李伟等不同乳腺癌细胞系中ＴＬＲ５和ＮＬＲＣＡ受体的表达和定位第１２期 ・１７６１・ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４８４Ｘ．２０１６．１２．００７ 不同乳腺癌细胞系中ＴＬ 和ＮＬＲＣ４受体的表达和定位① 李伟卓召振骆姝琳任凌雁陈琨刘水和袁军 （贵州省人民医院中心实验室，贵阳５５０００２） 中图分类号Ｒ７３０ 文献标志码Ａ 文章编号１０００－４８４Ｘ（２０１６）１２－１７６１－０５ ［摘要】 目的：探究ＴＬＲ５和ＮＬＲＣＡ受体在不同乳腺癌细胞系ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７和ＭＤＡ—ＭＢ－４３５中的表达和定位 情况，并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞ＴＬＲ５受体的激活情况。方法：利用Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ法检测ＭＤＡ．ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７和 ＭＤＡ—ＭＢ－４３５细胞ＴＬＲ５和ＮＬＲＣ４ ｍＲＮＡ表达水平，用流式细胞仪检测ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７细胞ＴＬＲ５受体的表达和定位。 纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白ＦｌｉＣ（同时激活ＴＬＲ５和ＮＬＲＣＡ两条通路）、Ｆｌｉｃ△９０－９７（不能激活ＴＬＲ５通路）、ＦｌｉＣ． Ｌ３Ａ（不能激活ＮＬＲＣ４通路）、ＦｌｉＣＡ９０－９７：Ｌ３Ａ（两条通路都不激活）。用１ ｇ／ｍｌ重组鞭毛素蛋白刺激ＭＣＦ－７细胞，１２ ｈ后， ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ一８的分泌。结果：ＭＣＦ－７细胞ＴＬＲ５ ｍＲＮＡ表达水平最高，约是ＭＤＡ—ＭＢ－４３５细胞的１ ７００倍，ＭＤＡ—ＭＢ－２３１ 细胞ＴＬＲ５表达水平是ＭＤＡ—ＭＢ－４３５的约２００倍。ＴＬＲ５在ＭＣＦ－７细胞浆和胞膜上均有表达，而ＭＤＡ—ＭＢ－２３１细胞只在胞浆 中表达。激活ＴＬＲ５通路的ＦｌｉＣ和ＦｌｉＣ－Ｌ３Ａ能够刺激ＭＣＦ－７细胞分泌ＩＬ一８，而不激活ＴＬＲ５通路的ＦｌｉＣＡ９０－９７和ＦｌｉＣＡ９０． ９７：Ｌ３Ａ则不能。结论：不同乳腺癌细胞系都表达ＴＬＲ５和ＮＬＲＣＡ，但是表达部位和表达水平不同。ＭＣＦ－７细胞ＴＬＲ５和 ＮＬＲＣ４表达高于其他乳腺癌细胞系。乳腺癌细胞系表面的ＴＬＲ５受体可以被鞭毛素蛋白激活，为进一步探讨ＴＬＲ５通路的激 活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供实验基础。 ［关键词］ 乳腺癌细胞系；ＴＬＲ５；ＮＬＲＣ４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｔｉ０ｎ ０ｆ ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ／＿Ｊ Ｗｅｉ，ＺＨＵＯ Ｚｈａｏ—Ｚｈｅｎ，ＬＵＯ Ｓｈｕ—Ｌｉｎ，ＲＥＮ Ｌｉｎｇ—Ｙａｈ。ＣＨＥＮ Ｋｕｎ，ＬＩＵ Ｓｈｕｉ－Ｈｅ，ＹＵＡＮ Ｊｕｎ．Ｃｅｎｔｒａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４ ｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＭＤＡ— ＭＢ一２３ １，ＭＣＦ－７ ａｎｄ ＭＤＡ．ＭＢ－４３５ ａｎｄ ＴＬＲ５ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＩＴＩＲＮＡ ｌｅｖｅｌ ０ｆ ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４ ｉｎ ＭＤＡ．ＭＢ－２３ １．ＭＣＦ－７ ａｎｄ ＭＤＡ．ＭＢ－４３５ ｃｅｌｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎｄ ＴＬＲ５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ ＭＤＡ．ＭＢ－２３ １ ａｎｄ ＭＣＦ．７ ｃｅｌｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉ－ ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉａｎｔ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＦｌｉＣ（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｂｏｔｈ，Ｉ’ＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４），ｎｉＣ△９０＿９７（ｕｎａｂｌｅ ｔｏ ａｃｔｉｖａｔｅ ＴＬＲ５），ＦｌｉＣ— Ｌ３Ａ（ｕｎａｂｌｅ ｔｏ ａｃｔｉｖａｔｅ ＮＬＲＣＡ），ＦｌｉＣＡ９０－９７：Ｌ３Ａ（ｕｎａｂｌｅ ｔｏ ａｃｔｉｖａｔｅ ｂｏｔｈ ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４）．