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单胞藻快速培养技术及其影响因素■ 中国水产科学研究院黄海水产研究所 王彩理 滕瑜 中国水产科学研究院渔业机械仪器研究所 沈健/文图四角蛤蜊是我国常见的滩涂贝类，生长快、肉质细腻、味道鲜美，适应水温是0℃~35℃，适应盐度是5‰~35‰，饵料为单胞藻及原生动物，年繁殖2次，每年4月和10月为其采捕期。为了提高四角蛤的加工质量，采捕后需要立即进行净化、育肥和加工，所以单胞藻的持续供应很关键，贝类产业技术体系（CARS-48）利用半连续培养单细藻技术提高单胞藻生产的稳定性，解决了四角蛤低温净化保活技术中的关键环节。单胞藻投喂不但能使四角蛤加速新陈代谢净化吐沙、除去异味，而且能增肥、提高出肉率。四角蛤蜊净化一、国内外藻类培养情况对比1．国外情况国外在鱼、虾、贝育苗中的主要藻类培养品种为等鞭金藻、角毛藻及硅藻，环境条件参数为：温度20℃~22℃，光照5000Lx，pH值7.2~8.2，海水一般要经过4次过滤并高温杀菌水消毒，培养生长曲线类似开放式藻类生长曲线，指数生长期稍长，即达到相对生长下降期时间稍长。一般15L藻种用于250L袋培养，接种浓度约12万/ml，收获浓度为200万/ml。当藻种浓度达到200万/ml时，收获量不超过袋内总量的1/3，收获后马上补充消毒海水及营养盐，1天~2天藻液细胞可达到200万/ml。单胞藻培养法主要有开放式和封闭式，| 58
藻类培养2014年6月刊 总242期
多采用一次性或半连续性培养法。一次性培养法常用的培养器皿有2万ml玻璃瓶、3.5万ml树脂圆筒及直径3m深1m的大型玻璃缸圆槽；半连续培养法的常用培养容器框架式聚乙烯塑料袋，这种装置自带人工光源，袋内充气，并带一系列复杂的电加热、水交换调温系统控制水温。此种方法培养效果好，不受环境因子的制约，占地少、存放方便，但是投资大成本高。
2．国内情况
我国常用做海产动物幼体饵料培养的单胞藻类主要有三角褐指藻、新月菱形藻、等鞭金藻3011、湛江叉鞭金藻及扁藻，它们对光照、温度的要求如表1。多数单胞藻培养的最适水温为20℃左右，但四角蛤、杂色蛤等贝类4月育肥期收获时水温在10℃甚至低于6℃~7℃，为保证藻种的持续供给，应对培养水体进行加温和控温，可采用袋外预热、电保温和电气控制等方案。经过实验，1.5m3水体在室温为15℃~16℃时要达到设定水温23℃所需时间为7.5h，所耗功率为19.1kwh；达到设定水温后，欲长时间保持该水温平均耗电0.492kwh；若达到设定水温23℃后室温降低至6℃~8℃，则欲长时间保持该水温平均耗电1.383kwh。
金藻、扁藻等单胞藻还可作为四角蛤幼体的培养饵料，四角蛤幼体在海水盐度20‰~30‰、水温18℃~25℃时生长较快，在四角蛤幼体8个/ml~10个/ml的密度时单胞藻的日投喂量为6万/ml，可随幼体发育而逐渐增加。
种类三角褐指藻 新月菱形藻等鞭金藻湛江叉鞭金藻 扁藻表1 国内常用藻类生态条件参数培养温度(℃) 5~25 5~2810~3015~257~30最适温度(℃)10~1515~2025±23±20~28光照强度(Lx)3000~50003000~80003000~80003000~80005000~10000图1 供水供气系统图2 单胞藻培养工艺流程单胞藻培养工艺流程如图2所示：藻原种培养→扩种培养→半连续培养→接种藻种→日常管理→收获→再培养→再利用。3．四角蛤净化培养以20kg/m密度进行12h自然净化四角蛤，即能吐出体内90%的沙。然后加入收获的单胞藻，四角蛤能在2h食尽，及时补充投喂新鲜藻液，四角蛤经过再次净化之后，可吐尽体内99%以上的沙。处于繁殖期的四角蛤2蜊肥满度、出肉率最高，煮熟出肉率达35%~40％，此时食用价值最大，经1d净化培养时间即可吐尽泥沙，时间长易催卵；非繁殖季节的四角蛤要经3d~5d的净化、肥育，出肉率可由10%达到40%，提高之幅度相当大，还能消除异味，提高四角蛤的商品价值和经济价值。净化培养后停止投喂单胞藻，在低温保活净化系统中静养6h~8h，排空粪便和杂质，便于立即进行加工。59 |
二、四角蛤净化培养
1．供水供气系统（如图1）2．单胞藻培养工艺流程
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三、影响因素
1．光在单胞藻培养中是影响生长、繁殖最重要的因子，使用人工光源增加光照时间和强度，能提高藻类生长速度，在单胞藻的实验室培养时和藻种培养时，常使用人工光源进行昼夜照明，以获得最大的生长、繁殖速度，缩短培养周期。但也应该考虑，在单胞藻大规模生产性培养中，这种方法会大大增加成本。而采用12h光照12h黑暗交替的方法，效果良好。2．在单胞藻开放式培养中，一般都是采用大比例接种的方法，缩短延缓期，使藻类细胞能迅速生长，形成优势种，抑制敌害生物的繁殖，提高培养的成功率，但这样也增加了藻种的供应量，因此选择适宜的接种量对减少藻种培养规模、降低生产成本是十分重要的。采用适宜接种浓度30万/ml~50万/ml，用于接种的藻种浓度：等鞭金藻在220万/ml~250万/ml，新月菱形藻在300万/ml较合适，接种时间选择晴天上午进行，使藻类一经接种后就有一个适宜的生长环境，能较快的进入指数生长期。3．pH值在单胞藻培养中是极易变化变因子，随着藻浓度的增加，pH值随之上升，最终抑制了藻类的生长、繁殖。以往的封闭式、半封闭式培养均采用充CO2和空气的混合气体来控制藻液的pH值，同时提供藻类光合作用所需的CO2，这样也相应增加了一些设备，使培养装置的投资和生产成本大大增加，同时培养技术更为复杂，这对于实验室和小规模藻类培养时适用的，而大规模的生产性培养由于受到生产成本、技术条件等方面的制约，采用这种方法就很困难了。藻液容易pH值上升的原因，并采取了相应的措施控制pH值变化：一是在培养过程中，随着藻液浓度的增加而加大充气量，也就是增加二氧化碳的供给量，达到稳定pH值的目的。另外，充气也能使藻液翻腾，增加藻细胞受光的机会，同时起到间歇光照的作用，对于单胞藻的生长极为有利；二是对常规配方进行了改进，取得了良好的效果。在新配方中，尿素本身是中性，有不改变培养液酸碱反应、保持pH值稳定的特点。新配方中所增加的NaHCO3，即作为一种pH缓冲剂，同时也能在CO2供给不足时参与藻类的光合作用，抑制pH值上升，而NaHCO3本身也能降低藻液pH值。海洋渔业| 60
