２０１４年８月５日第２３卷第ｌ５期 Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．１ ５，Ａｕｇｕｓｔ ５，２０１４ ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｎ王ｓ 中目茜 ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ 高效液相色谱法测定尿素乳膏中尿素含量 张毅 ，黄静 ，郭盈杉 （１．河北省食品药品检验院，河北石家庄０５００１ｌ； ２．河北省石家庄市药品不良反应监测中心，河北石家庄０５００３１） 摘要：目的建立测定尿素乳膏含量的高效液相色谱法。方法采用高效液相色谱法测定尿素的含量，色谱柱为Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ—ＮＨ：柱 （２００ ｍｍ Ｘ４．６ ｍｍ，５ Ｉｘｍ），乙腈一甲醇一１０％磷酸调ｐＨ至３．６的水溶液（９０：７：３）为流动相，检测波长为２００ ｎｍ，柱温为３０℃，流速 为０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量为２０ Ｌ。结果尿素进样量在２～４Ｏ ｇ范围内与峰面积呈良好线性关系（，＝０．９９９ ９５），平均回收率为 ９８．８３％，ＲＳＤ＝０．６５％（ｎ＝９）。结论该方法定量准确可靠，操作简便，灵敏度高，适用于尿素乳膏的质量控制。 关键词：尿素乳膏；高效液相色谱法；质量控制 中图分类号：１１９２７．２；１１９８６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１４）１５—００４１—０３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｒｅａ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｕｒｅａ Ｏｉｎｔｍｅｎｔ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｚｈａｎｇ Ｙｉｉ，ＨｕａＩｔｇ Ｊｉｎ ，Ｇｕｏ Ｙｉｎｇｓｈａｎｉ ｆ Ｊ．Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ ｓ疵 ｅ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ ０５００１１； ２．Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＡＤＲ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，Ｓｈｑｉａｚｈｕａｎｇ， Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ ０５００３１ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｅａ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｕｒｅａ Ｏｉｎｔｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｔｈｅ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ—ＮＨ２ ｃｏｌｕｍｎ（２００ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｍｅｔｈａｎｏｌ—ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ｔｏ ｐＨ：３．６ ｗｉｔｈ １０％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ（９０：７：３）．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅ— ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ａｔ ２００ ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．８ ｍＬ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｕｒｅａ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ２—４Ｏ Ｐ，ｇ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ（ｒ＝０．