有少量的油脂，所以在提取 之后还要进行脱脂处理。 ２．４净化 将方法２中的提取液浓缩吹干后，发现瓶底有 ２．３提取方法选择 明显油滴，直接将其用丙酮溶解后进样，各种农药的 在采用国标方法ＧＢ／Ｔ ５００９．２０—２Ｏ０３检测食 回收率很好，说明提取效果较好，但是这样不经过脱 用植物油样品中的有机磷农药时，特别容易乳化，经 脂直接进样对气相色谱进样口衬管以及色谱柱的使 常需要很长时问的静置或是离心分离才能分层，在 用寿命都有影响，因此采用弗罗里硅土 （ｆｌｏｒｉｓｉｌ） 用二氯甲烷提取时，有时还会在溶液中间形成一个 固相萃取柱进行净化处理。弗罗里硅土材料对于油 球状的水包油而导致试验失败，另外该方法不可避 脂等杂质有很好的吸附作用，ｌｆｏｒｉｓｉｌ固相萃取柱广 免地在提取液中会残留部分水分，必须通过脱水的 泛用于农药残留分析的前处理上，本试验采用ｆｌｏｒｉ— 过程，整个提取净化过程比较复杂，在试验操作成功 ｓｉｌ固相萃取柱净化，脱脂效果较好，而且农药的回 的情况下，回收率最好能达到７５％～８０％，因此该 收率也很好。 方法并不尽如人意。 ２．５加标回收实验 在本试验方法２中，首先用石油醚的乙腈饱和 在菜籽油中进行０．０５ ｍｇ／ｋｇ、０．１０ ｍｇ／ｋｇ、０．２０ 溶液溶解油脂，然后再用乙腈的石油醚饱和溶液将 ｍｇ／ｋｇ三水平的加标试验，每个水平重复三次；采用 农药从石油醚层中萃取出来，植物油脂容易溶解于 提取方法２和１．２．３的方法进行油脂样品的前处 石油醚中，有机磷农药较易被乙腈提取，所以最后油 理，按照１．２．４的色谱条件检测，测定该方法条件下 脂溶在石油醚层，而有机磷农药被提取到乙腈层中， 各种农药的加标回收率，结果见表２。 从而达到脱脂和提取的效果。方法３是直接用石油 从表２可以看出，５种有机磷农药的平均回收 醚溶解油脂，然后再用乙腈萃取农药，在用乙腈萃取 率为８４．６％～１０２．４％，变异系数≤３．０６％，说明该 时，剧烈震荡后，形成乳化层较难分层。方法２与方 方法准确度好，精密度高。 法３不同之处是方法２采用乙腈的石油醚饱和溶液 表２方法的回收率和变异系数 ３ 结论 ［Ｊ］．环境保护，１９９９，（９）：２３—２５． 试验证明，采用混合试剂（石油醚的乙腈饱和 ［２］ＧＢ／Ｔ ５００９．２３—２００３，食品中有机磷农药残留量的测定［ｓ］． 溶液溶解油脂，乙腈的石油醚饱和溶液）提取和弗 ［３］赵俊虹，周陶忆．气相色谱法同时测定氢化植物油中六种有机磷 农药［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（１２９）：５３３—５３５． 罗里硅土固相萃取净化的前处理方式特别适合于食 ［４］ＧＢ／Ｔ ２７６３－－２００５食品中农药最大残留限量［ｓ］． 用植物油中有机磷农药残留的分析检测。 ［５］王肇慈主编．粮油食品卫生检测（第二版）［Ｍ］．北京：中国轻 参考文献： 工业出版社，２００１．２７８；３３２． 『１］１华小梅，江希流．我国农药的生产使用现状及其对环境的影响 圈
