Bmi_1和hTERT在胃癌组织中表达及其相关性

Bmi21和hTERT在胃癌组织中表达及其相关性

房信博,项锋钢,谷海燕

(青岛大学医学院附属医院病理科,山东青岛　266003)

[摘要]　目的　探讨细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点21(Bmi21)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白

在胃癌组织表达及其与临床病理特征的关系,探讨二者在胃癌发生发展中的作用及其相关性。方法　采用免疫组化PV29000法分别检测70例胃癌、20例慢性萎缩性胃炎及10例癌旁正常胃黏膜组织标本中Bmi21和hTERT蛋白的表达。结果　胃癌组织Bmi21和hTERT蛋白的阳性表达率分别为71.4%、78.6%,明显高于正常组织(0、0)

2

及慢性萎缩性胃炎组织(20.0%、15.0%),差异均有显著性(χ=17.14～27.44,P<0.01)。胃癌组织中Bmi21和2hTERT蛋白阳性表达均与癌组织的浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移有关(χ=6.375～26.480,P<0.05),2而与病人的性别、Borrmann分型及分化程度等无关(χ=0.047～1.052,P>0.05)。胃癌组织中Bmi21和hTERT

蛋白的表达呈显著正相关(r=0.826,P<0.01)。结论　Bmi21、hTERT蛋白表达与胃癌的发生发展、浸润转移密切相关,可作为早期诊断胃癌及判断转移、预后的重要参考指标。

[关键词]　胃肿瘤;Bmi21;hTERT;免疫组织化学

[中图分类号]　R735.2　　[文献标志码]　A　　[文章编号]　100820341(2011)0520387204

EXPRESSIONSOFBmi21ANDhTERTPROTEININGASTRICCARCINOMA　FANGXIN2BO,XIANGFENG2GANG,GU

HAI2YAN　(DepartmentofPathology,TheAffiliatedHospitalofQingdaoUniversityMedicalCollege,Qingdao266003,China)

[ABSTRACT]　Objective　ToinvestigatetheexpressionsofBmi21andhTERTproteiningastriccarcinoma,andexploretheirrelationwithclinicalpathology.　Methods　TheexpressionsofBmi21andhTERTproteinweredetected,byPV29000immunohis2tochemicalmethod,inspecimensof70gastriccarcinoma,20chronicatrophicgastritisand10paraneoplasticnormalgastricmucousmembrane.　Results　ThepositiveexpressiveratesofBmi21andhTERTincancerwere71.4%and78.6%,respectively,whichwerehigherthanthatinnormaltissue(0and0,respectively),andthatinchronicatrophicgastritis(20.0%and15.0%,respec2

2tively),allthedifferencesweresignificant(χ=17.14-27.44,P<0.01).ThepositiveexpressionsofBmi21andhTERTwere2closelycorrelatedwiththedepthofcancertissueinfiltration,clinicalstageandlymphnodemetastasis(χ=6.375-26.480,P<20.05),andnotwithgender,Borrmannclassificationanddifferentiation(χ=0.047-1.052,P>0.05).TheexpressionofBmi21

ingastriccancerwaspositivelycorrelatedwithhTERT(r=0.826,P<0.01).　Conclusion　TheexpressionsofBmi21andhTERTproteinarecloselyrelatedwiththeoccurrence,development,invasionandmetastasisofgastriccancer,whichcanbeusedasanimportantreferenceforearlydiagnosis,metastasisjudgmentandprognosticpredictionofthismalignancy.

[KEYWORDS]　stomachneoplasms;Bmi21;hTERT;immunohistochemistry

　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人们的健康。近几年,人们日益重视胃癌及其癌前病变的研究,并取得显著进展。但由于胃癌的发生是一个多基因、多因素、多阶段长期作用的复杂过程,其发生机制还未完全明了。大量研究表明,癌基因的异常激活和过度表达在恶性肿瘤发生发展中发挥重要作用。细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点21(Bmi21)基因是转录抑制因子多巯基基因家族的核心成员之一,其表达水平与肿瘤的发生、发展、侵袭、预后等病理指标密切相关。许多肿瘤中存在Bmi21基因的高表达[124]。干扰Bmi21基因的表达可