９９９ ９５）ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ９９．８３％，ＲＳＤ＝０．６５％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｔｏ ｏｐｅｒａｔｅ，ｈａｓ ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｕｒｅａ Ｏｉｎｔｍｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｕｒｅａ Ｏｉｎｔｍｅｎｔ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）；ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ 尿素乳膏为皮肤外用药，曾用名治裂膏，主要成分为尿素，化 学名为碳酰二胺，主要用于治疗鱼鳞病、手足皲裂、皲裂性湿疹、 １仪器与试药 ＬＣ２０１０ＣＨＴ型高效液相色谱仪（日本岛津），包括紫外检测 老年皮肤瘙痒及掌趾角化症Ｉｌ１。该品种质量标准收载于２０１０年 版《中国药典（二部）》 】，含量测定方法采用显色后紫外一可见分 光光度法。也有文献报道，采用紫外一可见分光光度法测定尿素 乳膏医院制剂中尿素的含量【３］。但该方法准确度不高，测定结果 受显色剂影响较大，使用不同供应商提供的对二甲氨基苯甲醛配 器、自动进样器；ＴＵ一１９０１型双光束紫外可见分光光度计（普析 通用）。尿素对照品（ＵＳＰ对照品）；尿素乳膏（含１０％尿素，由各生 产企业提供）；空白辅料（按最大处方量自行配置）；对二甲氨基苯 甲醛（北京化工厂，批号为９２０４０４）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为去 离子水，其他试剂均为分析纯。 ２方法与结果 ２．１ 色谱条件 制显色剂，空白基质的吸光度有很大差别；测定时对供试品溶液 放置时间的要求高，测定结果重现性差。而采用凯式定氮法测定 尿素的含量 】，操作烦琐，专属性差。为此，笔者拟建立专属性强、 灵敏度高、重复性好、操作简便的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法，用于 测定尿素乳膏的含量。 色谱柱：月旭ＵｌｔｉｍａｔｅＸＢ—ＮＨ２柱（２００ｍｍＸ４．６ｍｍ，５ ｐ，ｍ）； 流动相：乙腈一甲醇一１０％磷酸调ｐＨ至３．６的水溶液（９０：７：３）； 检测波长：２００ ｎｍ；柱温：３０℃；流速：Ｏ．８ ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：２０ Ｉ．ＬＬ。 部）》枸杞子生品项下甜菜碱的含量测定方法测定了３批样品中 中国药品标准，２０１１，１２（４）：２８８—２９１． 甜菜碱的含量，与试验中建立的液相色谱一串联质谱联用法所测 得的结果比较，含量普遍偏低。分析原因，应是传统薄层扫描法前 处理复杂、显色困难所致。本试验中所建立的供试品溶液处理方 法简便、快捷，不仅大大节省了人力、节约了成本，而且所测得的 结果更加真实可靠，更能反映样品中甜菜碱的真实含量。 【３】姚少威，宋金春，李玉琴，等．高效液相色谱法测定复方枸杞颗粒中 甜菜碱的含量【Ｊ】．中国医院药学杂志，２００５，２５（３）：２２５—２２７． ［４］燕朝丽．液质联用检测消肿止痛中成药的氨基比林及双氯芬酸钠［Ｊ】． 中国药师，２０１０，１３（１２）：１ ７７３—１ ７７５． 【５】李元元，定天明，魏柳珍，等．液一质联用法测定枸杞子提取物中甜 菜碱的含量［¨．中国医院药学杂志，２０１２，３２（１９）：１ ５８７—１ ５８８． 作者简介：赵勇，主管药师，研究方向为中药标准，（电话） ０７３ｌ一８２２７５８５３（电子信箱）ｆｅｎｇｎｉ２００２＠１２６．ｃｏｍ；王艳，硕士研 究生，研究方向为中药化学与分析，本文通讯作者，（电子信箱） ４６６２４３８４９＠ｑｑ．ｃｏｍ。 ［６］王佳佳，张伟，谭炳炎，等．血清中游离胆碱和甜菜碱的高效液相 色谱串联质谱法测定及稳定性研究【Ｊ］．营养学报，２０１１，３３（６）： ６０７—６１１． 【７】赵鹏，徐继林，刘雪梅，等．海带等四种大型海藻中甜菜碱液质分 参考文献： 【１】国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）【Ｍ】．北京：中国医药 科技出版社，２０１０：２３２． 析研究【Ｊ】．中国药学杂志，２０１１，４６（２４）：１ ８８６—１ ８８９． 