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用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫皮层细胞骨架的构形

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维普资讯 http://www.cqvip.com 动物学研究2004。Oct.25(5):422—428 CN 53--1040/Q ISSN 0254--5853 Zoological Research 用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫 皮层细胞骨架的构形 朱 慧 ,邹士法 ,李艺松 ,倪 兵 ,顾福康 , (1.华东师范大学生命科学学院,上海200062;2.Department of Molecular Microbiology&Immunology. School of Public Health,Johns Hopkins University,Baltimore,MD 21205,U.S.A.) 摘要:由扫描电镜术显示,应用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫(Euplotes gracilis)皮层细胞骨架是由 非纤毛区皮层骨架、纤毛器骨架及其附属纤维等构成的三维结构网架。各类细胞骨架以纤维物质为基本成分组 成纤维网、纤维层、纤维束和纤维薄片等不同形态单元。其中:非纤毛区皮层骨架以表面纤维网和表膜下纤维 层为形态单元位于细胞的外周层;纤毛器骨架中的口围带骨架、口侧膜骨架、额腹横棘毛骨架按各自的分布图 式在皮层内定位,成为主要的皮层骨架结构。尽管这些纤毛器骨架显示不同的形态,但却具有相同的建构特 征,即都是由纤毛器的毛基体、纤毛器托架和骨架附属纤维相互联系镶嵌在一起形成的相对的结构单元。 分析推测,游仆虫皮层表面纤维网使细胞表面形成区域化结构,它也可能与细胞表面各部分的联系及其细胞与 环境的相互作用有关;纤毛器骨架中各个纤毛器的毛基体复合结构可能对纤毛器托架和骨架附属纤维等起到微 管组织中心的作用。 关键词:小游仆虫;表面纤维网;毛基体;纤毛器骨架;骨架附属纤维 中图分类号:Q21;Q959.117 文献标识码:A 文章编号:0254—5853(2004)05—0422—07 Cortical Cytoskeleton of Euplotes gracilis(Protozoa, Ciliophora)by Non-Ionic Detergent Extraction ZHU Hui ,ZOU Shi—fa ,LI Yi—song ,NI Bing ,GU Fu—kang , (1.College ofLife Science,East ChinaNormal University,Shanghai 200062,China;2.Detmnmem of c nr Microbiology&lnmmnology School ofPublic Health,Johns Hopkisn University,Baltimore,MD 21205,U.S.A.) Abstract:By means of non—ionic detergent extraction and scanning electorn microscopy.it was shown that the corti— cal cytoskeleton iS a three.dimension network composed of non—ciliaed.regional skeleton.ciliature skeleton and skeleton— associated fibers in Euplotes gracilis.All kinds of the skeleton are made up of tl1e fibers forming fiber net,layer,band, sheet and other structural units. rhe non—ciliaed co ̄ical skeleton iS composed of tl1e surface fiber net and tl1e sub.pellicu— lar fiber layer lcoated in tl1e co ̄ical periphery.,I'}le ciliature skeletons.i.e.adoral zone of membranelles skeleton. paroral membrane skeleton and frontla—ventral—transverse cirri skeleton.are located in tl1e codex according to tl1eir co ̄ico. type and form an elementary part