猪病防控SwineDiseasePreventionandControl2019年第5期技术进步条件下猪圆环病毒病的研究进展周文茂1*陈海军2高军攀3渊1河北省石家庄市畜牧兽医技术开发中心袁河北石家庄050000曰050000曰32河北省石家庄市动物卫生监督所袁河北石家庄河北省石家庄市兽用制品供应站袁河北石家庄050000冤摘要院猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型引起的一种严重影响养猪业经济发展的猪免疫抑制性疾病遥该病已在我国猪群中呈流行趋势袁并常伴随多种并发或继发病原的感染遥本文从猪圆环病毒病的流行病学尧致病机理尧临床表现及实验室检测等方面进行了综述袁提出应重视疫苗免疫尧加强饲养管理水平尧完善猪场生物安全体系等方面的建设工作袁以期为猪圆环病毒病的防控提供技术支持遥关键词院猪圆环病毒病曰猪圆环病毒2型曰PCV曰免疫抑制曰防治中图分类号院S282曰S852.65文献标识码院A文章编号院1673-45(2019)05-0062-04猪圆环病毒病是由圆环病毒2型（PCV2）引起的一种猪免疫抑制性疾病，可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）、母猪繁殖障碍性疾病、仔猪先天性震颤（CT）等一系列多种不同临床症状的疾病[1]。PCV2一旦在猪群中流行传播，将很难清除，感染的猪群可能表现为亚临床症状，但其引起的免疫抑制使猪群易遭受其他病原的并发或继发感染[2]，给养猪业造成巨大损失。因此，对PCV2的准确诊断和有效防控是当前亟待解决的问题。猪是PCV2的易感动物，患病猪和隐性带毒猪是猪圆环病毒病的主要传染源，感染猪的鼻液、唾液、泪液、粪便、尿液中都含有病毒，会污染周围的环境，通过呼吸道或者消化道感染健康猪群。妊娠母猪感染后，病毒可以通过胎盘感染胎猪，导致妊娠后期出现死胎、僵尸胎等流产现象。感染公猪的精液中也会带毒，可以通过输精的方式感染母猪[5]。猪圆环病毒病一年四季均可发生，没有明显的季节性特征，不论大小、公母，不同品种的猪均可以感染PCV2，但1～4月龄仔猪较多发，尤其是断奶后1～2周的仔猪，逐渐失去了母源抗体的保护，但自身的免疫系统发育还不够完善而发病，因此推断该病的发生与断奶应激有很大的关系。1流行病学猪圆环病毒（porcinecircovirus,PCV）属于圆环病毒科圆环病毒属，是感染脊椎动物最小的一种病毒[2]。猪圆环病毒有PCV1、PCV2和PCV33个血清型，其中PCV1无致病性，PCV3由2016年Phan等[3]在美国从有相似临床症状的育肥猪中检出，其致病性尚未明确；由PCV2引起的一系列相关综合征称为猪圆环病毒病。2000年，郎洪武等[4]首次报道我国存在PCV2，如今PCV2已呈世界性流行，在我国猪群中也普遍存在。收稿日期：2019-04-10*2临床症状及病理变化2.1致病机理PCV2的致病机理一直是学界、业界关注的热点。研究发现PCV2侵袭的是单核吞噬细胞系统，而不存在于淋巴细胞中，但会导致猪的淋巴组织、肺脏、肝脏等通讯作者：周文茂62ChinaSwineIndustry2019年第5期器官出现炎症反应，破坏猪的免疫系统，造成免疫功能紊乱，使机体易感染其他病原[6]。近年来的研究发现，PCV2单一病原感染发病少见，或者是因为单一感染时没有出现典型的临床症状而被忽视，常见的是与其他多种病原混合感染，如与PRRSV、CSFV、PPV、PRV等。2.2临床症状猪圆环病毒病是一系列临床综合征的总称，每种综合征之间所表现的临床症状和病理变化存在一定的差异，一般表现为以下几种类型。2.2.1断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）主要危害断奶后仔猪，表现为呼吸困难、被毛粗乱、逐渐消瘦、生长发育受阻、腹股沟淋巴结肿大、腹泻、精神不振，部分猪还出现贫血症状，皮肤苍白。剖检可见患病猪全身淋巴结肿大，肺肿胀、间质增宽、质地坚硬如橡皮样、呈间质性肺炎，肺表面分布大小不等的红色至褐色的斑点。脾脏与肝脏肿大。肾脏肿大，有时可见白色散在斑点。2.2.2猪皮炎肾病综合征（PDNS）主要发生于8～18周龄猪和育肥猪，多呈散发。