胞老化,而人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的

主要成分之一,其表达与端粒酶的激活密切相关,是端粒酶激活的限速酶,在细胞永生化中发挥重要作用。Bmi21和hTERT在胃癌中的作用及相关性尚未见报道。本研究通过检测Bmi21和hTERT蛋白在胃癌组织、慢性萎缩性胃炎组织及癌旁正常胃组织中的表达,探讨Bmi21和hTERT与胃癌临床病理特征的关系以及二者之间的相关性。1　材料与方法1.1　标本及其来源

以促进肿瘤细胞衰老,而细胞衰老目前被认为是体

内抵抗肿瘤的重要机制之一[526]。端粒酶可抵抗细

[收稿日期]2011202226;　[修订日期]2011205204

[作者简介]房信博(19772),男,在读硕士研究生。现在淄博市

中心医院工作。

[通讯作者]项锋钢(192),男,教授,硕士生导师。

随机收集青岛大学医学院附属医院2007年间手术切除并经病理证实的胃癌标本70例(术前未行放、化疗),均经病理切片证实为胃癌并按WHO标准分型、分级。其中男49例,女21例;年龄34～83岁,平均为62.3岁;中高分化25例,低分化45例;

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BorrmannⅠ型3例,BorrmannⅡ型47例,Bor2rmannⅢ型11例,BorrmannⅣ型9例;有淋巴结转

为71.4%、20.0%、0,hTERT蛋白阳性表达率分别

为78.6%、15.0%、0,胃癌组织中Bmi21和hTERT蛋白阳性表达率均明显高于其他两种组织,差异有

2

显著性(χ=17.14～27.44,P<0.01)。2.2　Bmi21、hTERT蛋白在胃癌组织表达及其与

移47例,无淋巴结转移23例;癌组织浸润至黏膜下层及以上9例,浸润至肌层18例,浸润至浆膜层及

以下43例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期36例,Ⅲ～Ⅳ期34例。同时,收集经手术切除的癌周正常胃黏膜(离癌组织5cm以上)标本10例、慢性萎缩性胃炎标本20例作为对照。所有组织标本4μm厚连续切片,二甲苯脱蜡。1.2　Bmi21和hTERT蛋白表达检测方法

采用免疫组化PV29000二步法检测Bmi21和hTERT蛋白的表达,鼠抗Bmi21和兔抗hTERT的工作浓度均为1∶100,具体操作步骤按PV29000试剂盒说明书进行。实验分别用已知阳性组织切片作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。1.3　结果判定结果判定采用盲法,由两位不清楚病例分组情况的病理医师对免疫组化结果进行观察及评估。Bmi21蛋白表达结果判定参照冯艳等[7]计分方法:

临床病理特征的关系

胃癌组织中Bmi21和hTERT蛋白的表达与性别、Borrmann分型、组织分化程度无关(P>0.05),

2

而与浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(χ=6.375～26.480,P<0.01)。见表1。

表1　Bmi21和hTERT蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系(例)

临床病理特征性别　男　女

Borrmann分型

Bmi21表达n-+

2χPhTERT表达n-+2χ

P

49133621311925

714143

2760.659

>0.05

0.330

491039>0.0521

34711925

1.052

5132162870.5

>0.05

0.101

>0.05

光学显微镜下观察组织标本的着色程度,高倍镜下

(400倍)随机取4个不同的视野,计数细胞总数及核阳性细胞数,阳性细胞所占的百分比≤10%为1分,11%～50%为2分,51%～75%为3分,>75%为4分;再根据染色的强弱程度计分,阴性染色1分,弱染色2分,中等强度染色3分,强染色4分。根据上述二者的乘积判断结果:以≤4分为-;>4分为+。hTERT蛋白表达结果采用双评分半定量法进行评分[8]:在400倍高倍光学显微镜下观察,每视野细胞hTERT蛋白表达阳性率<25%为0分,25%～50%为1分,51%～75%为2分,>75%为3分;染色反应不着色为0分,浅棕黄色为1分,棕黄色为2分,深棕黄色为3分。根据两项计分之和判定结果:0分为阴性-,1～6分为阳性+。1.4　统计学分析

