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组织培养-柑桔胚性愈伤组织的诱导

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柑桔胚性愈伤组织的诱导

1 幼嫩胚珠诱导愈伤组织培养基

(1)MT+ME(500mg/L)

(2)MT+BA10mg/L

(3)MT+IAA(0.1mg/L)+KT(0.5mg/L)

2.成熟果实未发育胚珠诱导愈伤组织培养基

(1)GA3(1mg/L)+SAD(40mg/L)+MT

(2) 2,4-D(0.01mg/L)+BA(0.1mg/L)+MT

附成熟果实未发育胚珠的灭菌及培养方法:

取成熟果实,将果实剖开,去掉果肉,可发现囊衣内紧靠中柱处有许多未发育的小胚珠,长约1.5-2.5mm。用小镊子将这些未发育胚珠轻轻挑下,放入一培养皿中,培养皿中预先放入一张滤纸,以预防小胚珠干燥失水,取无菌滤纸一张,漏斗一支,将滤纸放入漏斗中,而后将已取出的小胚珠放入其中,再将3%次氯酸钠倒入漏斗进行消毒,消毒15分钟后,用无菌水进行冲洗3-5次,每次10分钟,然后将滤纸及小胚珠取出接种于诱导培养基中,进行暗培养。1-2个月后即可看到有胚状体的形成,有的从胚状体上直接形成愈伤组织,有的胚状体继续发育形成小植株,部分胚状体会产生次生胚状体,将这些胚状体

在MT+AgNO35mg/L培养基上进行暗培养,有利于愈伤的形成。

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