实验十 微生物的细胞计数
目的要求
了解血球计数板的计数原理，掌握血球计数板的计数方法。
微生物个体生长的时间较短，很快进入繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于具有确定面积和容积的血球计数板上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为1mm，深为0.1mm，容积为0.1mm3。计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。
实验内容
1、镜检计数室 对计数板进行镜检。若有污物，则用自来水冲洗，用电吹风吹干后才能进行计数。
2、加样品 在血球计数板上盖上盖玻片, 用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴,菌液会自动进入计数室，静置5分钟。
3、计数 将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室的位置，再换高倍镜计数。每计数室计5个中格（四角和中间）。计数原则：计上不计下，计左不计右。芽体占母细胞一半时算一个。
数出5个中方格中的总菌数A，若菌液的稀释倍数为B，则计算公式如下： (1) 25个中方格的计数板计算公式
(2) 16个中方格的计数板计算公式
(4) 清洗血球计数板 计数后将血球计数板用自来水冲洗干净，勿用硬物刷，吹干后镜检。若不干净，则必须重复洗涤干净为止。 结果记录 1 第一室 第二室
2 3 4 5 各中方格的菌数 A B 菌数/ml 二室平均值 实验十一 外界因素对细菌的影响
实验目的：
1、了解紫外线杀菌原理及特点。 2、了解药物敏感实验的操作与判断。 3、学会对单糖发酵分解产物的观察。
实验原理：
1、细菌的DNA吸收紫外线后，一条链上相邻的两个嘧啶通过共价键结合形成嘧啶二聚体，从而干扰了DNA的正常碱基配对，导致细菌死亡或变异。
2、药物能抑制细菌的生长。
3、不同的糖对细菌的分解作用不同。 实验器材：
1．菌种：葡萄球菌培养液，大肠杆菌培养液。
2．培养基：琼脂平板培养基，葡萄糖、乳糖、果糖、麦芽糖等发酵管。 3．接种环、接种针、酒精灯、紫外灯、干燥药物滤纸片、镊子、无菌棉棒。 实验内容：
1、紫外线杀菌实验
紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线的波长是200-300nm，而以波长为265-266nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。经紫外线照射损伤的细胞，如立即暴露在可见光之下，则有一部分恢复活力，称为光复活现象。紫外线虽具有较强的杀菌力，但穿透能力不强，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线过滤，因此紫外线适用于表面灭菌和空气灭菌。
2、药敏实验（纸片法）
a、取普通平板一个，用蜡笔在平板底部标记贴药敏纸片的位置。
b、用无菌棉棒沾取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉多余的菌液，用无菌棉棒在培养基表面均匀涂布3次，每次将平板旋转60度，最后沿平板周围涂抹2圈，以保证涂布均匀。
c、待干燥后，无菌操作用镊子取药敏纸片，按标记位置贴在涂布细菌的培养基表面，用镊尖压一下。一次贴好不得移动。纸片一贴上去就不可在拿起来，因纸片中的药物已扩散到琼脂中，每张纸片中心间距不少于24mm，纸片中心距平板边缘距离不少于15mm。直径为90mm的平板最多贴6片。
d、贴上纸片后，须在15min内置37℃培养箱内培养18-24h后观察结果。 e、结果报告，测量抑菌环（无细菌生长的环）的直径，结合药物的性质一般以敏感、中度敏感、耐药3个等级报告结果。
3、单糖发酵实验
a、变黄，无气泡，用+表示；b、变黄，有气泡，用 表示； c、未变化，用—表示。 实验报告：记录实验结果。