１ ｇ／ｍｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｌｆａｇｅｌｌｉｎ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ＭＣＦ＿７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．１２ ｈ ｌａｔｅｒ。ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔｅ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．ａｎｄ ＥＬＩＳＡ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ． ８．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＴＬＲ５ ｉｎ ＭＣＦ－７ ｃｅｌｌ ｗａｓ １ ７００ ｆｏｌｄｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＭＤＡ．ＭＢ－４３５．ＴＬＲ５ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＭＣＦ－７ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ ｃｔｙｏｓｏ１．ｗｈｉｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎｌｙ ｉｎ ｃｙｔＯＳＯｌ ｉｎ ＭＤＡ．ＭＢ－２３ １ ｃｅｌ１．ＦｌｉＣ ａｎｄ Ｆ１ｉＣ．Ｌ３Ａ．ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ａｂｌｅ ｔｏ ａｃｔｉｖａｔｅ ＴＬＲ５ ｐａｔｈｗａｙ，ｓｔｉｍｕａｈｅｄ ＭＣＦ－７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｔｏ ｓｅｃｒｅｔ ＩＬ．８，ｂｕｔ ＦｌｉＣ△９０＿９７ ａｎｄ ＦｌｉＣＡ９０－９７：Ｌ３Ａ ｄｉｄ ｎｏｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣＡ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｌｉｎｅｓ．ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｅｘｉｓｔｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ５．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ０ｆ ＴＬＲ５ ａｎｄ ＮＬＲＣ４ ｉｎ ＭＣＦ－７ ｃｅｌｌ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｏｔｈｅｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｌｉｎｅｓ．ＴＬＲ５ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｃａｎ ｂｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ．ａｎｄ ｔｈｅｓｅ ｗｏｒｋ ａｌｓｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｕｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂａｓｉｓ ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔａ ｏｆ ＴＵ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ Ｄ１０ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ． 『Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ＢｒＩｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ：ＴＬＲ５；ＮＬＲＣＡ ＴＬＲｓ在癌症进展中起着重要作用 。研究发 现乳腺癌、宫颈癌、肺癌、前列腺癌等肿瘤细胞均有 ＴＬＲ的表达。ＴＬＲｓ的激动剂有可能促进肿瘤细胞的 增殖，但是也有研究发现，不同的ＴＬＲｓ配体刺激 ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＩＪＲ７和ＴＬＲ９，表现出不同程度的 抗肿瘤效果 。 。鞭毛素是细菌鞭毛的重要构成组 件，也是一种重要的ＰＡＭＰｓ。鞭毛素蛋白作为ＴＬＲ５ 和ＮＬＲＣＡ的天然配体，激活ＴＬＲ５介导的信号通路， 启动促炎基因的表达。先前的研究发现，ＴＬＲ５激动 剂一鞭毛素蛋白具有抑制肿瘤的功能 ｍ］，鞭毛素蛋 ①本文受贵州省卫计委科学技术基金（ｇｚｗｊｋｊ２０１５—１－０２０）和贵州省人民医院博士基金（ＧＺＳＹＢＳ［２０１５］１１号）资助。 