【８】王亦男，谭志荣，陈尧，等．液质联用法测定健康受试者血浆中他 林洛尔的浓度【Ｊ】．中南药学，２００８，６（１）：４５—４８． ［２］方丽，祝明，郑成．ＨＰＬＣ法测定枸杞子中甜菜碱的含量［Ｊ】． （收稿日期：２０１３—０８—２５） ４／ ・药物鉴定・ 中圉药 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２０１４年８月５日第２３卷第ｌ５期 Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．１３，Ａｕｇｕｓｔ ５，２０１４ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２．２ 溶液制备 面积平均值为１ １３８ ２２５，ＲＳＤ为０．７８％（ｎ＝５）。 取样品适量（约相当于１００ｍｇ尿素），置１００ｍＬ容量瓶中， 加流动相适量，水浴加热使尿素溶解，放冷至室温，加流动相稀释 回收率试验：称取空白辅料约９００ｍｇ，共９份，分别置１００ｍＬ 容量瓶中，分别加入尿素对照品约８Ｏ，１００，１２０ ｍｇ各３份，加流 至刻度，摇匀，置冰浴中冷却，滤过，滤液为供试品溶液。按处方量 称取空白基质适量，同法制备阴性对照品溶液。称取尿素对照品 动相，按供试品溶液制备方法处理，精密量取２Ｏ ，注入高效液 相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。结果见表１。 表１ 尿素回收率试验结果（ｎ＝９） １０ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ容量瓶中，加流动相振摇使溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 ２．３ 方法学考察 专属性试验：分别吸取２．２项下３种溶液各２０ ，按拟订 色谱条件进样测定，记录色谱图，见图１。可见，辅料不干扰主成 分尿素的含量测定。 ０ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ Ａ ０ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ Ｂ ０ １ ２ ３ ４ ５ ６ Ｃ Ａ．阴性对照品溶液 Ｂ．对照品溶液 Ｃ．供试品溶液 图１ 高效液相色谱图 线性关系考察：称取尿素对照品约１００ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取０．１，０．５，１．０， １．５，２．０ ｍＬ，分别置１０ ｍＬ容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇 匀。分别精密量取２０ ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以 进样量（ ｇ，Ｘ）为横坐标、峰面积（ｙ）为纵坐标绘制标准曲线，得 回归方程Ｙ＝５３１ ６７８Ｘ一４３０ ０９７，ｒ＝０．９９９ ５（ｎ＝５）。结果表明， 尿素进样量在２—４０ Ｉｘｇ范围内与峰面积呈良好线性关系。 最低检测限确定：称取尿素对照品约１０ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。吸取上述溶液适量，用流 动相逐级稀释，依法进样。按３倍信噪比计算，尿素的最低检测限 为０．０４ ｇ。 精密度试验：称取尿素对照品约１０ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取２０ ，连续进 样６次，记录色谱图，测定尿素峰面积。结果的ＲＳＤ为０．４２％ （／７，＝６）。 重复性试验：取批号为１００７０４的样品，依法制备６份供试品 溶液，精密量取２０ ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外 标法计算含量。结果的ＲＳＤ为０．４８％（ｎ＝６）。 稳定性试验：称取尿素对照品约１０ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ 容量瓶中，加流动相稀释至刻度并摇匀，室温分别放置１，２，４，６， ８ ｈ，精密量取２０ ，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果尿素峰 ２．４样品含量测定 共收集样品１２８批，涉及生产企业１０家，依法制备供试品 溶液，按拟订色谱条件，测定含量，并与现行标准２０１０年版《中国 药典（二部）》中方法比较。