临床上表现为患病猪皮肤突然出现圆形或不规则形状、呈红色或紫红色病变，病变部位呈黑色，随着病情加重，病变区融合成较大的黑色坏死斑块，结痂脱落后留下明显疤痕。皮肤病变常见于病猪的后肢、腹部、会阴部，也可扩散至体侧及耳部。感染严重时会表现出四肢跛行、发热、厌食、皮下水肿、逐渐消瘦。剖检可见肾脏肿胀、苍白，皮质部有大面积出血或瘀血点，淋巴结肿大、出血。2.2.3母猪繁殖障碍性疾病妊娠母猪感染PCV2后可出现繁殖障碍，主要表现为流产、产死胎、木乃伊胎和弱仔等。怀孕母猪在妊娠早期感染PCV2可以导致胚胎死亡，妊娠中后期感染则导致母猪产死胎、木乃伊胎，剖检死胎可见非化脓性心肌炎[2]。一般初产母猪感染PCV2后流产率较高，经产母猪流产率较少，但产死胎和弱仔数量增加。公猪感染PCV2后精子数量减少、活力下降、配种率降低，导致繁殖障碍。2.2.4仔猪先天性震颤（CT）初生仔猪感染PCV2可引起头部、四肢和尾巴连续SwineDiseasePreventionandControl猪病防控或间歇性震颤，严重者可见全身肌肉抖动，震颤为双侧性，外界刺激可引发或加重震颤，当病猪趴卧或睡觉时震颤可暂时性消失。病情严重时，震颤对骨骼和肌肉的影响使仔猪行走困难、无法正常吮奶，最终饥饿致死，若及时采取人工喂奶措施，有的仔猪1周后可逐渐恢复健康并存活。3实验室检测由于猪圆环病毒病常并发或继发多种病原感染，单纯从临床症状诊断难度较大，因此借助于实验室检测方法，可以准确、快速诊断PCV2感染。常用的实验室检测方法有病原学检测和血清学检测2大类。3.1病原学方法3.1.1病毒分离培养取感染PCV2猪病变组织处理后，接种原代肾细胞或PK-15细胞培养，由于PCV2病毒不会引起细胞病变，不能直接判断病毒分离情况，需要借助于间接免疫荧光试验（IFA）、PCR或电子显微镜等方法进行确认。病毒分离培养费时费力，操作繁琐，不适用于猪圆环病毒病的快速诊断。3.1.2间接免疫荧光试验取病变组织以盖玻片在PK-15细胞中培养，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清与细胞培养物中的PCV反应，可对PCV进行检测和分型[7]。IFA用时少、操作简便，应用非常广泛，主要用于病毒分离效果的鉴定及病变组织PCV感染的检测。3.1.3核酸原位杂交技术（ISH）ISH敏感性高，可以精确地定位PCV病毒在组织细胞内的位置，有助于深入研究PCV的致病机理。Choi等[8]用地高辛标记的探针做原位杂交可检测PCV。Nawagitgul等[9]根据PCV的基因序列，设计了一组探针可以区分PCV1和PCV2。Sirinarumitr等[10]利用荧光标记RNA探针，与细胞中病毒核酸，固定或石蜡包埋的组织中的PCV病毒核酸进行杂交，建立了快速检测PCV的原位杂交技术。该方法应用快速加强杂交缓冲液（rateenhancementhybridization,REH），大大缩短了检测时间，提高了PCV2的诊断效率。接着Siri-ChinaSwineIndustry63猪病防控SwineDiseasePreventionandControlnarumitr等[11]又建立了双杂交方法，可同时检测2种病毒的感染。3.1.4PCR方法PCR方法具有快速、简便、特异的优点，被广泛应用于各种疫病的检测。国内外已经建立多种PCR方法用于PCV检测，包括常规PCR、复合PCR、竞争PCR和巢式PCR等[12]，可以特异性地区分PCV的不同血清型。当前国内对于PCV2的流行病学调查，最常用的就是PCR方法，已经出现猪圆环病毒PCR检测试剂盒，但是PCR方法敏感性高，易出现假阳性结果，因此需要结合血清学方法进行检测，确保检测结果准确、可靠。3.1.5免疫组化（IHC）IHC与IFA一样，都属于免疫染色方法。IHC技术是将抗原抗体反应的专一性和显微形态学相结合，用以研究组织或细胞中抗原定位的一种方法。使用该方法检测PCV病毒时，可以结合病毒形态变化，进行快速、特异的诊断。此外，IHC可以对携带病原的细胞及组织的大体形态进行评价，而且只需要借助于普通显微镜在日光下即可进行观察。与IFA相比，该方法的样本颜色更稳定、更易于保存。