一、果酒、果醋酒精发酵→醋酸发酵↓↓果酒果醋1.冲洗：无需多次冲洗：以免洗去葡萄表面的野生型酵母菌先冲洗再除去枝梗：避免除去枝梗时引起葡萄破损，增添被杂菌污染的机会。所有用具用体积分数为70％的酒精消毒2.果酒制作：菌种：酵母菌单细胞真菌（真核生物）异养兼性厌氧型多以出芽生殖方式（无性生殖）、孢子生殖方式繁殖①有氧条件下：C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O大量繁殖②无氧条件下：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2缺氧、呈酸性酵母菌能引起面包松软的原因是酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软。发酵条件：温度：18~25℃O2控制时间：10~12d不需要对葡萄进行严格的消毒处理：在缺氧、酸性的发酵液中，酵母菌可以生长发酵，而绝大数其他微生物都因无法适应这一环境而受抑制。葡萄酒呈现深红色的原因：红葡萄皮的色素进入发酵液。3.果醋制作：菌种：醋酸菌好氧细菌（原核生物，不含细胞核和除核糖体之外的细胞器）①氧气、糖源都充足时：C6H12O6+2O2→2CH3COOH+2O2+2H2O②缺少糖源时，氧气、酒精：C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O若将果酒暴露在空气中，一段时间后表面会出现白色菌膜，形成原因是醋酸菌在液面大量繁殖产生的。发酵条件：温度：30~35℃O2充足时间：7~8d4.装置：①若如右图装置：装置中的充气口先打开使酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精发酵过程中再关闭（无氧/密闭/密封），否则可能使发酵液从充气口流出，发酵液变酸，在醋酸发酵过程中连续输入无菌氧气；排气口在酒精发酵过程中应开放，排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，目的是既可以放气，又防止空气中的微生物污染发酵瓶，开口向下的目的是排出酒精发酵时产生的CO2，防止发酵瓶瓶塞被冲开；出料口用来取样检测；葡萄汁只装2/3，留1/3空间的目的是让酵母菌先有氧呼吸进行繁殖。②若用瓶子做装置：制酒时，要每天拧松瓶盖2～4次，目的是放出CO2；制醋时，将瓶盖打开，盖上一层纱布。5.检验是否有酒精产生：重铬酸钾在酸性条件下：橙色→灰绿色二、腐乳让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制参与豆腐发酵的微生物：毛霉、曲霉、根霉、酵母菌等起主要作用的：毛霉丝状真菌（真核生物）异养需氧型孢子生殖豆腐长的白毛：毛霉的白色直立菌丝蛋白质蛋白酶小分子的肽+氨基酸脂肪脂肪酶甘油+脂肪酸挑选葡萄→冲洗→榨汁→1.2.毛霉的生长：加盐之前为前期发酵，目的是创造条件让毛霉生长，使毛霉形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。豆腐的选用：含水量为70％左右的豆腐温度：15~18℃腐乳外部的一层致密的“皮”：前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝）搓毛：有利于腐乳成形，防止腐乳烂块3.加盐腌制：后期发酵主要是酶与微生物协同作用，生成腐乳的香气。加盐方法：逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。（越接近瓶口，杂菌污染的可能性越大）盐的作用：①析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬；②抑制微生物的生长，避免豆腐块变质；③调味。盐的用量：豆腐:盐=5:1盐的浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐变质；盐的浓度过高，会影响腐乳的风味。4.配制卤汤：酒：①抑制微生物的生长；②使腐乳具有独特的香气。含量：一般控制在12％左右。酒精含量过高，（对蛋白酶的抑制作用大，）腐乳成熟的时间将会延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐。香辛料：①调制腐乳的风味；②防腐杀菌。5.影响腐乳质量和风味的因素：水的含量；盐、酒的用量；发酵温度、时间；菌种和杂菌防止杂菌污染：封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。三、泡菜原料加工加盐修整、洗涤晾晒、切分（洗净晾干）配制盐水条状或片状泡菜盐水加入调味料，并装坛发酵测定亚盐含量成品1.乳酸菌：种类分为乳酸链球菌、乳酸杆菌细菌（原核生物）异养厌氧型对抗生素敏感：生产上不能用含有抗生素的牛奶发酵成酸奶，原因是抗生素会抑制乳酸菌（细菌）的繁殖。原理：无氧条件下：乳酸菌将葡萄糖→乳酸（细胞质中）市场上购买的真空包装泡菜，在没有发生漏气的状态下发生了“涨袋”现象，有同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，此同学的观点是错的，原因是乳酸菌代谢过程中不产生气体。2.亚盐：白色粉末，易溶于水一般不会危害人体健康；只有在特定的条件下（适宜的pH、温度和一定的微生物作用）：亚盐→亚硝胺（致癌、致畸、致突变）3.泡菜的制作：盐水：盐:水=1:4煮沸：除去溶解氧，杀出杂菌冷却：避免杀死乳酸菌向坛盖边沿的水槽中注满水：保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境（不封闭有什么结果？①有氧呼吸会抑制无氧呼吸②杂菌污染）加入陈泡菜液：增加乳酸菌含量。