选取批数较多的５家生产企业各３批 产品列出检验结果，见表２；１２０批样品数据统计分析见表３。结 果表明，ＨＰＬＣ法与药典方法的含量测定结果有显著性差异。 表２ ＨＰＬＣ法与药典方法样品含量测定结果比较（标示量的％） 厂家及批号ＨＰＬＣ法药典方法 厂家及批号ＨＰＬＣ法药典方法 ｌ＇ｉａｎｔａｉ［２０１１０１０２） １００．３ ９７．７ Ｓｖ（１００７０４）８２．９ ８０．３ Ｙｉａｎｔａｉ（２０１ １０３０１） １０１．２ ９９．１ Ｑｎ（１００９０１） ９９．２ ９３．０ ｒｉａｎｔａｉ（２０１ １０６０１） １００．４ ９８．２ Ｑｎ（１００９０２） ９７．８ ９３．２ Ｍｙｌ（１１０３１３） ９８．６ ９６．３ Ｑｎ（１００９０３） ９８．８ ９２．１ Ｍｙｌ（１１０３１４） ９８．７ ９７．５ Ｋｅｂ（１０１１３６） ９９．９ ９５．５ Ｍｙｌ（１１０３１５） １００．９ ９７．８ Ｋｅｂ（１０１２１０） ９９．５ ９４．４ Ｓｙ（１００６０３） ８２．４ ８０．６ Ｋｅｂ（１０１２３１） １００．５ ９４．２ Ｓｙ（１００７０１）８８．６ ８５．８ 表３ 样品含量测定结果成对双样本ｔ一检验（ｎ：０．０５） ３ 讨论 以流动相作溶剂，在２００—４００ ｎｍ波长范围内测定了尿素对 照品的紫外光谱图。结果尿素在１９６ ｎｍ波长处有最大吸收，因此 选择２００ ａｍ为检测波长。 流动相的选择试验中，流动相Ａ参照第３３版美国药典中Ｃ． 尿素原料含量测定方法的乙腈一甲醇一水（８９：１０：１），尿素峰形 ２０１４年８月５日第２３卷第ｌ５期 Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．１５，Ａｕｇｕｓｔ ５，２０１４ 中圉蔼 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ疵口 ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 肤美康胶囊的质量控制研究 戴军 ４１９３００） （湖南省溆浦县中医院，湖南溆浦摘要：目的建立肤美康胶囊的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对处方中的当归、牡丹皮、山药、茯苓进行定性鉴别，用高效液相色 谱法对制剂中的牡丹皮所合成分丹皮酚进行含量测定。结果在薄层色谱法中均能检出当归、牡丹皮、山药、茯芩；丹皮酚进样量在 ０．０４１ ８～０．８３６ Ｐ，ｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９ ７），平均回收率为９６．８９％，ＲＳＤ为０．９６％（ｎ＝６）。结论该方法简 便、准确可靠、重复性好，可用于肤美康胶囊的质量控制。 关键词：肤美康胶囊；薄层色谱；丹皮酚；高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１４）１５—００４３—０３ 肤美康胶囊是由地黄、柴胡、当归、牡丹皮、山药、茯苓、山茱 萸等中药加工制成的内服胶囊剂，处方源于临床经验方，具有疏 肝养阴、补血化瘀的功效，用于治疗黄褐斑、雀斑及色素沉着等 症。为保证该制剂的内在质量，笔者采用薄层色谱法对其中的当 归、牡丹皮、山药、茯苓进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱 （ＨＰＬＣ）法对牡丹皮中丹皮酚的含量进行测定 一１，现报道如下。 １ 仪器与试药 溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法【２０１０年版《中国药典》（一 部）》附录ⅥＢ］试验，吸取上述３种溶液各１０ ，分别点于同一 硅胶Ｇ薄层板上，以苯一乙酸乙酯一甲酸（４：１：０．１）为展开剂， 展开，取出，晾干，置紫外光灯（３６５ ｎｍ）下检视“， 。供试品溶液色 谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而缺 当归的阴性对照品溶液则无此斑点（图１ Ａ）。 牡丹皮：取本品内容物１０ ｇ，加乙醚４０ ｍＬ，加热回流１ ｈ，滤 过，滤液挥于，残渣加丙酮０．５ ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。取缺 岛津高效液相色谱仪，包括ＬＣ一２０ＡＴ输液泵、ＳＰＤ— Ｍ２０ＡＶＰ检测器、ＬＣｓｏｌｕｔｉｏｎ工作站（日本）；９９０６Ａ型超声仪（上 海）；硅胶Ｇ（青岛海洋化工厂）。丹皮酚、阿魏酸对照品（供含量测 牡丹皮的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。