作者简介：李伟（１９８３年一），男，博士，主要从事肿瘤免疫方面的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：１ｗｃｙ２０１０＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ。 军（１９７０年一），女，博士，教授，主要从事移植免疫及肿瘤免疫方面的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｕｎｙｕａｎ９９４３０＠１６３ 通讯作者及指导教师：袁中国免疫学杂志２０１６年第３２卷 白和表达鞭毛蛋白的细菌在小鼠模型中表现了抗肿 １．２．４流式细胞术检测乳腺癌细胞系胞膜和胞浆 ＴＬＲ５表达胞膜ＴＬＲ５的表达：用ＰＢＳ洗涤不同乳 瘤效果¨ ｊ。但乳腺癌细胞系中是否存在鞭毛素蛋 白的另外一个受体——ＮＬＲＣＡ，目前尚无研究报道。 不同乳腺癌细胞系包括高转移的人乳腺癌细胞系 ＭＤＡ．ＭＢ．２３１和低转移能力的人乳腺癌细胞系ＭＣＦ一 ７中ＮＬＲＣＡ受体表达情况目前并不十分清楚，本研究 将探讨不同乳腺癌细胞系ＭＤＡ—ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７和 腺癌细胞系，加人ＦｃＲ受体阻断剂孵育２０ ｍｉｎ后， １ ５００ ｒ／ｍｉｎｘ５ ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤一遍，分别加入抗体 ＴＬＲ５．ＦＩＴＣ和同型对照抗体孵育３０ ｍｉｎ后， １ ５００ ｒ／ｍｉｎｘ５ ｍｉｎ洗涤，用ＰＢＳ重悬，用流式细胞 仪进行检测。用Ｆｌｏｗｊｏ软件对结果进行分析，检测 不同乳腺癌细胞系ＴＬＲ５的平均荧光强度，并用直 ＭＤＡ—ＭＢ４３５中ＴＬＲ５和ＮＬＲＣ４受体的表达情况，为 利用鞭毛素蛋白进行抗肿瘤免疫，以及探讨这两条通 路在介导鞭毛素蛋白抑制乳腺癌细胞增殖中的作用 提供实验基础。 方图表示。 细胞膜和胞浆ＴＬＲ５表达：用ＰＢＳ洗涤不同乳腺 癌细胞系，加入ＦｃＲ受体阻断剂孵育２０ ｍｉｎ后，ＰＢＳ 洗涤一遍，加入固定和破膜剂，孵育１ ｈ后， １材料与方法 １．１实验试剂、仪器和细胞系 抗体ＴＬＲ５．ＦＩＴＣ （Ａｂｅａｍ公司）；同型抗体ＩｇＧ２ａ－ＦＩＴＣ、ＤＭＥＭ培养 基（Ｇｉｂｃｏ公司）；Ｌ－谷胺酰胺、氨苄青霉素和链霉素 （北京索莱宝公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）； ０．２５％胰蛋白酶（Ｈｙｃｌｏｎｅ）；人ＩＬ．８细胞因子检测 试剂盒（武汉博士德公司）。ｈＴＬＲＳＦ：ＴＣＣＣＴ— ＧＡＡＣＴＣＡＣＧＡＧＴＣＴＩ￣；ｈＴＬＲ５ Ｒ：ＧＧＴＴＧＴＣＡＡＧＴＣ－ ＣＧＴＡＡＡＡＴＧＣ。ｈＮＬＲＣ－４Ｆ：ＧＴＧＴｒＣＴＣＣＣＡＣＡＡＧ— ｒＩＴＩＴＩ１Ｇ—Ａ；ｈＮＬＲＣ４Ｒ： ＡＧＴＡＡＣＣＡＴＴＣＣＣＣＴＴＧＧＴＣ； ｈＧＡＰＤＨ—Ｆ： ＧＧＡＡＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣ；ｈＧＡＰ— ２ ０００ ｒ／ｍｉｎｘ５ ｍｉｎ离心洗涤一次，分别加入抗体 ＴＬＲ５．ＦＩＴＣ和同型对照抗体孵育３０ ｍｉｎ后，１ ５００ ｒ／ ｍｉｎｘ５ ｍｉｎ洗涤后，用ＰＢＳ重悬，用流式细胞仪进行 检测。用Ｆｌｏｗｊｏ软件对结果进行分析，检测不同乳腺 癌细胞系ＴＬＲ５的平均荧光强度，并用直方图表示。 １．２．５ ＥＬＩＳＡ法检测重组鞭毛素蛋白刺激ＭＣＦ－７ 细胞后ＩＬ一８的分泌 ＭＣＦ－７细胞加入９６孔板， ５０ ｏｏｏ＋／孔，加入鞭毛素蛋白１ ｇ／ｍｌ，刺激１２ ｈ 后收集上清，ＥＬＩＳＡ法检测上清中ＩＬ一８浓度，方法 见ＩＬ一８细胞因子检测试剂盒。 １．３统计学方法实验结果用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ ＤＨ．Ｒ：ＴＣＡＧＣＣＴＹＧＡＣＧＧＴＧＣＣＡＴＧ。所有引物均 软件进行统计处理。所得结果的比较采用Ｏｎｅ—ｗａｙ ＡＮＯＶＡ和ｔ检验共同分析。Ｐ＜０．０５表示差异有统 计学意义。 由上海生工合成。ＦＡＣＳ Ａｉｒｉａ Ｍ。流式细胞仪（ＢＤ公 司）、ＢｉｏＲａｄ ｉＱ５荧光定量ＰＣＲ仪。ＭＤＡ－ＭＢ一２３１、 ＭＣＦ－７和ＭＤＡ．ＭＢ－４３５细胞购自武汉博士德公司， Ｃａｃｏ２２细胞、表达菌株ＦｌｉＣ、ＦｌｉＣ－Ｌ３Ａ、ＦｌｉＣ△９０＿９７ 和Ｆｌｉｃ△９０－９７：Ｌ３Ａ由中国科学院武汉病毒所鄢慧 民研究员惠赠。 ２ 结果 ２．１ 不同乳腺癌细胞系ＴＬＲ５受体基因的表达 因 为ＭＤＡ—ＭＢ－４３５细胞表达ＴＬＲ５和ＮＬＲＣＡ水平很低， 其他乳腺癌细胞ＴＬＲ５ ｍＲＮＡ水平均与之相比，计算 相对表达情况。结果显示，ＭＤＡ—ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７和 １．２实验方法 １．２．１细胞培养ＭＤＡ—ＭＢ－２３１、ＭＣＦ＝７和ＭＤＡ－ ＭＢ－４３５细胞培养于含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ完 ＭＤＡ．ＭＢ－４３５细胞均表达ＴＬＲ５受体，其中ＭＣＦ－７细 全培养基中，每隔３～５ ｄ进行传代培养，待细胞进 入对数生长期时，收获细胞备用。 １．２．２重组鞭毛素蛋白的表达和纯化 方法见参 考文献［１３］。 