(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 108587911 A(43)申请公布日 2018.09.28
(21)申请号 201810341393.0(22)申请日 2018.04.17
(71)申请人 江西业力医疗器械有限公司
地址 330096 江西省南昌市高新技术产业
开发区天祥大道2799号南昌佳海产业园二期123栋(72)发明人 吕正和 陈永洪 王金钱 余尧毅
田成鑫 杨海敏 (74)专利代理机构 北京清亦华知识产权代理事
务所(普通合伙) 11201
代理人 何世磊(51)Int.Cl.
C12N 1/04(2006.01)A01N 1/02(2006.01)A01N 1/00(2006.01)
权利要求书1页 说明书4页 附图12页
(54)发明名称
一种细胞、组织及微生物保存液、制备方法及应用(57)摘要
本发明公开一种细胞、组织及微生物保存液、制备方法及应用，属于医疗系统领域。本发明的细胞、组织及微生物保存液原材料包括如下组分：氯化钾，氯化钠，磷酸氢二钠、磷酸三钠、丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇、乙二胺四乙酸二钠、溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵、十八十六烷基三甲基氯化铵、色素、蒸馏水中的一种或者几种。本发明提供的细胞、组织及微生物保存液价格比较低廉，且对运输环境要求较低。
CN 108587911 ACN 108587911 A
权 利 要 求 书
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1.一种细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，原材料包括如下组分：氯化钾，氯化钠，磷酸氢二钠、磷酸三钠、丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇、乙二胺四乙酸二钠、溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵、十八十六烷基三甲基氯化铵、色素、蒸馏水中的一种或者几种。
2.根据权利要求1所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，按照重量份数，所述细胞、组织及微生物保存液的原材料包括如下组分：
氯化钾或氯化钠10～100份、磷酸氢二钠1～10份、丙三醇100～1000份、十六烷基三甲基氯化铵1～5分、蒸馏水1000～10000份、色素适量。
3.根据权利要求1所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，按照重量份数，所述细胞、组织及微生物保存液的原材料包括如下组分：
丙三醇10～100份，磷酸三钠1～10份、苯酚1～10份、二硫苏糖醇10～50份、蒸馏水100～1000份，色素适量。
4.根据权利要求1所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，按照重量份数，所述细胞、组织及微生物保存液的原材料包括如下组分：
氯化钠或氯化钾10～90份、磷酸三钠1～10份、乙二胺四乙酸二钠10～50份、苯酚1～10份、二硫苏糖醇10～50份、溴代十六烷基三甲胺1～50份、丙三醇2～100份、十八烷基三甲基氯化铵1～50份、磷酸氢二钠1～5份、蒸馏水100～1000份、色素适量。
5.根据权利要求1所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，所述保存液中氯化钾或氯化钠作渗透压调节剂，磷酸氢二钠和磷酸三钠作pH值调节剂，丙三醇作固定剂，苯酚、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸二钠作抗氧化剂，溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵和十八十六烷基三甲基氯化铵作表面活性剂，蒸馏水作溶剂，色素作调色剂。
6.根据权利要求5所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，所述保存液pH值为6.0～7.0。
7.根据权利要求6所述的细胞、组织及微生物保存液，其特征在于，所述色素为孔雀蓝或苋菜红或翡翠绿等，浓度为0.002％～0.008％。
8.权利要求1-7任一项所述的细胞、组织及微生物保存液的制备方法，其特征在于，按顺序包括如下步骤：
(1)按一定重量份取各原材料，所述原材料包括如下组分：氯化钾，氯化钠，磷酸氢二钠、磷酸三钠、丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇、乙二胺四乙酸二钠、溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵、十八十六烷基三甲基氯化铵、色素、蒸馏水中的一种或者几种。
(2)将渗透压调节剂、固定剂、抗氧化剂和表面活性剂加部分蒸馏水充分混合溶解，之后加蒸馏水至一定体积，用pH值调节剂调节至pH6.0～7.0，后加入色素，混合滤过，得澄清透明的混合溶液。
9.权利要求1-7任一项所述细胞、组织及微生物保存液应用于各种生物细胞、组织或微生物的保存。
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说 明 书
一种细胞、组织及微生物保存液、制备方法及应用
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技术领域
[0001]本发明涉及医疗系统领域，特别是涉及一种细胞、组织及微生物保存液、制备方法及应用。