发酵时期乳酸菌乳酸亚盐发酵前期少（有氧气，乳酸菌活少增加（盐还原菌的作用）动受到抑制）发酵中期最多（乳酸菌抑制其他积累增多，下降（盐还原菌受抑制，部菌活动）pH下降分亚盐被分解）发酵后期减少（乳酸积累，pH下继续增多，下降至相对稳定降，抑制其活动）pH下降（盐还原菌被完全抑制）曲线模型影响泡菜中亚盐含量的因素：腌制的时间、温度和食盐的用量从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是乳酸菌数量增加，杂菌数量较少，原因是乳酸菌比杂菌更为耐酸。发酵最佳时间：亚盐含量低、乳酸含量不是最高10d之后如果在实验后，发现一段时间内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间。泡菜坛内的白膜：产膜酵母菌（醋瓶或啤酒瓶内形成的白膜：醋酸菌）4.测定亚盐含量：配制溶液→配置标准显色液→配置样品处理液→比色原理：在盐酸酸化条件下，亚盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料硅胶：干燥剂，用于干燥亚钠；提取剂：氯化镉、氯化钡；氢氧化铝乳液：吸附颗粒性物质（包括色素）；氢氧化钠溶液：中和过多的盐酸，营造碱性环境亚盐含量计算方法：样品中亚盐含量（mg）取样量（40mL滤液的质量，kg）白萝卜更适合于用做试验材料，理由是避免植物中色素对显色反应的干扰。四、微生物的培养与应用（一）微生物的实验室培养1.培养基分类：按物理性质：液体培养基、固体培养基（凝固剂琼脂）、半固体培养基按化学成分：天然培养基、合成培养基按用途：选择培养基、鉴别培养基化学成分：①水；②碳源（需求量最大）：自养型：无机碳（CO2）；异养型：有机碳；③氮源：含氮无机物：N2（固氮微生物：→NH3）、NO3-、NH4+、NH3；含氮有机物；氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有蛋白质、核酸；④无机盐：为xx生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定；除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件：pH：霉菌：酸性；细菌：中性或弱碱性；特殊营养物质/生长因子（如维生素）：培养基中加入链霉素以抑制细菌的生长；氧气能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料；硝化细菌在没有碳源的培养基上能够生长，原因是硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源。注：对异养生物而言：含碳、氮的化合物（有机物）既是碳源，也是氮源能量来源：自养生物：光能/某些化合物被氧化所释放的能量（化学能）异养生物：有机物中的化学能常见培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（又称肉汤培养基，细菌）、LB培养基（大肠杆菌）、麦芽汁琼脂培养基（酵母菌）、马铃薯琼脂培养基（真菌）、查氏培养基（霉菌）、MY培养基（霉菌和酵母菌的传代保藏）、伊红美蓝培养基（检测大肠杆菌，其菌落呈黑色）2.无菌技术：防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，避免操作者自身被微生物感染消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物。a.煮沸b.巴氏消毒法：70~75℃，30min或80℃，15min，优点：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。（高温瞬时消毒法）c.化学药剂：70％酒精（双手）、石炭酸（与紫外线消毒法）、氯气（水源）。d.紫外线消毒法：接种室、接种箱、超净工作台、密闭空间内的空气，原因：紫外线能使蛋白质变性，破坏DNA结构。在照射前，适量喷洒消毒液（石炭酸、煤酚皂溶液），可强化消毒效果。灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。a.灼烧灭菌：金属用具b.干热灭菌：玻璃器皿和金属器皿，干热灭菌箱c.高压蒸汽灭菌：培养基等液体灭菌，高压蒸汽灭菌锅；某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是未将锅内冷空气排尽。使用后的培养基在丢弃前须要经过灭菌处理。3.制备培养基：计算→称量→溶化（连同称量纸）→调pH→灭菌→倒平板倒平板：冷却到50℃左右：过高：不便于操作；过低：凝固使锥形瓶的瓶口通过火焰：防止瓶口的微生物污染培养基将平板倒置：既可以避免培养基水分过快挥发，又能够防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染将培养基溅在皿盖和皿底之间的部位：空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生4.纯化接种方式：平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种、穿刺接种等（1）平板划线法灼烧接种环：第一步：避免接种环上的其他微生物污染培养基。每次划线前：将接种环上残留的菌种进行消除。划线操作结束后：避免菌种污染环境、感染操作者。次数：划线次数+1灼烧接种环后等其冷却后再进行划线：避免接种环温度太高，杀死菌种。从上一次划线的末端开始划线：线条末端细菌数比起始端少，从末段开始划线可以实现随着划线次数的增多细菌数目逐渐减少。（2）稀释涂布平板法系列稀释：xx中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落；用灭菌水稀释涂布平板：涂布器末端浸在70％酒精中稀释倍数：细菌：104、105、106倍；放线菌：103、104、105倍；真菌：102、103、104倍5.