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２００６年９月第３卷第９期ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＤｉｇｅｓｔ ・论 著・ Ｐ １ ６基因在喉癌中的表达 范锦荣 （江苏省滨海县人民医院耳鼻喉科 ［摘２２４５００） ｍＲＮＡ表达情况。结 要］ 目 的探讨Ｐ１６基因的表达与喉癌的关系。方法 采用ＲＴ—ＰＣＲ方法检测喉癌中Ｐ１６ 论Ｐ１６基因在喉癌中的 ＩＩ～ＩＩＩ级患者下降比较明显。结果 不同病理级别喉癌组织中Ｐ１６ ｍＲＮＡ表达均有不同程度下降， 表达明显低于正常喉黏膜组织，可能与喉癌的发生发展密切相关。 【关键词］Ｐ１６ ＲＴ—ＰＣＲ喉癌 中图分类号：Ｒ７３９．６５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７２—５０８５（２００６）０９—０００３—０２ ９５℃灭活５ｍｉｎ，再 即冰浴，一２Ｏ℃备用。 恶性肿瘤的发生是由于癌基因被激活、抑癌基因失活所导 致的癌细胞异常增殖的结果。Ｐ１６基因是一种新型抑癌基因…， １，４引物设计根据ＧｅｎＢａｎｋ提供的Ｐ１６基因已知序列 它能够最直接的抑制肿瘤发生，且与许多肿瘤的发生发展密切 相关，是细胞增殖周期的调节和抑制者。其抑癌机理与细胞周 期的密切相关 。喉癌是一种发生在喉黏膜上皮的恶性肿 瘤，好发于５０－－６０岁男性。在喉癌当中以鳞状细胞癌最多， 约占９０％，腺癌约占２％，其余为肉瘤，肉瘤中以恶性淋巴瘤较 为常见。有关Ｐ１６基因表达与喉癌的关系研究较少，本研究选 取１４例喉癌于术标本及３例正常喉黏膜标本，应用ＲＴ ＰＣＲ 方法，检测喉癌中Ｐ１６ ｍＲＮＡ的表达水平，探讨Ｐ１６对喉癌生 物学行为的影响。 （ＢＣＯ１５９６０），应用Ｐｒｉｍｅｒ５软件设计部分ＣＤＳ区引物上游引 物Ｐ１：５’。ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ ３’，下游引物Ｐ２：５’。 ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ ３’。均由ｆ 海英俊工程公司合成。 １．５ ＰＣＲ扩增总体积２５ ｕ１ ＰＣＲ反应体系：喉组织总 ＲＮＡ ＲＴ产物（ｅＤＮＡ）５ｇｌ，１０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ（ｗｉｔｈｏｕｔ ＭｇＣ１ ２） ２．５ｕｌ，ＭｇＣ１ （２５ｍｍｏ１／Ｉ ）１．５ｐｌ，Ｐ１６卜游引物（１０ｐｍｏｌ／Ｌ） １ １，Ｐ１６下游弓ｌ物（１０ｇｍｏｌ／Ｌ）１ １，ｄＮＴＰｍｉｘ（２ｍｍｏｌ／Ｌ） １ ｌａｌ，Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶０．２５ｇ］，ｄｄＨ２０ １２．７５ｇｌ，轻轻混匀 后离心，进行ＰＣＲ扩增。扩增条件为：９４℃，预变性３ｍｉｎ： ９４℃，变性４５ｓ；５７℃，退火４５ｓ；７２℃，延伸４ｓ。循环３２ 次。最后７２℃延伸１５ｍｉｎ，经２％琼脂糖凝胶电泳鉴定ＰＣＲ产 物。 １材料与方法 １．１标本 收集滨海县人民医院耳鼻喉科２００３年６ 月～２００５年１２月喉癌手术切除的标本１４ｆｆ０，其中男１ｏｆｆ０， 女４例；年龄１６～７Ｏ岁，平均５５岁。按组织学中所见肿瘤 细胞形态和分化程度将喉癌分为三级：Ｉ级为高分化型， ４ｆｆ０：ＩＩ级为中度分化型，４ｆｆ０；ＩＩＩ级为低分化型，６ｆｆ０。 ｌｌ 常喉黏膜标本３例。所有标本于于术切下后立即置液氮 中保存。 １．２总ＲＮＡ提取 取５０ｍｇ喉组织，置于１．