桑皮止咳颗粒制备工艺及止咳平喘实验研究-张铭

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

辽宁中医药大学学报

Vol. 18 No. 8 Aug .，2016

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.08.010

桑皮止咳颗粒制备工艺及止咳平喘实验研究张铭1，袁杰1，孟舒2

（1.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032；2.辽宁省计划生育科学研究院，辽宁 沈阳 110031）目的：对桑皮止咳颗粒制备工艺进行最佳优化，观察研究不同浓度的桑皮止咳颗粒止咳平喘的药理摘 要：

作用。方法：采用正交试验法，分别以挥发油提取量、桔梗皂苷D为考察指标，优选桑皮止咳颗粒的最佳提取工艺；采用小鼠“浓氨水法”、豚鼠“喷雾法”分别选用磷酸可待因和氨茶碱作为阳性药物对照，比较观察其在止咳、平喘等方面的作用。结果：挥发油最佳提取工艺为加水14倍量，提取2次，每次2 h；醇提最佳工艺为10倍量70%乙醇提取60 min。对豚鼠咳嗽潜伏期显著延长、小鼠咳嗽次数显著减少。结论：桑皮止咳颗粒的提取和制备工艺简便、可靠，重复性良好。药效学实验表明，该药对小鼠“浓氨水法”诱发的咳嗽具有明显的抑制作用，对乙酰胆碱、组织胺混合液喷雾造成的豚鼠哮喘具有明显的对抗作用（P<0.05）。

关键词：桑皮止咳颗粒；制备工艺；挥发油；止咳平喘

(2016) 08- 中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X 0033- 03Experimental Study on the Preparation of Sangpi Zhike Granule for Relieving Cough and AsthmaZHANG Ming1，YUAN Jie1，MENG Shu2（1.Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China；2. Liaoning Science Research Institute of Family Planning，Shenyang 110031，Lliaoning，China）Abstract：Objective：To optimize the preparation technology of the Sangpi Zhike Granules and observe the pharmacological effect of the different concentration of drug on relieving cough and asthma. Method：By orthogonal test method，the preparation technology of Sangpi Zhike Granules was optimized with the determination of volatile oil content and platycodin D as the indexes. Codeine phosphate and aminophylline were chosen as positive drug，respectively. The pharmacological effect on relieving cough and asthma was observed by the mice“concentrated ammonia water method”and guinea pig“spray method”. Result：The optimum extraction technology of volatile oil is as follow：adding 14 times amount of water extracting twice，each time for 2 h. The optimum ethanol extraction technology is as follow：adding 10 times amount of 70% ethanol extracting 60 min. the granule could obviously prolong the latent period of cough for the guinea pig. Meanwhile，the times of cough decreased for the mice. Conclusion：The extraction and preparation IL-8、IL-17的含量，抑制RA关节炎症反应，减轻病变关节肿胀程度，延缓或减轻关节损伤，使其恢复气血调和、阴平阳秘的状态，既能明显抑制关节炎症反应，又能“扶正祛邪”。本实验为临床治疗RA提供了实验依据。◆参考文献[ 1 ] 于天一，孔庆喜，陈丽妹，等.类风湿关节炎的病理机制浅析[ J ] .( 黑龙江医药，2014，27 1 )：98-102.[ 2 ] 蔡文虹，孙保东，张宝凤，等.类风湿性关节炎病因学概述[ J ] . 中国当代医药，2012，19 ( 5 )：11-12.[ 3 ] 张春芳，陈会君，徐峰，等.三痹汤对佐剂型关节炎大鼠血清TNF-α及IL-1的影响[ J ] .中医药信息，2009，26 ( 4 )：82-83.[ 4 ] 张春芳，汪洋，王炎焱，等.三痹颗粒对CIA模型大鼠血清CXCR3、CXCR4 mRNA的影响[ J ] .中医药学报，2014，42 ( 4 )：58-60.[ 5 ] 李仪奎.中药药理实验方法学[ M ] .上海：上海科学技术出版社，1991：305-306.[ 6 ] Granet C，Miossec P.Combination of the proinflammatory cytokines IL-1，TNF-alpha and IL-17 leads to enhanced expression and additional recruitment of AP-1 family members，Egr-1 and NF-kappaB in osteoblast-like cells[ J ] .Cytokine，2004，26 ( 4 )：169-117.Bush KA，Farmer KM，Walker JS，et al. Reduction of joint inflammation and bone erosion in rat adjuvant arthritis by treatment with interleukin-17 receptor IgG1 Fc fusion protein[ J ] .Arthritis Rheum，2002，46 ( 3 )：802-805.ZHU XJ，XIAO LB，HUO RF，et al. Cyr61 is involved in neutrophil infiltration in joints by inducing IL-8 production by fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis[ J ] .Arthritis Res Ther，2013，15 ( 6 )：187.陈柏松，徐玉东，钟淑琦，等.大鼠佐剂性关节炎模型的建立与评价[ J ] .哈尔滨医科大学学报，2005，39 ( 6 )：4-491.李松伟.三痹汤治疗类风湿关节炎临床观察[ J ] .中医药学刊，2006，24 ( 9 )：1738-1739.魏巍，刘葵葵.中药联合益赛普治疗老年类风湿关节炎的临床观察[ J ] .中华中医药学刊，2013，31 ( 4 )：939.王兴丽，左帮平，刘旭光.艾灸治疗类风湿关节炎的作用机制研究进展[ J ] .中华中医药学刊，2013，31 ( 9 )：1888.肖敬，尹智功，蒋耀平，等.桂中地区类风湿关节炎患者中医证候与血小板参数及病情活动指标的相关性研究[ J ] .中华中医药学刊，2013，31 ( 6 )：1314.范利锋，陈汉玉，翁庚民.中药膏方联合ACR达标控制方案治疗类风湿关节炎临床观察[ J ] .中华中医药学刊，2013，31 ( 1 )：179.[ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 收稿日期：2016-01-11基金项目：辽宁省科学技术厅社会发展攻关计划项目（2013226012）作者简介：张铭（1972-），男，辽宁沈阳人，副主任药师，学士，研究方向：质量标准研究与新药开发。