胞ＴＬＲ５ ｍＲＮＡ表达水平显著高于ＭＤＡ—ＭＢ－４３５和 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞系（Ｐ＜０．００１），约是ＭＤＡ—ＭＢ－４３５ 细胞的１ ７００倍。ＭＤＡ—ＭＢ－２３１细胞ＴＬＲ５表达是 ＭＤＡ ＭＢ－４３５的约２００倍（图１）。 １．２．３ Ｒｅａ１．ｔｉｍｅ ＰＣＲ法检测乳腺癌细胞系ＴＬＲ５ 和ＮＬＲＣ４ ｍＲＮＡ水平。首先，采用ＴＲＮｚｏｌ总ＲＮＡ ２．２不同乳腺癌细胞系中ＮＬＲＣ４受体基因的表达 荧光定量ＰＣＲ结果显示ＮＬＲＣ４受体在ＭＣＦ－７和 ＭＤＡ．ＭＢ－２３１细胞均有相对高的表达，ＭＣＦ－７细胞 ＮＬＲＣ４的ｍＲＮＡ水平显著高于ＭＤＡ－ＭＢ－４３５和 ＭＤＡ—ＭＢ－２３１（Ｐ＜０．００１），约是ＭＤＡ—ＭＢ－４３５的 提取试剂进行样本ＲＮＡ提取，实验操作按产品说明 书进行。然后，将总ＲＮＡ逆转录成ｅＤＮＡ。最后， 每个样品３个复孔，实时荧光ＰＣＲ反应。反应条件 为：（９５ｏＣ ３０ Ｓ，９５℃５ Ｓ）×４０个循环，６０℃３０ ｓ， ｌ１ ０００倍。ＭＤＡ—ＭＢ－２３１细胞ＮＬＲＣ４的表达约是 ＭＤＡ．ＭＢ－４３５的２ ０００倍（图２）。 ６０～９５℃进行溶解曲线分析。根据ＣＴ值，结果采 用２－ＡＡＣＴ法进行数据的相对定量分析。 ２．３ ＭＣＦ．７细胞ＴＬＲ５受体胞浆和胞膜的表达水 李伟等不同乳腺癌细胞系中ＴＬＲ５和ＮＬＲＣ４受体的表达和定位第ｌ２期 平 流式细胞术分析结果显示，ＭＣＦ－７细胞膜 ＴＬＲ５一ＦＩＴＣ平均荧光强度为４２８，与同型对照相比 显著升高（Ｐ＜０．０１）。当加破膜固定剂之后进行胞 内ＴＬＲ５．ＦＩＴＣ染色，与胞膜ＴＬＲ５染色相比，ＭＦＩ显 著升高（Ｐ＜０．０１）（图３），说明ＴＬＲ５在ＭＣＦ－７细胞 膜和细胞浆均有表达。 ２．４ ＭＤＡ．ＭＢ．２３１细胞ＴＬＲ５受体胞浆和胞膜 的表达水平ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞膜用ＴＬＲ５一ＦＩＴＣ 染色后，平均荧光强度为１８９，与同型对照相 （ＭＦＩ为１８０）比没有显著变化（Ｐ＞０。０５）。当加 透膜剂之后，ＭＦＩ明显升高（为４２０）（图４），说明 ＭＤＡ．ＭＢ－２３１细胞ＴＬＲ５受体主要表达在其 胞内。 ２．５重组鞭毛素蛋白刺激ＭＣＦ－７细胞ＩＬ－８的分泌 用１ ｇ／ｍｌ鞭毛素蛋白刺激ＭＣＦ－７细胞，１２ ｈ后 收集上清检测ＩＬ．８浓度。结果显示，不激活ＴＬＲ５ 的ＦｌｉＣ△９０－９７和ＦｌｉＣ△９０＿９７：Ｌ３Ａ均不能刺激ＭＣＦ一 ７细胞产生ＩＬ一８，而激活ＴＬＲ５通路的重组鞭毛素蛋 白ＦｌｉＣ和ＦｌｉＣ．ＩＪ３Ａ刺激ＭＣＦ－７细胞后ＩＬ一８分泌量 图１不同乳腺癌细胞系中ＴＬＲ５的表达 Ｆｉｇ．１ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ５ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｎｏｔｅ： ．Ｐ＜Ｏ．００１． ‘图２不同乳腺癌细胞系中ＮＬＲＣ４的表达 Ｆｉｇ．２ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＬＲＣＡ ｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ Ｈｎｅ Ｎｏｔｅ： ．Ｐ＜Ｏ．００１． 显著高于ＦｌｉＣＡ９０－９７和ＦｌｉＣＡ９０—９７：Ｌ３Ａ（Ｐ＜ ０．００１）。见图５。 ｓｌ０ 一＝０一日盈‘盘Ｈ ．１ １００ １０ １０ １ １０４ ＦｌＴＣ 图３ ＭＣＦ－７细胞ＴＬｌｉ５受体胞浆和胞膜的表达水平 Ｆｉｇ．３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＬＩ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｃｙｔｏｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ＭＣＦ＿７ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＦＩＴＣ 图４ ＭＤＡ—ＭＢ－２３１细胞ＴＬＲ５受体胞浆和胞膜的表达 水平 Ｆｉｇ．４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ５ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｃｙｔｏｍｅｍｂｅｒ ０ｆ ＭＤＡ．ＭＢ．２３１ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ 图５重组鞭毛素蛋白刺激ＭＣＦ－７细胞后ＩＬ－８的分泌 Ｆｉｇ．５ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－８ ｉｎ ＭＣＦ－７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｆｔｅｒ ｓｔｉｍｕｌａ－ ｔｅｄ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ Ｎｏｔｅ：｛．Ｐ＜０．００１． ３讨论 免疫细胞通过不同的模式识别受体识别不同的 病原相关分子模式，这些模式识别受体包括ＴＬＲｓ、 ＲＬＲｓ和ＮＬＲｓ等。