　Ⅰ

　Ⅱ　Ⅲ　Ⅳ分化程度　中高分化　低分化浸润深度

　黏膜下层及以上　肌层

　浆膜层及以下淋巴结转移　有　无临床分期　Ⅰ～Ⅱ　Ⅲ～Ⅳ

471235938

916520

0.047

>0.05

45113494347

6

37

>0.05451035

918<0.0143

47<0.0123

59

49

1811

34026.480740

14225.9241914

6.375

<0.01

23131013.11336162034

430

9.150

<0.05

361422<0.0134

13311.370

<0.01

2.3　胃癌组织Bmi21蛋白与hTERT蛋白表达的

相关性

70例胃癌组织中Bmi21、hTERT蛋白表达均为阳性者48例,均为阴性者13例,Bmi21阴性而hTERT阳性者7例。胃癌组织中Bmi21、hTERT蛋白的表达呈显著正相关(r=0.826,P<0.01)。3　讨　　论

3.1　Bmi21与胃癌临床病理因素的关系

Bmi21是一种广泛表达的核蛋白,参与细胞的

应用SPSS16.0统计软件包进行统计分析,数

据间比较采用卡方检验,相关性采用Spearman等级相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。2　结　　果

2.1　不同胃组织Bmi21、hTERT蛋白表达的比较

胃癌组织Bmi21蛋白的阳性表达部位主要为细胞核;hTERT蛋白阳性表达部位主要为细胞浆,亦可表达于细胞核。胃癌组织、慢性萎缩性胃炎及癌周正常胃黏膜组织中Bmi21蛋白的阳性表达率分别

增殖[9]。在肿瘤的发生发展中,高表达癌基因Bmi21的肿瘤细胞被认为是肿瘤中存在的“癌症干

细胞”,有研究认为Bmi21的高表达是预后差的一个

齐鲁医学杂志2011年10月第26卷第5期　MedJQilu,October2011,Vol.26,No.5・3・

危险因素[10]。

本研究结果表明,Bmi21蛋白在正常胃黏膜组织、慢性萎缩性胃炎及胃癌组织中的表达率逐级提高,且差异有显著性,提示Bmi21在胃癌的发生中起重要作用。本文同时分析了Bmi21蛋白在胃癌组织中的表达与临床病理因素的关系,结果显示Bmi21蛋白的阳性表达与病人的性别、Borrmann分型、癌组织的分化程度均无关,而与浸润深度、淋巴结转移及临床分期密切相关,即Bmi21蛋白的阳性表达随着肿瘤浸润深度的增加而增高,有淋巴结转移的胃癌组织中Bmi21蛋白的阳性表达明显高于无转移胃癌组织,Ⅲ～Ⅳ期胃癌组织中Bmi21蛋白的阳性表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织,提示Bmi21在胃癌侵袭及转移的过程中发挥重要作用。黄开红等[11]检测146例胃癌组织中Bmi21蛋白的表达,结果显示Bmi21基因在胃癌组织的表达状态与胃癌的生长和浸润转移关系密切,Bmi21基因阳性表达者生存率明显低于阴性者,故认为检测Bmi21基因表达有助于判断肿瘤的预后。本文研究结果与其一致。3.2　hTERT与胃癌临床病理因素的关系

人端粒酶主要由3部分组成,即端粒酶RNA组分(hTR)、端粒酶相关蛋白和hTERT,其基因均已克隆。WEINRICH等[12]研究显示,hTERT与细胞端粒酶的活性密切相关。hTERT是构成端粒酶复合物的活性成分催化亚单位,为端粒酶活化过程中的酶,在端粒酶的激活和肿瘤的发生中起关键作用。