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辽宁中医药大学学报 18卷

technology of Sangpi Zhike Granules is safe，reliable，and good repeatability. Pharmacological results showed that Sangpi Zhike Granules has obvious inhibitory effect on mice“concentrated ammonia water”induced cough meanwhile，has obvious antagonism on acetylcholine and histamine mixed liquid spray caused by asthma in guinea pig（P<0.05）．Keywords：Sangpi Zhike Granules；preparation technology；volatile oil；relieving cough and asthma咳嗽是内科病症中最为常见的症状，以寒冷地区发病率高。祖国医学认为，咳嗽是由六淫外邪侵袭肺系或脏腑功能失调内伤及肺，肺气不清，失于宣肃所成。桑皮止咳颗粒是由桑白皮、苦杏仁、桔梗、地骨皮、前胡、牛蒡子等药经现代工艺制成纯中药制剂。具有益气养阴、宣肺化痰止咳之功效，适用于气阴两虚、痰湿阻肺所致的咳嗽、喘促、胸满胀闷、气短乏力等症，其组方合理，疗效确切。为使有效成分完全提取，更好的发挥药效，本实验优化了药物的制备工艺，在保持原有疗效的基础上，使其更加易于服用，安全、方便。现将制备工艺及止咳平喘实验研究报道如下。1 仪器与试药UV2000型紫外-可见分光光度计，JAI003型电子天平，Heidolph digital，RZR-2000磁力搅拌器（德国），W-201B数显恒温水浴锅（上海沪南科学仪器联营厂），EL-204 型高精度电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司），Waters高效液相色谱仪（美国Waters公司）。桑皮止咳颗粒为本院制剂、桔梗皂苷D对照品批号111711-200602），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 挥发油提取正交试验选择提取次数、加水量和提取时间为考察因素，每个因素选择三个水平，按L（3）49正交试验表安排试验，以挥发油的收得量为考察指标，对本品中前胡、苦杏仁药材的挥发油提取最佳工艺进行研究，其正交试验因素水平表见表1。表1 挥发油提取正交试验因素水平表水平ABC提取次数加水量（倍）提取时间（h）111012214233183称取前胡50 g、苦杏仁50 g，混匀，共计9份，分别按正交试验安排表进行试验，提取挥发油，放置30 min。其正交试验安排表及试验结果见表2。表2 挥发油提取正交试验安排表及试验结果试验号ABCD挥发油（mL）111112.51212224.62313334.10421234.522314.42623122.81731324.18832132.73933214.42Ij11.2311.588.0511.35Ⅱj12.1211.7713.9311.61Ⅲj11.3311.3312.7011.7234