５ ｍｌ离 心管中，加入１ｍｌ Ｔｒｉ ＺＯｌ，混匀，室温静置５ｍｉ ｎ。加入 ０．５ｍｌ氯仿，振荡１５Ｓ，静置２ｍｉｎ。４℃离心，１５０００ｒｐｍ ×１０ ｍｉｎ，取｝ 清。加入０．５ ｍｌ肄ｌ内醇，将管中液体轻 轻混匀，室温静置１０ ｍｉ ｎ。４℃离心，１５０００ ｒｐｍ×１０ ｍｉ ｎ， 弃｝：清。加入１ｍｌ７５％乙醇，轻轻洗涤沉淀。４℃离心， １ Ｏ０００ｒｃｆ×５ｍｉｎ，弃卜清。晾ｔ，力】１入２０ｇｌ的ＤＥＰＣ水 溶解（６５℃促溶１Ｏ～１５ ｍｉｎ）。甲醛变性胶电泳测其 ２结果 ２．１总ＲＮＡ的检测喉组织总ＲＮＡ经甲醛变性胶电泳，可 见２８Ｓ和１８Ｓ条带明亮、清晰、条带锐利，并凡２８Ｓ的亮度在 １８Ｓ条带的两倍以 ，提示ＲＮＡ术降解。ＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．８２， 说明ＲＮＡ纯度满意。结果见图１。 ２８Ｓ １ ８Ｓ 完整性。采用紫外分光光度计，测定０Ｄ２６０及０Ｄ２８０值， 计算ＲＮＡ总含量。 图１喉组织总ＲＮＡ电泳图 １．３逆转录反应在２Ｏ ｌ的反应体积中依次加入喉组 ２．２ ＲＴ—ＰＣＲ结果ＲＴ—ＰＣＲ产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳 榆测见一特异扩增条带，其分予量大小与预期结果相符，通过 软件分析发现喉癌组Ｐ１６ ｍＲＮＡ表大量较正常对照组明显下降， 织总ＲＮＡ ２．Ｏ１．ｔｌ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ ＲＴ ２．０ ｌａｌ：５ｍＭ ｄＮＴＰ ｍｉ ｘ ２．０ ｌ；０１ｉｇｏ—ｄＴ１２—１８ ｐｒｉｍｅｒ ２，０ ｌ；Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ 且随着喉癌病理分级的增加，Ｐ１６ ｍＲＮＡ表达逐渐下降。结果 见图２。 １．０ ｇｌ；ＤＥＰＣ Ｈ２０ １１．０ ｌ。置于３７℃孵箱中反应１ｈ，接着 ・３・ 维普资讯 http://www.cqvip.com
・论 著・ ２００６年９月第３卷第９期ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＤｉｇｅｓｔ 分级为ＩＩＩ级的患者Ｐ１６基因表达下降最低，说明Ｐ１６基因表 Ｎ 工Ｉ工工Ｉ 工 达减低有可能使癌细胞获得某种生长优势，预示这些患者预 后不良，这与各种肿瘤细胞系中存在Ｐ１６基因表达减低而具 有生长优势的结果相一致 ’ 。可见，Ｐ１６基因表达与患者的 预后有一定关系。 参考文献 图２ ＲＴ－ＰＣＲ扩增Ｐ１６基因 （Ｎ：正常对照组；Ｉ～ｌｌ Ｉ：喉癌组） ［１】Ｋａｍｂ，Ａ．Ｎ．Ａ．Ｇｒｕｉｓ，Ｊ．Ｗｅａｖｅｒ—Ｆｅｌｄｈａｕｓ，ｅｔ ａｌ，Ａ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ３讨论 恶性肿瘤的发生是由于癌基因被激活、抑癌基因失活所 导致的癌细胞异常增殖的结果。Ｐ１６基因是一种新型抑癌基 因，它能够最直接的抑制肿瘤发生，且与许多肿瘤的发生发 展密切相关，是细胞增殖周期的调节和抑制者。其抑癌机理 与细胞周期的密切相关。体外研究证实，Ｐ１６蛋白能特 ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｍａｎｙ ｔｕｍｏｒ ｔｙｐｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９４．２６４（５１５７１：Ｐ．４３６～４０． ［２】Ｓｅｒｒａｎｏ，Ｍ．Ｇ．Ｊ．Ｈａｎｎｏｎ，ａｎｄ Ｄ．