微生物的培养与观察培养：细菌：30~37℃，1~2d；放线菌：25~28℃，5~7d；霉菌：25~28℃，3~4d菌落含义：由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。菌落特征：菌落的形状、大小、隆起程度和颜色研究人员通常可根据菌落的特征来对微生物进行初步的鉴定（或分类），原因是在一定的培养条件下，不同中微生物表现出各自稳定的菌落特征。为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了的平板置于恒温培养箱中培养。6.统计菌落数量每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，目的是可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。（1）活菌计数：一般选择菌落数在30~300的平板①稀释涂布平板法：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M数目偏低：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。②滤膜法（2）显微镜直接计数：利用血细胞计数板1mm×1mm×0.1mm每mL原液所含细菌数=4×106×每小格平均菌体数×稀释倍数数目偏高：无法区分活菌和死菌乙同学统计的菌落数分别为27、169、176，取平均值为124，有人认为乙同学的结果可信度低，原因是乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。7.设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。在接种前需要检测培养基平板灭菌是否合格，对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生。实验中为排除培养基被污染的可能性，需要设置一个空白对照，是用未接种（空白或接种无菌水）的培养基，在同样条件下培养，观察菌落。8.菌种保藏临时保藏：4℃冰箱缺点：保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异甘藏：-20℃冷冻室长期保存（二）选择培养基×土壤中分解尿素的细菌脲酶分解尿素的原理：脲酶CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3培养基：以尿素为唯一氮源鉴别方法：加酚红指示剂，变红（细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，pH升高）培养一段时间后，不能降解X（仅含有C、H两种元素）的细菌比例会下降，其原因是不能降解X的细菌因缺少碳源而不能增殖，而能降解X的细菌能增殖。若从培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。（三）鉴别培养基×分解纤维素的微生物将样品涂布到鉴别纤维土壤取样→选择培养*→梯度稀释→→挑选产生透明圈的菌落素分解菌的培养基上1.纤维素：（C6H10O5）n
纤维素酶：一种复合酶：C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶纤维素C1酶纤维二糖葡萄糖苷酶葡萄糖Cx酶2.选择培养：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。振荡培养：提高培养液的溶解氧的含量，使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。3.刚果红染色法刚果红（CR）与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。透明圈较大说明纤维素分解菌分解纤维素的能力较强。①先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应（NaCl溶液：洗去未和纤维素结合的刚果红溶液，留下大大小小的透明圈）；优点：显示出的颜色反应的就是纤维素分解菌；缺点：操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂。②在倒平板时就加入刚果红；优点：操作简便，不存在菌落混杂问题；缺点：琼脂、土豆汁中含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应；有些微生物具有降解色素的能力，它们会降解刚果红形成透明圈。4.发酵产纤维素：液体发酵法、固体发酵法纤维素酶的测定：滤纸+纤维素酶→葡萄糖5.例题（1）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。据表判断，培养基甲不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是液体培养基不能分离单菌落；培养基乙不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌。（2）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是碘液，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈。（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将含有抗生素的滤纸片置于该平板上，培养一段时间后，滤纸片周围出现透明圈，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的耐药菌。