在抗肿瘤方面，免疫细胞模式识 别受体的激活有利于增强抗肿瘤免疫，清除癌细胞。 另一方面，分泌的细胞因子又对肿瘤免疫微环境起 到了不同的作用，包括炎性细胞的浸润以及诱 发多种肿瘤的发生。另外，肿瘤细胞也表达不同的 模式识别受体，与肿瘤的发生发展密切相关，可以介 导不同的配体激活相关信号通路，调节着肿瘤的增 殖、侵袭和转移。 鞭毛素蛋白有可能通过除ＴＬＲ５通路外的另外 一条通路ＮＬＲＣ４来参与介导鞭毛素蛋白的抗肿瘤 效应。当ＮＬＲＣ４炎症复合体激活后，能够加工炎症 细胞因子ＩＬ－１ ｐ、ＩＬ．１８、ＩＬ一３３的前体，使它们成 熟 。虽然，目前关于ＮＬＲＣ４通路与肿瘤关系的 研究还较少，尚无明确的结论。但研究发现，在一些 肿瘤类型中ＩＬ－ｌｐ和炎症小体上调，ＩＬ一１ｐ和炎症小 体在抗肿瘤免疫和诱导致瘤方面可能存在相反的效 果。ＩＬ．１Ｂ通过刺激抗肿瘤免疫消除恶性细胞并增 强化疗效果。Ｃｈｅｎ等 发现，肿瘤炎症小体来源 的ＩＬ一１Ｂ可募集粒细胞，提高ＥＢ病毒引起的鼻咽癌 无局部复发存活率。因此，ＮＬＲＣ４通路的激活可能 与肿瘤的进展、预后有关。 本研究发现，不同乳腺癌细胞系都表达ＴＬＲ５ 和ＮＬＲＣ４受体，但是表达部位和表达水平存在差 异。ＭＣＦ－７细胞ＴＬＲＳｍＲＮＡ表达最多，表达水平约 是ＭＤＡ—ＭＢ－４３５细胞的１ ７００倍，ＭＤＡ．ＭＢ－２３１细 胞ＴＬＲ５表达是ＭＤＡ．ＭＢ－４３５的约２００倍。ＴＬＲ５ 受体在ＭＣＦ－７细胞浆和胞膜上均有表达，而ＭＤＡ． ＭＢ－２３１细胞只在胞浆中表达 。提示鞭毛素蛋白 不直接抑制ＭＤＡ．ＭＢ．２３１细胞，可能需要加入转染 试剂使其进胞膜后才能够激活ＴＬＲ５通路而发挥作 用。ＭＣＦ－７细胞浆和胞膜除了表达ＴＬＲ５受体，也 表达高水平的ＮＬＲＣ４，说明鞭毛素蛋白有可能通过 激活ＮＬＲＣ４而发挥抑制效果。有文献报道，ＴＬＲ５ 在介导鞭毛素抑制ＭＣＦ－７细胞增殖的作用，并没有 考虑ＮＬＲＣ４通路。因此，本研究提示，需要综合考 虑两条通路所介导的鞭毛素蛋白抗肿瘤效果。本研 究利用分别激活ＴＬＲ５和ＮＬＲＣ４的重组鞭毛素蛋 白刺激ＭＣＦ，７细胞，发现只有激活ＴＬＲ５通路的 ＭＣＦ－７细胞能够分泌ＩＬ一８，这说明ＩＬ一８的分泌依赖 于ＴＬＲ５通路的激活。表达在乳腺癌细胞系表面的 ＴＬＲ５受体可以被鞭毛素蛋白激活，也进一步证明了 中国免疫学杂志２０１６年第３２卷 ＴＬＲ５受体位于ＭＣＦ－７细胞膜上，为我们深入探讨 ＴＬＲ５通路的激活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供 实验基础。文献报道，ＩＬ．８能够抑制ＭＣＦ－７细胞的 凋亡 。而且乳腺癌患者ＩＬ一８的上调与较差预后 相关 ７Ｉ墙Ｊ。提示在探讨鞭毛素的抗肿瘤效果时，必 须考虑其对乳腺癌细胞直接刺激后细胞因子分泌可 能影响其抗肿瘤的效果。另一方面，鞭毛素蛋白通 过ＴＬＲ５通路刺激免疫细胞的激活，可能促进机体 的抗肿瘤效应。 本研究提示，大部分乳腺癌细胞系表达ＴＬＲ５ 和ＮＬＲＣ４受体，ＴＬＲ５受体分布于乳腺癌细胞系的 胞膜或者胞浆，位于胞膜的ＴＬＲ５受体可以被鞭毛 素蛋白激活而分泌炎症因子ＩＬ一８。这两种受体的激 活在介导鞭毛素蛋白的抗肿瘤方面具有哪些作用， 是促进乳腺癌增殖，还是抑制乳腺癌细胞增殖，促进 其凋亡，需要进一步实验探讨。本研究为进一步探 讨乳腺癌细胞中ＴＬＲ５和ＮＬＲＣ４通路的激活在肿 瘤增殖中的作用提供实验依据。 参考文献： ［１］ Ｒａｋｏｆｆ－Ｎａｈｏｕｍ Ｓ，Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００９，９（１）：５７－６３． ［２］ Ｓｈｃｈｅｂｌｙａｋｏｖ ＤＶ，Ｌｏｇｕｎｏｖ ＤＹ，Ｔｕｋｈｖａｔｕｌｉｎ ＡＩ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＴＬＲｓ）：ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｎａｔｕｒａｅ，２０１０，２（３）：２１－２９． ［３］Ｌｏｎｓｄｏｒｆ ＡＳ，Ｋｕｅｋｒｅｋ Ｈ，Ｓｔｅｒｎ ＢＶ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒ ＣｐＧ—ｏｌｉｇｏｄｅ— ｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３，１７１（８）：３９４１－３９４６． ［４］ Ｃｈｉｃｏｉｎｅ ＭＲ，Ｚａｈｎｅｒ Ｍ，Ｗｏｎ ＥＫ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅ ａｇａｉｎｓｔ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｍｕｈｉｆｏｒｍｅ ａｒｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎ ｐａｒｔ ｂｙ Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，２００７， ６０（２）：３７２－３８０． ［５］ Ｓｃｈｅｅｌ Ｂ，Ａｕｌｗｕｒｍ Ｓ，Ｐｒｏｂｓｔ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ— ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６，３６（１０）：２８０７－２８１６． ［６］Ｃｒａｆｔ Ｎ，Ｂｒｕｈｎ ＫＷ，Ｎｇｕｙｅｎ ＢＤ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ＴＬＲ７ ａｇｏｎｉｓｔ ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｍｅｌａｎｏｍａ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５，１７５（３）： １９８３—１９９０． ［７］Ｃａｉ Ｚ，Ｓａｎｃｈｅｚ Ａ，Ｓｈｉ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＴｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５ ｏｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１１，７１（７）：２４６６－２４７５． ［８］Ｌｅｉｇｈ ＮＤ，Ｂｉａｎ Ｇ，Ｄｉｎｇ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ａ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５ ａｇｏｎｉｓｔ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１４，９（１）：ｅ８５５８７． ［９］ Ｒｈｅｅ ＳＨ，Ｉｍ Ｅ，Ｐｏｔｈｏｕｌａｋｉｓ Ｃ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００８，１３５ （２）：５１８－５２８． （下转第１７６８页） １７６８・ １Ｊ １● １Ｊ中国免疫学杂志２０１６年第３２卷 ］ｊ ］ 症状改善，说明ＧＳＩ能够抑制Ｔｈｌ７细胞分化，减少 ＩＬ．１７的产生，缓解哮喘大鼠的气道炎症，是治疗哮 喘的有效措施 Ｊ。本实验中，阻断毛支模型大鼠 ３４５－３５０． ［７］Ｌａｎ Ｆ，Ｌｉｕ Ｋ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｌ７ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｓ ａｕｇｍｅｎｔｅｄ ｉｎ ＯＶＡ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ＨＤＭ［Ｊ］．Ｍｅｄ Ｓｃｉ Ｍｏｎｉｔ， ２０１１，１７（５）：１３２－１３８． Ｎｏｔｃｈ信号通路后，肺组织ＮＩＣＤ、ＲＯＲ￣／ｔ表达降低， ［８］Ｗｅｉ Ｙ，Ｌｉｕ Ｂ，Ｓｕｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｌ７／Ｔｒｅｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ 另外肺组织及ＰＢＭＣ中ＲＯＲ￣／ｔ ｍＲＮＡ表达亦降低， ＩＬ．１７分泌减少，同时ＨＥ染色也可观察到气道炎症 的缓解，以上结果均说明阻断Ｎｏｔｃｈ信号通路能够 缓解毛支大鼠症状。 综上所述，Ｎｏｔｃｈ信号通路能够通过调节Ｔｈ１７ 细胞的功能和状态影响毛支病情及预后。本实验通 过注射ＧＳＩ阻断毛支大鼠Ｎｏｔｃｈ信号通路，抑制了 Ｔｈｌ７细胞应答，减弱了其促炎作用，缓解了毛支炎 症，为毛支的治疗提供了新的思路。 参考文献： ［１］，．ｐｙｍａｒ Ｋ，Ｓｋｊｅｒｖｅｎ ＨＯ，Ｍｉｋａｌｓｅｎ ＩＢ．Ａｃｕｔｅ ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ，ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｔｒａｕｍａ Ｒｅｓｕｓｃ Ｅｍｅｒｇ Ｍｅｄ，２０１４， ２２：２３． 李宾，吴福玲，冯学斌，等．呼吸道合胞病毒毛细支气管炎 患儿外周血ＣＤ４ ＣＤ２５ 调节性Ｔ细胞与Ｔｈｌ７细胞功能变化 及意义［Ｊ］．细胞与分子免疫学杂志，２０１２，２８（４）：４２６－４２８． Ａｍｓｅｎ Ｄ．Ｈｅｌｂｉｇ Ｃ，Ｂａｃｋｅｒ ＲＡ．Ｎｏｔｃｈｉｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ａｌｌ ｔｈｉｎｇｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，３６（１２）：８０２ ８１４． Ｚｈａｎｇ Ｗ，Ｚｈａｎｇ Ｘ，Ｓｈｅｎｇ Ａ，ｅｔ ａ１．＾ｙ－ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ ａｃｕｔｅ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ａｓｔｈｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｔｈｌ７ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ Ｉｌｆｎａｍｍ， ２０１５，２０１５：２５８１６８． Ｐｉｃｋｌｅｓ ＲＪ，ＤｅＶｉｎｃｅｎｚｏ ＪＰ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉｌａ ｖｉｒｕｓ（ＲＳＶ）ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｏｐｅｎｓｉｔｙ ｆｏｒ ｃａｕｓｉｎｇ ｂｒｅｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２０１５，２３５ （２）：２６６也７６． Ｂｅｔｔｅｌｉ Ｅ，Ｏｕｋｋａ Ｍ，Ｋｕｃｈｒｏｏ ＶＫ．