背景技术
[0002]细胞或组织从人体或动物的活体中取出后，将其放入显微镜检测之前，包括存储、运输过程中有很多很多的不可控的因素，导致细胞、组织及微生物被氧化、酶解等而难以检测。
[0003]目前细胞或组织保存液主要为高渗盐溶液或重铬酸钾溶液，另外，也有应用溶液作为保存液，但本身具有毒性，对检测人员长期使用易造成不良损害。另外，有一种进口保存液，不含毒性试剂且保存时间长，但进口价格比较昂贵，对运输环境要求较高，同时存储极为不便。因此急需一种价格低廉对运输环境要求较低、且保存细胞、组织及微生物时间长(大于2个月)的保存液。
发明内容
[0004]因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的细胞、组织及微生物保存液保存时间短，有毒性溶剂，价格比较昂贵，且对运输环境要求较高的缺陷，从而提供一种细胞、组织及微生物保存液。[0005]为此，本发明的技术方案如下：[0006]一种细胞、组织及微生物织保存液，原材料包括如下组分：氯化钾，氯化钠，磷酸氢二钠、磷酸三钠、丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇、乙二胺四乙酸二钠、溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵、十八十六烷基三甲基氯化铵、色素、蒸馏水中的一种或者几种。[0007]具体的，本发明提供的保存液可以有三种配方。[0008]配方1：氯化钾或氯化钠10～100份、磷酸氢二钠1～10份、丙三醇100～1000份、十六烷基三甲基氯化铵1～5分、蒸馏水1000～10000份、色素适量。[0009]配方2：丙三醇10～100份，磷酸三钠1～10份、苯酚1～10份、二硫苏糖醇10～50份、蒸馏水100～1000份，色素适量。[0010]配方3：氯化钠或氯化钾10～90份、磷酸三钠1～10份、乙二胺四乙酸二钠10～50份、苯酚1～10份、二硫苏糖醇10～50份、溴代十六烷基三甲胺1～50份、丙三醇2～100份、十八烷基三甲基氯化铵1～50份、磷酸氢二钠1～5份、蒸馏水100～1000份、色素适量。[0011]所述保存液中氯化钾或氯化钠作渗透压调节剂，磷酸氢二钠和磷酸三钠作PH值调节剂，丙三醇作固定剂，苯酚、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸二钠作抗氧化剂，溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵和十八十六烷基三甲基氯化铵作表面活性剂，蒸馏水作溶剂，色素作调色剂。[0012]其中，所述保存液PH值为6.0～7.0。[0013]其中，所述色素为孔雀蓝或苋菜红或翡翠绿等，浓度为0.002％～0.008％
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说 明 书
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本发明还提供了上述细胞、组织及微生物保存液的制备方法，按顺序包括如下步
骤：
[0015]
(1)按一定重量份取各原材料，所述原材料包括如下组分：氯化钾，氯化钠，磷酸氢
二钠、磷酸三钠、丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇、乙二胺四乙酸二钠、溴代十六烷基三甲胺、十六烷基三甲基氯化铵、十八十六烷基三甲基氯化铵、色素、蒸馏水中的一种或者几种。[0016](2)将渗透压调节剂、固定剂、抗氧化剂和表面活性剂加部分蒸馏水充分混合溶解，之后加蒸馏水至一定体积，用pH值调节剂调节至pH6.0～7.0，后加入色素，混合滤过，得澄清透明的混合溶液；[0017]此外，本发明还提供了上述细胞、组织及微生物保存液的应用，将所述细胞、组织及微生物保存液应用于各种生物细胞、组织或微生物的保存。[0018]相比现有技术，本发明的技术方案，具有如下优点：[0019](1)本发明提供的细胞、组织及微生物保存液价格低廉，且对运输环境要求较低。[0020](2)本发明提供的细胞、组织及微生物组织保存液保藏细胞、组织及微生物稳定性好，保存时间长，能够大于2个月。
[0021]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。附图说明
[0022]图1为本发明第一实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(一)形态的观察图；[0023]图2为本发明第一实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(二)形态的观察图；[0024]图3为本发明第一实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(三)形态的观察图；[0025]图4为本发明第一实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(四)形态的观察图；[0026]图5为本发明第二实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(一)形态的观察图；[0027]图6为本发明第二实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(二)形态的观察图；[0028]图7为本发明第二实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(三)形态的观察图；[0029]图8为本发明第二实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(四)形态的观察图；[0030]图9为本发明第三实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(一)形态的观察图；[0031]图10为本发明第三实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(二)形态的观察图；