of the venial cytoskeleton.Although these skeletons manifested different appearances, they possessed identieal structure,namely a functional unit formed by the kinetosomes.ciliature bracket and skeleton—as— sociated fibers.It Was supposed that the fiber net forming the regional structures on the cell surface might play a role in connection of the surface parts and in tl1e interaction between the cell and its enviornment.In ciliature cytoskeleton.the kinetosomal complex might play a role of microtubule-organizing center in the formation of ciliature bracket and skeleton- sasociatedfibers and etc. Key words:Euplotes gracilis;Surface fiebr net;Kinetosome;Ciliature skeleton:Skeleton—associated fiebr 在纤毛虫中,皮层细胞骨架(cortical cytoskele—ton)与细胞形态的保持和纤毛运动有关,是细胞 收稿日期:204—05—24;接受日期:2004—06—22 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270160) 通讯作者(Corresponding author).E-mail:tkgu@bio.ecnu.edu.cn 维普资讯 http://www.cqvip.com 5期 朱慧等:用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫皮层细胞骨架的构形 外层的最复杂的功能结构之一。自从Grim等 (Grim et al,1980;Grim,1982)和Williams等 经短时间抽提后,尚见游仆虫背面存在完整的 纤维网。其中,背纤毛列的部分纤毛被去除后,留 (Williams&Bakowska,1982;Williams,1986)应 下纤毛孔,在每个纤毛列右侧有突起的嵴,于每两 用改进的生化去膜方法和扫描电镜术成功地显示了 列背纤毛问有4列纤维网格,各个网格由2根平行 纤毛虫局部皮层骨架的三维形态以后,作者等应用 的纤维围绕而成,呈不规则的五角或六角形;相邻  改进的生化去膜方法,将纤毛虫皮层细胞骨架的研 网格间纤维物质共用(图1)。去除全部背纤毛后,究又发展到接近对纤毛器水平及其皮层整体水平的 背嵴已不存在,在原纤毛基部留下由纤维围成的小 了解(Zou&Zhang,1989;Gu&Zhang,1989, 孔,许多情况下,纤维网由单根纤维连接组成,其  1991)。目前所知,纤毛虫皮层细胞骨架以微管纤 相邻的纤维网与纤毛孔纤维相连续(图2)。维为基本成分,组成了纤毛、纤毛器骨架、骨架附 属纤维、皮层微管束或微管层等多种骨架结构(Gu &Zhang,1991;Gu&Ji,1996),但是对这些骨架 结构的详细建构和定位,及其可能作用等尚不甚了 解,主要原因可能是以前采用的方法不能获得更 多、更完整的骨架成分,为此作者在本文中对纤毛 虫皮层骨架的形态作了进一步的探索。 1材料和方法 1.1材料 所用材料为小游仆虫(Euplotes gracilis),在上 海市浦东新区川沙镇小河内采集获得。样品据Kahl (1935)和Tuffrau(1960)的资料鉴定,并经分离 和培养建立纯系。 1.2方法 将游仆虫接种在表面皿中培养,在2O cI=左右 的温度下,定时喂食草履唇滴虫(Chilimonas paramecium),使无性生殖的纤毛虫达到较高 的密度。 在体视显微镜下,取处于非阶段的游仆 虫,按Zou et al(1990)报告的方法,适当改变处 理时间,抽提皮层细胞骨架。抽提液配方:0.25 mol/L蔗糖,SEMT液[1 mol/L蔗糖,1 mmol/L EDTA,0.1%(v/v)0一巯基乙醇,10 mmol/L Tris—HC1(pH 9.3)j,lO%(v/v)Triton X一100, 2.5%(v/v)戊二醛,按6:10:2:1比例混合。此 后,按Gu&Ni(1993)报告的方法,将骨架样品 用15%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%、95%、100%梯度酒精脱水,Hitachi HCP一2 临界点干燥仪干燥,Hitachi HUS一5GB真空镀膜台 喷镀,JXA一840扫描电镜观察和照相。 2结果 2.1背、腹面网状骨架和表膜下纤维层 游仆虫腹面布满大小不一的多角形或椭圆形纤 维网,各个网格由粗细相近的单线纤维围绕而成, 相邻网格间纤维物质共用。在整个腹面纤维网中, 额腹横棘毛基部按既定的纤毛图式占据了网区中的 定位置(图3)。 腹面表膜被去除后,在留有腹面纤维网的网格 下暴露出一纤维层,即表膜下纤维层,该纤维层与 腹面纤维网间隔很小的距离,它是由粗细相近的纵 纤维和横纤维交错在一起形成的薄薄的一层(图 4)。 2.2口围带骨架 去纤毛杆后,口围带小膜留下裸毛基体列,每 个小膜由3列基体组成,为长条形,其各个毛基体 整齐排列,从表面观察,呈中空的球形(图5)。 去膜后,在整个口围带区暴露出由纤维编织成的各 个按序排列的小膜骨架单元。每个小膜骨架上有3 列毛基体,其中前一列短,后两列长。在骨架左侧 分化出几根纤维,纤维聚集成一束,向后端细胞质 伸展,该纤维束为小膜骨架后小根纤维(图6)。 在两个小膜骨架问于前、后相邻的两列小膜基体问 均有一根纤维连接,例如在口围带骨架中部,两小 膜骨架间的连接纤维有3O多根(图7)。此外,在 每个小膜骨架后有一根长纤维,该纤维在前、后两 骨架间,自右至左平行经过骨架的约2/3长度(图 6)。 在各个小膜骨架中,于每列基体内每两个相邻 的基体问有两根平行的纤维连接(基体间连接), 于前、后两列基体问由斜向的纤维在前、后相邻的 基体间形成纤维连接(基体列间连接)(图8)。 去基体后在基体下水平的口围带骨架中,每个 小膜骨架形似一个长条形的薄片,各个小膜骨架单 元中纤维形成不同密度的网,其相当于基体下位置 的纤维物质紧密聚合在一起。前部和中部口围带骨 架中,两部分各个小膜骨架的形态相近(图9),但 维普资讯 http://www.cqvip.com 动物 研究 5岳 维普资讯 http://www.cqvip.com 5 朱墨等:用非离子去垢制抽提获得枘小游仆虫监 蛔咆骨椠的抽毋 罔l一17小游仆虫背、腹面皮层细胞骨梨 F gs I—I 7 Cyto ̄keJ Im 0f dt ̄rsal& Itr cortex in Euplot g 】 除出邬抒背纤毛后f1勺肯而纤维网(D p L山 L[Jig…(k箭头示背而嵴小箭头 纤毛扎)[n.州 d k c h … J.,dkt,'d 盯de-rill j m1 .I~ ……  sh0w dotal ̄dges.sl1d【…show ellis.呻H )]; 2际去全部背 乇后的背埘纤堆闷(DFN】(箭头示纾毛扎)[D。 d胁㈣elworks(DF )aft维普资讯 http://www.cqvip.com 动物学研究 25卷 ciliary pores)]; 3.去纤毛后显示的腹面纤维网(VFN)(箭头示部分额棘毛基部)[Venial fiber networks(VFN)(alTOWS show a portion of eirrla bases)after de—eiliaed]; 4.腹面表膜下纤维层(大箭头所示)和腹面纤维网纤维(小箭头所示)[Fiber layer(big alTOWS)beneath ventral pelliele,and fibesr of VFN(small alTOWS)]; 5.去纤毛杆后1:3围带小膜中的基体列(箭头所示)[Kinetosomal rows(alTOWS)of membrnaelles in adorla zone of membrnaelles (AZM)after de.shafted]; 6.1:3围带小膜骨架(Ms)及其骨架后小根纤维(大箭头所示)(小箭头示小膜骨架问一根长纤维)[Membrnaelle—skeleton(Ms) nad the subetoeytoplasmie rootlets(big m'mws)(small alTOWS show a long filament between MS)J; 7.口围带小膜骨架及其骨架间的纤维连接(箭头所示)[Membrnaelle—skeletons(MS)and iflmaent links(arrows)between MS]; 8.口围带小膜骨架中基体列内的基体间连接及相邻基体列间的纤维连接[Filmaent likns(alTOWS)between the kinetosomes wihtin sslne kinetosomes row or in inter—kinetosomal rows]; 9.前部的1:3围带小膜骨架(箭头示毛基体基部位置)[Membrnaelle—skeletons in anterior portion fo AZM(flr-i'OWS show sub—kinetoso— mal bases)]; l0.后部的口围带小膜骨架(箭头示相邻两小膜骨架间的空隙)[Membrnaelle.skeleton in posterior portion fo AZM(alTOWS show in- te ̄'vlas between MS)]; l1.