Ｔｈ一１７ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｉｃｒｌｅ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，８（４）： （上接第１７６４页） ［１０］ Ｓｆｏｎｄｒｉｎｉ Ｌ，Ｒｏｓｓｉｎｉ Ａ，Ｂｅｓｕｓｓｏ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＴＬＲ．５ ｌｉｇａｎｄ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００６，１７６（１１）：６６２４＿６６３Ｏ． ［１１］Ｙａｍ Ｃ，Ｚｈａｏ Ｍ，Ｈａｙａｓｈｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ａ ｔｕｍｏｒ－ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｕｔａｎｔ ｏｆ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔｓａｉｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ，２０１０，１６４ （２）：２４８－２５５． ［１２］Ｚｈａｏ Ｍ，Ｇｅｌｌｅｒ Ｊ，ＭａＨ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈ ａｔｕｍｏｒ—ｔｒａｇｅｔｉｎｇ ｍｕｔａｎｔ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｃｕｒｅｓ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００７，１０４（２４）：１０１７０－１０１７４． ［１３］Ｌｊ Ｗ，Ｙａｎｇ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＬＲＣＡ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＴＬＲ５一ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ［Ｊ］． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｍｉ．２０１５．０３３． ［１４］ Ｍａｒｔｉｎｏｎ Ｆ，Ｍａｙｏｒ Ａ，Ｔｓｃｈｏｐｐ Ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｓ：ｇｕａｒｄｉａｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｄｙ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００９，２７：２２９－２６５． ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ａｉｗｒａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｃａｒｉｉｎ ｉｎ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｕｒｉｎｅａｓｔｈｍａ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］． Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１５，２２０（６）：７８９￣９７． ［９］ １ｗａｋｕｒａ Ｙ，Ｉｓｈｉｇａｍｅ Ｈ，Ｓａｉｊｏ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｐｅｃｉｌａｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｄｅｕｋｉｎ一１７ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１１，３４（２）： １４９．１６２． ［１０］ Ｂｙｓｔｒｏｍ Ｊ，ＡＩ—Ａｄｈｏｕｂｉ Ｎ，Ａ１一Ｂｏｇａｍｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｌ７ ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ ｉｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖｉｕｒｓｅｓ，２０１３，５（３）： ７７７－７９１． ［１１］ Ｏｈｋｕｒａ Ｎ，Ｋｉｔａｇａｗａ Ｙ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１３，３８（３）： ４１４－４２３． ［１２］ 高萌，吴福玲，李营营，等．