（4）在分离纯化乳酸菌所用的培养基中加入碳酸钙的作用有鉴别乳酸菌和中和产生的乳酸。五、果胶酶1.果胶：植物细胞壁和胞间层的组成成分，单体为半乳糖醛酸；影响出汁率，使果汁浑浊果胶酶：分解果胶的一类酶：多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶；分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层酶的活性：酶催化一定化学反应的能力。酶反应速度：用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示影响酶活性的因素：温度、pH、酶的抑制剂酶的生产：提取法、发酵法、化学合成法2.3.实验混合之前将果泥和果胶酶分别恒温处理：保证底物与酶在混合时的温度是相同的，避免了果泥与果胶酶混合时影响混合物的温度。通过测定滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活性的高低：果胶酶将果胶分解为可溶性小分子物质，小分子物质可通过滤纸，因此果汁的体积大小反映了果胶酶的活性高低。当果胶酶剂量超过酶的最适用量时，透光率反而下降，这时使果汁变浑浊的物质主要是果胶酶。六、加酶洗衣粉1.酶制剂：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶（碱性蛋白酶、碱性脂肪酶）蛋白酶蛋白质小分子的肽+氨基酸脂肪酶脂肪甘油+脂肪酸淀粉淀粉酶麦芽糖、葡萄糖葡萄糖苷酶C1酶纤维素纤维二糖葡萄糖Cx酶2.影响酶活性的因素：温度、酸碱度、表面活性剂影响洗涤效果的因素：酶制剂的种类、洗衣粉的用量、污物的类型、衣物的质地及大小、水温、水量、水质、浸泡时间、洗涤时间等注意：①对于蛋白质面料的衣物不能使用蛋白酶洗衣粉；②使用加酶洗衣粉要注意温度的控制和浸泡；③使用加酶洗衣粉后注意洗手；④衣服的洗涤不光要考虑洗涤效果，还要考虑衣物的承受能力、洗涤成本等因素；⑤酶作为一种生物催化剂，有一定的寿命，不能放置太久。七、固定化酶、固定化细胞1.直接使用酶：优点：催化效率高、低耗能、低污染；缺点：对环境条件敏感，易失活；难回收，成本高；酶混在产物中影响产品质量2.固定化酶高果糖浆：果糖含量为42％左右的糖浆；葡萄糖异构酶：葡萄糖→果糖优点：固定在载体上的酶可反复利用；缺点：不利于催化一系列的酶促反应适用方法：化学结合法、物理吸附法；所需条件：适宜的温度、pH值3.固定化细胞优点：成本低，操作更容易；酶活性不易受到影响缺点：反应物尤其是大分子不易与酶接近，反应效果下降适用方法：包埋法；所需条件：适宜的温度、pH值、营养物质适用方法不同的原因：细胞体积大，而酶分子很小；体积大的细胞难以被吸附或结合，而体积小的酶容易从包埋材料中漏出。步骤：制备固定化酵母细胞（酵母细胞的活化→配置CaCl2溶液→配置海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母溶液混合→固定化酵母细胞）→用固定化酵母细胞发酵CaCl2溶液：使胶体聚沉，形成稳定结构配置海藻酸钠溶液：加热时要用小火或者间断加热，防止焦糊海藻酸钠溶液与酵母细胞混合：冷却至室温再混合判断是否成功：观察凝胶珠的颜色和形状：凝胶珠应黄色；白色（颜色过浅）：海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；不是圆形或椭圆形：海藻酸钠的浓度偏高。八、血红蛋白样品的处理→样品的粗分离→样品的纯化→纯度鉴定血红蛋白：两条α-肽链、两条β-肽链、四个亚铁血红素基团（每条肽链环绕一个）1.样品处理柠檬酸钠：防止血液凝固（1）红细胞的洗涤：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化采集血样→低速短时间离心→吸取血浆→盐水洗涤→低速短时间离心→重复3、4、5三次上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要：洗涤次数过少，无法去除血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。（2）血红蛋白的释放：甲苯：溶解细胞膜；搅拌：加速细胞破裂（3）离心甲苯层（无色透明）脂溶性物质的沉淀层（白色薄膜固体）（红色透明液体）（暗红色沉淀物）2.粗分离：透析磷酸缓冲液（pH为7.0）目的：除去样品中分子量较小的杂质和离子或用于更换样品的缓冲液3.纯化：凝胶色谱法（分配色谱法）原理：相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外内部移动，路程较短，移动速度较快，相对分子质量不同的蛋白质分子得以分离。材料：交联葡聚糖凝胶（1）凝胶色谱柱的制作（2）凝胶色谱柱的装填尽量紧密：降低凝胶颗粒之间的空隙。不得有气泡存在：气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。（3）样品的加入和洗脱①调节缓冲液面；②滴加透析样品；③样品渗入凝胶床；④洗脱；⑤收集（待红色蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液。）如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。检查凝胶柱性能：加入大分子有色物质，观察色带是否均匀、狭窄、平整。4.纯度鉴定：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（测定蛋白质分子量：分子量越大，电泳速度越慢）电泳：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（所带静电荷的多少、分子的大小）九、植物有效成分植物芳香油成分：萜类化合物及其衍生物提取方法的依据：植物原料的特点加入无水