Ｂｅａｃｈ，Ａ ｎｅｗ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｔｉｆ ｉｎ ｃｅｌｌ—ｃｙｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｃａｕｓｉｎｇ ｓｐｅｃｉｉｃ ｉｆｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ／ＣＤＫ４．Ｎａｔｕｒｅ， ｌ９９３．３６６（６４５６）：Ｐ．７０４～７． 异地抑制ＣＤＫ４的活性。ＣＤＫ４可能通过调节多种底物的磷酸 化，成为打开Ｇ卜Ｓ期和Ｇ２－Ｍ期转换的关键。细胞周期蛋白Ｄ 表现某种癌基因的作用，当其过度表达时，细胞便会向癌变 ［３】Ｌｕｋａｓ， Ｊ．Ｄ．Ｐａｒｒｙ，Ｌ． Ａａｇａａｒｄ， ｅｔ ａ１．， Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ・－ｐｒｏｔｅｉｎ・－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ—ｃｙｃｌｅ ｉｈｉｎｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｔｕｍｏｕｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐ１６．Ｎａｔｕｒｅ，１９９５． 发展。细胞周期蛋白ｏＮＣＤＫ４结合时，可刺激细胞生长； Ｐ１６与ＣＤＫ４结合时，阻止细胞生长 。可见，Ｐ１６既是细 胞周期固有的者，又是抑制肿瘤生长的关键成分。 许多恶性肿瘤的发生均与Ｐ１６基因的异常表达有关。本 ３７５（６５３１１：Ｐ．５０３～６． ［４】任重，王琰，费声重．Ｐ１６抑癌基因在喉癌中的表达及癌恶 性度和颈淋巴结转移的关系［Ｊ］．中华耳鼻咽喉杂 志，ｌ ９９７，３２（１）：５２． 研究发现在不同病理分级的喉癌中Ｐ１６ ｍＲＮＡ表达均下降，且 随着喉癌病理分级的增加，Ｐ１６ ｍＲＮＡ表达下降越明显。病理 １ ｍｌ注射器加压注射阿替卡因口腔浸润麻醉的应用及护理 肖莉 张蕾陈思韩李正明 ５１８０５２） （广东省深圳市第六人民医院口腔科【摘要】 目 的 比较ｌｍｌ一次性注射器与弹压式注射器加压注射阿替卡因用于牙周膜浸润麻醉和骨膜上浸润麻醉的麻 法选择诊断为上前牙急、慢性牙髓炎需做牙髓治疗的患者ｌ３６例（２４０颗牙），随机分为４组，分别 论使用ｌｍｌ一次性注射器加压注射阿替卡因是一种方便、有效而叉经济安 醉效果及护理体会。方用ｌｍｌ注射器与弹压式 射器进行骨膜上浸润麻醉和牙周膜浸润麻醉，比较两种方法的麻醉效果。结 果使用ｌｍｌ注射器与 使用弹压式注射器的麻醉效果无显著性差异。结全的方法 【关键词】ｌｍｌ注射器 弹压式注射器 阿替卡因 浸润麻醉 中图分类号：Ｒ７８２．０５４ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７２—５０８５（２００６）０９—０００４—０３ 射器，每次使用后必须清洗、高压消毒。同时弹压式注射器价 格较高，科室配置有限，周转受限。本文旨在探讨ｌｍｌ一次性 注射器在口腔局部浸润麻醉中的应用及护理，以期为临床 作 增加一些新的选择，现报道如下。 在口腔治疗中越来越强调无痛操作，麻醉剂的发展提高了 麻醉的效能，而麻醉技术的进步则更完善了无痛操作…。阿替 卡因注射液属酰胺类麻醉剂，具有浸润能力强、麻醉起效时间 短、局麻作用好等特点，在Ｕ腔局部浸润麻醉中的应用日益增 多。与之配套弹压式注射器和 次性小直径注射钊 头，有利于 保证无菌、无痛、加压注射操作 。但弹压式注射器为金属注 １材料与方法 １，１病例选择 ・４・