呼吸道合胞病毒毛细支气管炎 大鼠肺组织视黄酸受体相关孤核受体．ｙｔ水平增加［Ｊ］．细胞 与分子免疫学杂志，２０１５，３１（１ １）：１４９２－１４９６． ［１３］Ｗａｎｇ Ｙ，Ｘｉｎｇ Ｆ，Ｙｅ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｊａｇｇｅｄ一１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｈｅ ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＧＦ—Ｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ—ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔｈｌ７ ｃｅｌｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＲＯＲｃｔ／ＩＬ一１７Ａ／ＩＬ一１７Ｆ／ＩＬ－２３ａ／ＩＬ．１２ｒｂｌ ｆ Ｊ］． Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１５，５：８２３４． ［１４］Ａｍｓｅｎ Ｄ，Ａｎｔｏｖ Ａ，Ｆｌａｖｅｌｌ ＲＡ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆａｃｅｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｉｎ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００９，９（２）： １ １６．１２４． ［１５］Ｙｕ Ｓ，Ｌｉｕ Ｃ，Ｌｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｔｈｅ Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ ｉｍｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｅｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ，２０１５，９５（２）：１５７－１６７． ［１６］ Ｋｅｅｒｔｈｉｖａｓａｎ Ｓ，Ｓｕｌｅｉｍａｎ Ｒ，Ｌａｗｌｏｒ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｔｈｌ７ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１１，１８７（２）：６９２－７０１． ［收稿２０１６－０５—１６修回２０１６－０６・１２］ （编辑倪鹏） ［１５］ Ｃｈｅｎ ＬＣ，Ｗａｎｇ ＬＪ，Ｔｓａｎｇ ＮＭ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｕｒ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ・ ｄｅｒｉｖｅｄ ＩＬ－１ ｂｅｔａ ｒｅｃｒｕｉｔｓ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｌｏｃａｌ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ－－ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ＥＢＶ．－ｉｎｄｕｃｅｄ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２０１２，４（１２）：１２７６—１２９３． ［１６］ Ｐａｎｇ Ｘ，Ｌｉ Ｋ，Ｗｅｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＩＬ－８ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＭＣＦ－７ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｂｃｌ－２ ａｎｄ ｄｏｗｎ— ｅｒｇｕｌａｔｉｎｇ ｃａｓｐａｓｅ－３［Ｊ］．Ｘｉ Ｂａｏ Ｙｕ Ｆｅｎ Ｚｉ Ｍｉａｎ Ｙｉ Ｘｕｅ Ｚａ Ｚｈｉ， ２０１５，３１（３）：３０７－３１１． ［１７］ ＳｉｒＩｇｈ ＪＫ，Ｓｉｍｏｅｓ ＢＭ，Ｃｌａｒｋｅ ＲＢ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＩＬ一８ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ，２０１３，１７（１１）：１２３５－１２４１． ［１８］ Ｆｒｅｕｎｄ Ａ，Ｃｈａｕｖｅａｕ Ｃ，Ｂｒｅｕｉｌｌｅｔ ＪＰ，ｅｔ ａ１．ＩＬ－８ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒｏｇｅｎ－・ｒｅｃｅｐｔｏｒ・－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００３，２２（２）：２５６－２６５． ［收稿２０１６－０４－１２修回２０１６－０６－０１］ （编辑张晓舟）