含毛基体的口侧膜骨架(PMS)及其附属纤维(LFL——纵纤维层,RwF——肋壁纤维)[Parorla membrnae skeleton(PMS) wiht kinetosomes nad ifbers(or iflmaents)associated the skeleton(LFC—longitudinal ifber layer,RWF—ribbed wall iflmaents)]; l2.除去毛基体后的口侧膜骨架(箭头示两部分平行排列的纤维束)[Parorla membrnae skeleton(PMS)frede fo kinetosomes(ar— rOWS show two parts fo parlalel ifbers)]; l3一l4.含毛基体的额腹棘毛骨架(FVCS)及其附属纤维(ALF——前纵纤维,PLF——后纵纤维,TF——横纤维,FcB—— 围棘纤维篮)[Frontla—ventrla cirri skeletons(FVCS)and ifber bands(ALF—anterior longitudinal ifbesr,PLF—posterior longitudinal fibesr,TF—trnasvelse ifbesr,FCB—fibrill ̄cirri basket)]; l5.棘毛骨架中的连接纤维(箭头所示)[Filmaent links(alTOWS)in the cirri skeleton]; l6.除去毛基体后的棘毛骨架(cs)(ALF——前纵纤维,PI.F一后纵纤维)[A cirri skeleton ed of kinetosomes(ALF—anteir— or longitudinal ifbesr,PLF—posterior longitudinal ifbers)]; l7.除去毛基体后的横棘毛骨架(TCS)及其前纵纤维(ALF)和放射纤维(RF)[Trnasverse cirri skeletons(TCS)freed fo kine— tosomes(ALF—anterior longitudinal ifbesr,RF—radiating ifbesr)]。 后部的小膜骨架排列较紧密,两小膜骨架间仅存在 维疏密相间,形成规则排列的zJ, ̄L,zJ, ̄L可能是毛 少部分空间(图10)。 基体着生的位置。骨架附属纤维的纤维条索清晰可 2.3口侧膜骨架 见,其纤维根部牢牢地镶嵌在骨架薄片中,部分纤 去纤毛后,口侧膜骨架上的裸毛基体显示规则 维并穿过整个骨架(图16)。在横棘毛骨架中,前 排列的形态,每个毛基体呈中空的球形,相邻基体 纵纤维自板块样薄片后端穿过骨架向前发出纤维束 间有纤维连接。在骨架两侧有强固的纤维层附着, 至细胞前端,此外骨架还发出细小的放射纤维(图 其左侧是口腔肋壁纤维,右侧是一纵纤维层(图 17)。 11)。去毛基体后,骨架呈一狭带形的薄片,薄片 由两部分各平行排列的纤维束交错编织而成,其中 3讨论 形成的规则排布的小孔可能是毛基体附着的位置 3.1细胞表面纤维网是皮层细胞骨架的一部分 (图12)。 应用银浸法显示,游仆虫类纤毛虫的背、腹面 2.4额腹横棘毛骨架及其附属纤维 有一层与银物质起反应后沉淀形成的网状结 在存在毛基体的额腹棘毛骨架中,骨架外围一 构,其中腹面的网格大小不等,背面的网格大小相 层围棘纤维篮,不同位置的棘毛其篮的大小各异, 近且按规则排布,如同在草履虫(Paramecium)中 但均显示为不等边多角形,组成篮的外缘纤维粗细 所见的银线网那样,常将这类网状结构称为银线网 相近,篮纤维与前述的表面纤维网在一个平面上并 或嗜银网,其网的形态特征也是种水平分类的依据 似乎与后者相连续(图13)。在篮的表面下位置由 之一(Tuffrau,1960)。应用扫描电镜术对锇酸固 其外缘分别向前、后和横向发出纤维束,穿行于皮 定液固定的游仆虫样品也可显示其背、腹面的网 层纤维网中,成前纵纤维、后纵纤维和横纤维或放 格,网格的形态与银浸法获得的嗜银网结构相一致 射纤维(图13—14),在每两列基体中的相邻毛基 (Gu et al,1987),由此也表明,游仆虫背、腹面的 体之间也有纤维连接(图15)。 嗜银网是一种实际存在的结构。在本文中应用生化 去毛基体后,暴露出由纤维物质交错编织成的 去膜方法提取获得的游仆虫背、腹面网状纤维骨架 棘毛骨架。每个骨架是一个薄片样结构,其中的纤 的整体图形,在其他种游仆虫中未见报道,这与同 维普资讯 http://www.cqvip.com 5期 朱慧等:用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫皮层细胞骨架的构形 种游仆虫中嗜银网的形态及其网格的排布等特征是 器间的联系,以及包括纤毛器运动在内的细胞运动 Gu et al,2003)等认识外,由于细 相吻合的。这层位于虫体表面的纤维网,使细胞表 的协调有关”(面形成区域化状态,除对纤毛虫细胞表膜外表面的 胞的结构与其功能的发挥是密切联系的,游仆虫中 加固作用外,可能与细胞表面各部分的联系及其细 各个纤毛器的毛基体复合结构,是纤毛运动的主 体,对纤毛器托架和骨架附属纤维等可能起到微管 胞与环境的相互作用有关。 