（一）水蒸气蒸馏法×玫瑰精油加入NaCl过滤NaSO
鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物—→分离油层—→除水—→玫瑰油1.水蒸气蒸馏法：水中蒸馏（最简便易行）、水上蒸馏、水气蒸馏水中蒸馏对于柑橘、柠檬不适用：水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。2.玫瑰精油：化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏玫瑰花瓣（盛花期）:清水=1:4；提取时往往选用新鲜的材料，理由是芳香油含量较高。3.蒸馏装置：安装按照从左向右、自下到上次序24如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会下降，原因是部分精油会随水蒸气挥发而流失。4.NaCl：增加盐的浓度，促使油水混合物（乳浊液中的油和水）的分离。分离油层：分液漏斗；无水Na2SO4：吸收油层中的水分。活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中，用活性炭处理提取液的目的是去除提取液中的色素。5.蒸馏温度太高、时间太短，产品品质就比较差；提高品质：延长蒸馏的时间。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是在一定时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加。密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度较低的地方，目的是减少挥发。6.薄荷叶：从薄荷叶中提取薄荷油时能采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是薄荷油和玫瑰精油的化学性质相似；薄荷油是挥发性物质，提取薄荷油时应选用鲜薄荷叶作原料，其原因是薄荷油挥发性强，干薄荷叶薄荷油含量少。（二）压榨法×橘皮精油（清洗沥干→）石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油1.石灰水：破坏细胞结构，分解果胶，防止橘皮压榨时滑脱，提高出油率。2.橘皮质量0.25％的NaHCO3和5％的Na2SO4：使橘皮油易于与水分离。3.普通布袋过滤：除去固体物和残渣；离心：除去质量较小的残留固体物；分液漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来4.静置：除去果蜡和水分5.用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分通过滤纸过滤，滤液与吸出的上层橘油合并，成为最终的橘皮精油。6.出油率=芳香油质量原料质量（三）萃取法×胡萝卜素胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素1.胡萝卜素：橘黄色晶体分类：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素（最主要）、γ-胡萝卜素一分子的β-胡萝卜素在小肠、肝脏等器官被氧化成两分子的维生素A（维生素A缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为夜盲症。）提取天然β-胡萝卜素的方法：①从植物中提取；②从岩藻（多种褐藻的俗称，真核，需要将鲜活的岩藻干燥）中获得；③利用微生物的发酵生产。2.萃取法提取原理：胡萝卜素易溶于有机溶剂的特点水蒸气蒸馏法不适合胡萝卜素的提取，原因是水蒸气蒸馏法适用于分离挥发性物质，而胡萝卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸馏出。注意：用于萃取的有机溶剂必须事先精制，除去杂质，否则会影响芳香油的质量。超临界CO2替代传统有机溶剂的突出优点是避免有机溶剂残留/有机溶剂易燃易爆/产品纯度低/高温下有效成分水解/溶剂污染环境。3.粉碎：颗粒要小干燥：温度太高、干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。不宜选用高温烘干或新鲜的植物的原因是高温烘干过程中，植物中的物质易被破坏；新鲜的植物含水量高，用于提取的极性有机溶剂会被稀释，进而降低对物质的提取效果。4.萃取剂的选择：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶石油醚（水不溶性，沸点高，无毒）提取胡萝卜素常用亲脂性有机溶剂（或有机溶剂）作为溶剂，原因是胡萝卜素是脂类物质；不选用乙醇的理由是萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂。5.萃取影响萃取效率的因素：主要取决于萃取剂的性质和使用量；原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成反比。水浴加热：直接使用明火加热容易引起燃烧。安装回流冷凝装置：防止加热时有机溶剂挥发。该实验操作过程中应注意的事项是在温度较低的情况下操作，防火。6.8.7.过滤：除去萃取液中的不溶物。浓缩：使用蒸馏装置用纸层析法可以将类胡萝卜素与叶绿素分开，鉴定：纸层析法，以标准的胡萝卜素样品作为（实验）对照。是类胡萝卜素和叶绿素在层析液纸层析法分离的原理解度高的随层析液在滤纸上的扩散速度快，（有机溶剂）中的溶解度不同，溶分离。反之则慢，从而将它们