本研究检测了hTERT蛋白在胃癌、慢性萎缩性胃炎及癌周正常胃黏膜组织中的表达,结果显示hTERT蛋白在正常胃黏膜组织中几乎不表达,在慢性萎缩性胃炎组织中少量表达(15.0%),而在胃癌组织中阳性表达率高达78.6%,且hTERT蛋白的阳性表达与病人的性别、Borrmann分型、癌组织的分化程度均无关,而与浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关,说明hTERT与胃癌的发生发展、浸润转移及预后等关系密切。这与杨仕明等[13]的研究结果一致。有研究结果显示,在端粒酶阴性的人正常细胞中导入hTERT基因并使之表达,可重现端粒酶的活性,并延长细胞的生存期;在体外人肺癌细胞株中导入反义hTERT基因可诱导肺癌细胞凋亡[14215]。表明hTERT与恶性肿瘤发生、发展有密切关系。对hTERT与胃癌各种病理类型之间关系进行研究,可以为针对hTERT的端粒酶反义基因治疗肿瘤提供理论依据。

3.3　胃癌中Bmi21与hTERT表达的关系

本文结果表明,胃癌组织中Bmi21和hTERT的表达有显著相关性,说明在胃癌的发生、发展、演变过程中,二者可能存在着协同作用,共同促进胃癌的发生及演进。其具体作用机制有待进一步研究。

综上所述,Bmi21和hTERT与胃癌的发生发展、浸润转移有着非常密切的关系,且二者在胃癌发生中具有协同作用,故二者联合检测可为临床上胃癌早期诊断、预测转移、判断病情进展及预后提供一定参考,对二者在胃癌中作用机制的进一步研究可望为胃癌的分子治疗提供新的靶点。

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(下转第392页)

・392・齐鲁医学杂志2011年10月第26卷第5期　MedJQilu,October2011,Vol.26,No.5

果及疾病进展时间相关。另外,MONZO等[4]研究奥沙利铂并氟尿嘧啶治疗的进展期结直肠癌病人,结果显示XPGC/C联合XPA5′UTR区T/C或C/C基因型的病人生存期和中位进展时间都长于

预测指标进行联合检测,以综合评价某种药物的敏

感程度,做到真正的个体化化疗。同时,需要对基因多态性导致耐药具体机制进一步进行研究。

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MolCancer

其他基因型的病人。国内有文献报道,XPGC/C基因多态性与晚期胃癌病人接受含奥沙利铂化疗的疗效呈正相关[5]。本研究结果显示,XPGC46TC/C基因型病人化疗疗效好于XPGC46TC/T+T/T基因型病人,与以上报道结果相符。

GSTP1是一种多功能的药物代谢酶,能催化细胞毒类药物与还原型谷胱甘肽(GSH)结合增强其水溶性,促进药物排泄而降低其抗肿瘤作用,铂类药物就是经过该途径解毒、排泄的。GSTP1还能把抗肿瘤药物产生的过氧化物还原为无毒物质;能抑制烷化剂类化疗药物引起的癌细胞DNA交联;能使亚硝基脲类药物脱亚硝基,从而降低药物对癌细胞杀伤作用,是其耐药机制之一。STOEHLMACH2ER等[6]报道,GSTP1A105G的突变导致GS2TP1蛋白中的Ile被Val替换,使酶活性下降,病人对铂类药物更敏感,从而具有较好的预后。RUZZ0等[7]研究晚期胃癌病人GSTP1和GSTM1等多个基因多态性与氟尿嘧啶并顺铂化疗预后的相关性,结果显示携带GSTP1Ile/Ile基因型病人具有更低的应答率、更短的无进展生存期和总生存期。本研究中,携带G基因病人对奥沙利铂化疗敏感性优于其他基因型。但是,也有学者研究显示,GSTP1与晚期胃癌对氟尿嘧啶并奥沙利铂的疗效无关[8]。

本文对XPG及GSTP1基因多态性进行联合检测,结果显示同时携带XPGC46TC/C基因型和GSTP1A105GA/G+G/G基因型病人化疗效果最好。该结果提示,XPGC46T及GSTP1A1052G在影响胃癌病人对奥沙利铂敏感性方面具有协同作用。肿瘤敏感性和耐药性是由非常复杂的基因网络操控,仅仅分析单个基因或标志物来预测肿瘤病人对化疗的反应性,其结果不确定。这就需要对各项

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(本文编辑　黄建乡)