另取丹皮酚对 照品，加丙酮制成每１ ｍＬ含１ ｍｇ溶液，作为对照品溶液。照薄层 定用，批号分别为１１０７０８—２００５０６和１１０７７３—２００６１１），山药、 茯苓对照药材（批号分别为１２１１３７—２００４０２和１２１１１７— ２００６０５），均由中国药品生物制品检定所提供；肤美康胶囊（湖南 溆浦县中医院，批号为２０１２０８２１，２０１３０１０９，２０１３０９１８）；甲醇为 色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 薄层色谱鉴别 色谱法【２０１０年版《中国药典（一部）》附录ⅥＢ】试验，吸取上述３ 种溶液各１Ｏ Ｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷一乙 酸乙酯（３：１）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以５％酸性三氯化铁 乙醇溶液（５％三氯化铁乙醇溶液１０ ｍＬ，加盐酸２ ｍＬ，混匀），在 １０５℃加热至斑点显色清晰 ｌ。供试品溶液色谱中，在与对照品 溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而缺牡丹皮的阴性对照 品溶液则无此斑点（图１ Ｂ）。 山药：取本品内容物２５ ｇ，加二氯甲烷３０ ｍＬ，加热回流２ ｈ， 当归：取本品内容物１５ ｇ，加１％碳酸氢钠溶液５０ ｍＬ，超声 处理１０ ｍｉｎ，离心，取上清液，用稀盐酸调节ｐＨ至２～３，用乙醚 滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷１ ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。 取缺山药的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。另取山药对 照药材５ ｇ，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法【２０１０年版 《中国药典（一部）》附录ＶＩ Ｂ］试验，吸取上述３种溶液各５ Ｌ，分 振摇提取２次，每次２０ ｍＬ，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇１ ｍＬ 使溶解，作为供试品溶液。取缺当归的阴性样品，同法制备成阴性 对照品溶液。再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每１ ｍＬ含１ ｍｇ的 不对称，拖尾严重；流动相Ｂ为乙腈一甲醇一０．叭ｍｏＬ／Ｌ磷酸二 柱温对尿素的峰形、保留时间影响不大，但考虑到环境温度 的变化可能造成的影响，故选择柱温为３０℃。 本试验结果显示，ＨＰＬＣ法与现行标准２０１０年版《中国药典 （二部）》中紫外法的含量测定结果有显著性差异，前者明显偏低， 说明紫外法的含量测定结果受到了辅料的干扰，不能准确反映药 氢铵溶液（８９：１０：１），尿素峰形有所改善，但仍有拖尾现象；流动 相ｃ为乙腈一甲醇一１０％磷酸调ｐＨ至３．６的０．０１ ｍｏＬ／Ｌ磷酸 二氢铵溶液（８９：１０：１），尿素峰形对称，分离度良好，保留时间适 中；流动相Ｄ为乙腈一甲醇一１０％磷酸调ｐＨ至３．６的水溶液 （９０：７：３），尿素峰形对称，分离度良好，保留时问适中。考虑到盐 在大量有机溶剂中容易析出，选择流动相Ｄ进行试验。 品的实际质量，修订后的含量测定方法更科学、有效和可控。 参考文献： ［１］林慧萍，邹慧龙，梁晓美．４种医院制剂稳定性考察［Ｊ］．中国药业， ２０１１，２０（２）：５１—５２． 流动相ｐＨ对尿素的保留时间、峰形影响较大。随着ｐＨ减 小，主峰保留时间变短，峰形改善，分离度增加；但ｐＨ太低会影 响色谱柱寿命，当ｐＨ＝３．６时，保留时间适当，峰形对称，分离度 能达到要求。 溶剂的选择时，曾以乙醇和流动相作为溶剂分别进行试验， 尿素在这２种溶剂中的溶解性都比较好。考虑到尿素的检测波长 为２００ ｎｍ，为末端吸收，且乙醇在末端有较大吸收，而流动相 ９０％为乙腈，短波长溶剂吸收干扰小，因此选择流动相作为溶剂。 【２］国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）【Ｍ】．北京：化学工业 出版社。２０１０：３７９． ［３］刘 炜，孙 颖，曾蔚欣，紫外分光光度法测定尿素乳膏中尿素的 含量ＩＪ］．天津药学，２０１１，２３（６）：２０—２１． ［４１ ＧＢ／Ｔ ２４４１．１—２００８，尿素的测定方法第一部分：总氮舍量［Ｓ］． （收稿日期：２０１３—１０—２５；修回日期：２０１４—０１—２９）