从表2的实验结果可知，C因素即提取时间对挥发油收得量影响最大，其次为A因素，B因素影响最小。A2B2C2为最佳提取工艺。表3 挥发油提取正交试验结果方差分析方差来源离均差平方和自由度方差F值显著性SA0.15820.0796.58>0.05SB0.03220.0161.35>0.05SC6.41223.206266.43<0.05SD0.02420.012从表3方差分析结果可以看出，C因素即提取时间对挥发油收得量有显著性意义，而A、B两因素则无显著性，因此可以基本确定本品挥发油提取工艺为A2B2C2。2.2 醇提工艺正交试验2.2.1 色谱条件色谱柱：CLC-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（30∶70），流速1.0 mL/min，柱温35 ℃，检测波长 210 nm。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液注入色谱仪。理论板数按桔梗皂苷D峰计算，应不低于3000，阴性样品溶液不干扰样品的测定。2.2.2 试验因素水平以影响药材提取效果的乙醇用量、乙醇浓度、回流次数为考察因素，以桔梗皂苷D含量评分为指标。用L9（34）正交表进行试验。因素水平见表4。表4 正交试验因素水平表水平ABC乙醇用量（倍）乙醇浓度（%）回流时间（min）14303028506031270902.2.3 试验方法称取桑白皮、地骨皮、桔梗、牛蒡子、甘草各50 g，混匀，共计9份，分别采用正交试验设计，以桔梗皂苷D含量评分为指标。其正交试验结果见表5。表5 正交试验及结果试验号ABCD桔梗皂苷D（mg/g）111110.195212220.257313330.233421230.305522310.290623120.319731320.199832130.181933210.257Ij0.6850.7000.6950.742Ⅱj0.9140.7280.8180.776Ⅲj0.6380.8090.7230.719根据直观分析结果知，以桔梗皂苷D含量为评价指标，各因素对实验结果影响的程度依次为A>C>B，最佳醇提工艺为A2B3C2，即醇提工艺为：8（中国药品生物制品检定所， 18卷 辽宁中医药大学学报 倍量70%乙醇提取60 min。表6 醇提正交试验结果方差分析方差来源离均差平方和自由度方差F值显著性SA0.014520.007226.91<0.05SB0.002220.00123.99>0.05SC0.002820.00145.16>0.05SD0.000520.0003从表6方差分析结果可以看出，A因素即乙醇用量对桔梗皂苷D含量有显著性意义，而B、C两因素对桔梗皂苷D的含量无显著性影响，因此可以基本确定本品醇提工艺为A2B3C2。2.3 桑皮止咳颗粒制备以上7味药前胡、苦杏仁水蒸气蒸馏提取挥发油，加水量14倍，提取2次，每次2 h，收集挥发油加入β-环糊精包合，备用；其余药材加70%乙醇8倍量提取60 min，回收乙醇，浓缩，加入β-环糊精包合；包合物制粒，即得。2.4 桑皮止咳颗粒止咳平喘作用研究2.4.1 实验动物 BALB/cA小白鼠体重18~22 g，40只，雌雄各半。豚鼠体重160~200 g，20只，雌雄各半，购于中国医科大学。2.4.2 桑皮止咳颗粒对小鼠止咳作用研究取小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，Ⅰ组空白对照组，灌胃 0.9%NaCl 15 mL/(kg·d)，Ⅱ组低剂量桑皮止咳颗粒组灌胃1.5 g/kg，Ⅲ组高剂量桑皮止咳颗粒组灌胃3.0 g/kg，Ⅳ组阳性药物对照组，磷酸可待因组30 mg/kg。连续给药7 d，每天1次，于末次给药后1 h，将小鼠放入500 mL透明密闭容器内，均匀喷入雾化浓氨水，记录小鼠咳嗽潜伏期和放入容器后2 min内的咳嗽次数。2.4.3 桑皮止咳颗粒对小鼠平喘作用研究 取预选后豚鼠40只，雌雄各半，随机分为5组，Ⅰ组空白对照组灌胃NaCl 10 mL/kg，Ⅱ组低剂量桑皮止咳颗粒组，灌胃1.5 g/kg，Ⅲ组高剂量桑皮止咳颗粒组，灌胃3.0 g/kg，Ⅳ组阳性药物对照组，腹腔注射氨茶碱0.125 g/kg，连续给药5 d，每天1次，于末次给药后1 h将豚鼠放入玻璃钟罩内，喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组织胺混合液15 g，密切观察豚鼠引喘潜伏期（从喷雾开始到哮喘发作，呼吸极度困难，直至抽搐跌倒）。2.4.4 结果（1）小鼠止咳实验结果显示：与各组比较，桑皮止咳颗粒高、低剂量组对豚鼠咳嗽潜伏期均显著延长，小鼠咳嗽次数均显著减少，与模型组比较P<0.01或P<0.05。见表7。表7 桑皮止咳颗粒对氨水所致豚鼠咳嗽的影响（n=10，—