[0032]图11为本发明第三实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(三)形态的观察图；
[0033]图12为本发明第三实施例的细胞、组织及微生物保存液中细胞(四)形态的观察图。
具体实施方式
[0034]为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的若干实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。[0035]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的
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说 明 书
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技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0036]实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。[0037]实施例1
[0038]本实施例的细胞、组织及微生物保存液的各组分重量份配比如下：[0039]氯化钾25、氯化钠25份、磷酸氢二钠5份、丙三醇500份、十六烷基三甲基氯化铵2分、蒸馏水10000份、孔雀蓝色素色素适量；[0040]本实施例的细胞、组织及微生物保存液按步骤制备：[0041](1)按重量份取各原料；[0042](2)将氯化钾，氯化钠，丙三醇、十六烷基三甲基氯化铵均匀混合，加水使各组分溶解溶解，之后加蒸馏水至一定体积，用磷酸氢二钠调节至pH6.0～7.0，后加入孔雀蓝色素，混合滤过，得澄清透明的混合溶液；[0043]本实施例的细胞、组织及微生物保存液保存效果可参阅图1至图4。[0044]实施例2
[0045]本实施例的细胞、组织及微生物保存液的各组分重量份配比如下：[0046]丙三醇10份、磷酸三钠1份、苯酚1份、二硫苏糖醇5份、蒸馏水100份，翡翠绿色素适量。
[0047]本实施例的细胞、组织及微生物保存液按步骤制备：[0048](1)按重量份取各原料；[0049](2)将丙三醇、苯酚、二硫苏糖醇加蒸馏水使各组分溶解，后加蒸馏水至一定体积以磷酸三钠调节PH至6.0～7.0，加入翡翠绿色素，得混合溶液。[0050]本实施例的细胞、组织及微生物保存液保存效果可参阅图5至图8。[0051]实施例3
[0052]本实施例的细胞、组织及微生物保存液的各组分重量份配比如下：[0053]氯化钠40份、氯化钾40份、磷酸三钠10份、乙二胺四乙酸二钠50份、苯酚10份、二硫苏糖醇50份、溴代十六烷基三甲胺50份、丙三醇100份、十八烷基三甲基氯化铵50份、磷酸氢二钠5份、蒸馏水1000份、苋菜红色素适量。[0054]本实施例的细胞、组织及微生物保存液按步骤制备：[0055](1)按重量份取各原料；[0056](2)将氯化钠、氯化钾、磷酸三钠、乙二胺四乙酸二钠、苯酚、二硫苏糖醇、溴代十六烷基三甲胺、丙三醇、十八烷基三甲基氯化铵、磷酸氢二钠混合均匀、加入蒸馏水溶解，并加入蒸馏水至一定体积，以磷酸三钠调节PH至6.0～7.0，加入苋菜红色素，滤过，得混合溶液。[0057]本实施例的细胞、组织及微生物保存液保存效果可参阅图9至图12。[0058]以上各实施例制备的细胞、组织及微生物保存液在常温放置4个月，保存液清澈，细胞、组织及微生物保持最初的形状、色泽和硬度和韧度，保存的细胞、组织及微生物远远超过2个月。
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说 明 书
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以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并
不能因此而理解为对本发明专利范围的。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
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图1
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图2
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图3
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图4
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图5
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图6
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图7
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图8
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图9
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图12
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