3.2免疫学方法3.2.1间接免疫荧光试验IFA即可用于抗原检测，也可用于抗体检测，国外已有检测PCV的标准化试剂盒。可以通过检测猪血清中的抗体，确定PCV的感染情况。该方法快速简单，应用广泛，但是洗涤不干净，易出现非特异性结果。此外，该方法不能有效区分抗体对应的PCV血清型。3.2.2免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）该方法可以用于检测PCV或血清中的PCV抗体，但是不能区分PCV血清型，应用局限，国外多用于研究，国内应用较少。3.2.3酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA方法因为检测速度快、敏感性高、特异性强等优点被广泛应用于疫病临床诊断中，也是检测PCV2抗体的常用检测方法。国内外的科研人员已经建立多种ELISA方法，为进行PCV感染的血清学调查提供技术支撑。Walker等[13]首次建立竞争ELISA方法用于检测PCV2抗体，该方法敏感性高、特异性好，可以用于ChinaSwineIndustry2019年第5期PCV2抗体的大规模检测。2002年，Nawagitgul等[14]建立了2种ELISA方法，分别用于检测针对PCV全病毒和病毒核衣壳蛋白的抗体，均具有较好的重复性和敏感性。但是ELISA方法与IFA存在同样的缺陷，不能特异性区分PCV的不同血清型对应的抗体，且病毒获得困难时该方法的应用受到一定。4综合防治PCV2感染已经成为影响养猪业的重大问题，但是目前仍没有特效的治疗方法，因此对该病的防治仍然是以预防为主、防治结合的方法。4.1疫苗免疫疫苗免疫是目前预防PCV2的重要手段。2010年PCV2疫苗开始在我国使用，经过临床验证免疫接种是预防和控制猪圆环病毒最快捷、最有效的措施，可以提高生产性能、降低发病率和死亡率。目前已经有多种PCV2疫苗投入市场，主要有全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗和嵌合病毒疫苗，其中全病毒灭活疫苗使用较为广泛。4.2加强饲养管理把好饲料关，避免霉菌毒素的危害，饲喂优质全价的饲料，提高猪群的免疫力；适当降低饲养密度，保持良好的通风和适宜的温度条件，可以有效降低氨气等有害气体的浓度；不同日龄、不同来源的猪避免混群饲养，做到每栏全进全出；根据季节和气候变化，适时做好防寒保暖、防暑降温工作，尽量减少仔猪断奶后的应激反应。4.3完善猪场生物安全体系实行封闭式生产管理，建立合理的猪场准入制度，对外来的人员、车辆、设备器具等进行严格消毒；猪场内禁止饲养犬、猫和其他畜禽，并防止野禽进入；做好场区内的灭鼠、杀虫工作；对场内粪尿和污水进行无害化处理。4.4药物预防目前还没有治疗该病的特效药物。对于发病早期的疑似感染猪要及时隔离检查治疗，争取做到早发现、早2019年第5期SwineDiseasePreventionandControl猪病防控诊断、早治疗，以控制病原的传播。断奶仔猪饲料中添加抗菌药物提前预防，以控制细菌继发感染；已发病的猪进行隔离治疗，主要以治疗继发感染为主，及时扑杀失去治疗价值的病猪，并作无害化处理。参考文献[1]罗黛青.猪圆环病毒病的诊断与防控对策[J].畜禽业,2015(1):12-13.[2]张光超.猪圆环病毒病的危害及综合防控[J].山东畜牧兽医,2018(2):74-77.[3]PhanTG,GiannittiF,RossowS,etal.DetectionofanovelcircovirusPCV3inpigswithcardiacandmulti-systemicinflam-mation[J].VirologyJournal,2016,13(1):184.[4]郎洪武,张广川,吴发权,等.断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J].中国兽医科技,2000,30(3):3-5.[5]段红梅.猪圆环病毒病的防治[J].畜禽业,2018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