x±s）组别n剂量咳嗽潜伏期（h）Ⅰ10-51.37±10.12Ⅱ101.5 g/kg58.34±13.31*Ⅲ103.0 g/kg62.46±12.34**Ⅳ1030 mg/kg51.25±10.27注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。（2）豚鼠平喘实验结果显示：与模型对照组比较，桑皮止咳颗粒高、低剂量组均能延长豚鼠引喘潜伏期。与模型组比较P<0.01或P<0.05。见表8。表8 桑皮止咳颗粒对豚鼠引喘实验结果（n=8，—

x±s）组别n剂量引喘潜伏期（h）Ⅰ10- 65.3±10.12Ⅱ101.5 g/kg225.4±13.31*Ⅲ103.0 g/kg327.6±12.34**Ⅳ100.125 g/kg118.5±10.27注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。3 讨论本实验采用正交试验优选了前胡、苦杏仁挥发油提取的最佳工艺，结果表明提取时间对挥发油收得量影响最大。以桔梗皂苷D含量为指标考察醇提工艺，比较203、206、210、254 nm波长的色谱峰情况，综合灵敏度和基线平稳两个方面考虑，最终选择210 nm为检测波长，从而确定桑皮止咳颗粒的最佳制备工艺。咳嗽、气喘是呼吸道感染临床上常见的症状，严重影响人们的身体健康及工作。临床上应用桑皮止咳颗粒用于预防和治疗此种疾病。为确定其临床疗效，本实验做了止咳、平喘等药效学实验，研究表明桑皮止咳颗粒可明显的延长浓氨水诱发的小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数，对乙酰胆碱、组织胺混合液引发的豚鼠哮喘具有一定的对抗作用，充分说明桑皮止咳颗粒具有较强的止咳、平喘作用，为临床应用及推广提供了一定的实验依据。◆参考文献[ 1 ] 张村，李丽，肖永庆，等. 中药桔梗的研究进展[ J ] .中国中药杂志，2007，32 ( 3 )：181-185.[ 2 ] 陈尘，陈勤. 桔梗皂苷胶囊制备工艺的实验研究[ J ] .中药新药与临床药理，2009，20 ( 6 )：576-580.[ 3 ] 窦如海.实验动物和动物实验技术[ M ] .济南：山东科学技术出版社，2006：247.[ 4 ] 郭艳琼，杨裕忠，严浩成，等. 复方止咳口服液治疗热咳型咳嗽的药效学研究[ J ] .长春中医学院学报，2004，20 ( 1 )：42-44.[ 5 ] 陈艳霞，郭凯，王红娟，等. 肖和印教授从风论治儿童咳嗽变异性哮喘经验[ J ] .中国中西医结合儿科学，2012，4 ( 6 )：513-514.[ 6 ] 杨乐，陈泣. 桑白皮研究进展[ J ] .江西中医学院学报，2007，19 ( 3 )：98-100.[ 7 ] 刘杨珍. 杏仁的加工炮制工艺及现代药理研究[ J ] .大家健康，2012，6 ( 9 )：36-38.[ 8 ] 王小林，张玉杰，石任兵. 正交试验设计优选牛蒡子的提取工艺[ J ] .北京中医药大学学报，2003，26 ( 4 )：-65.[ 9 ] 张村，肖永庆，李丽，等. 白花前胡化学成分研究[ J ] .中国中药杂志，2012，36 ( 23 )：3573-3576.[ 10 ] 金鑫，章新华，赵乃才. 白花前胡石油醚提取物对家兔离体气管平滑肌的作用[ J ] . 中国中药杂志，1994，19 ( 6 )：365-367.[ 11 ] 刘元，韦焕英，姚树汉.等. 中药前胡类祛痰药理作用比较[ J ] . 湖南中医药导报，1997，3 ( 1 )：40.[ 12 ] 杨书斌，，孙立立，等. HPLC测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量[ J ] .中成药，2006，28 ( 10 )：1452-1454.[ 13 ] 孟令杰，刘百联，张英，等. 地骨皮化学成分研究[ J ] .中草药，2014，45 ( 15 )：2139-2142.35