3.2纤毛器骨架的建构特征 组织中心的作用。 游仆虫皮层细胞骨架中,口围带、口侧膜骨架 3.3皮层细胞骨架的其他作用 和额腹横棘毛骨架及骨架附属纤维按各自的分布图 以前的研究表明,纤毛虫的皮层微管及其他纤 式在皮层内定位,成为主要的皮层骨架结构。尽管 维骨架,对细胞形态的保持、形态发生,支持纤毛 这些纤毛器骨架具有不同的形态,但却显示出相同 的建构特征,例如,纤毛器的毛基体按规则排列着 生在纤毛器托架形成的小孔中,纤毛器托架以纤维 为单元编织成薄片,骨架附属纤维起始于纤毛器托 架并向皮层细胞质伸展,也即,所述的纤毛器骨架 都是由纤毛器的毛基体、纤毛器托架和骨架附属纤 维三者相互联系镶嵌在一起形成的相对的功能 单元。这与以前在四膜虫(Tetrahymena)(Allen, 1967)、草履虫(Ehret&Mcardle,1974)等纤毛虫 中所观察到的,单个纤毛基体与基体附属的横微 管、纤毛后微管等几者形成的功能单元相比较,也 有相似之处。加之以前的工作认为,毛基体与细胞 质中的许多微管纤维相联系,是重要的微管组组织 中心(Gu,1991);本文所观察到的纤毛器骨架其 三者的结构,除以前所提出的“毛基体托架在纤毛 虫细胞皮层中起着微管组织中心的作用”(Pang et al,1992),“骨架附属纤维可能与细胞内各种纤毛 参考文献: Allen RD.1967.Fine structure,reconstruction and possible function of components of the eortex of Tetrahymena P 加丌n蠡【J].J. Protozoo1.,14:553—565. Ehret CF,Mcardle EW.1974.The structure of Paramecium as viewed from ist constituent levels of orgnaization[A].In:Wagtendonk wJV。Paramecium:A Current Survey[M].Amsterdarn:Elsevi. el"Scientiifc Publishing Company.263—338. Grim JN.1982。Subpellicular microtubules of Euptotes earystonu ̄: T}lelr geometry relative to cell form.surface contours and ciliary orgnaelles EJ1.J.( II Sc ..56:471—484. GrimJN,Halcrow KR,Harshbarger RD.1980.Microtubules beneath hte pellicles of two ciliate pmto ̄a as seen wit}I hte SEM[J].J. Protozoo/.,27(3):308—310. Gu FK.1991.Introduciton to Pr0t0zo01。gy[M].Beijing:Higher Ed. ucation Press.180—205.[顾福康.1991.原生动物学概论. 北京:高等教育出版社.180—205.] Gu FK,Ji LM.1996.An ultrastructural study on cortex and macronu. clus of Euptot ̄encysticus EJ].Zoo1.Res.,l7(1):16—22. [顾福康,季玲妹.1996.包囊游仆虫皮层和营养核的超微结 构研究.动物学研究,17(1):16—22.] 器及纤毛器运动,以及胞质、核、有性生 殖过程中原核的迁移等是有作用的(Gu&Zhang, 1991;Santangelo&Bruno,2001)。本文中观察到, 围棘纤维篮纤维围绕棘毛基部组成一个表面相对独 立的单元,纤维网与围着背纤毛基部的小孔纤维相 联系,并且全部纤毛器骨架中的基体间、基体列间 连接纤维将相应的基体、基体列或纤毛器单元联系 起来,这些纤维结构可能与毛基体及纤毛器的相互 间的联系和定位有关;口围带小膜是相当于一个棘 毛单元的运动单元,小膜骨架间的连接纤维、 膜小根纤维对各小膜的联系、定位及协调运动是有 作用的;棘毛骨架附属纤维是骨架主体向皮层细胞 质远端的延伸结构,并与其他皮层结构发生直接或 间接的联系,其作用可能不仅局限于支持、稳定纤 毛器骨架及其纤毛器运动,其中横棘毛基部前纵纤 维,几乎向前端纵行约细胞的2/3长度,这类纤维 的存在和作用是值得探索的。 Gu FK·Ni B.1993.The exploration of preparing protozoan speciments for scanning electlon microscopy lJ J.J. in.E如 r.Micros. 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