北方药学２０１５年第１２卷第５期 １５ Ｈ ＰＬＣ法测定黄芩素中黄芩苷的含量 戴兰基成（诺和诺德（中国）制药有限公司天津３００４５７） 摘要：目的：采用ＨＰＬＣ法测定黄芩素中黄芩苷的含量。方法：以ＯＤＳ—ＨＧ一３（ｉｄ４．６ｍｍｘ７５ｍｍ）为色谱柱，甲醇：水：冰醋酸（５０：５０：１） 为流动相，检测波长２８０ｎｍ。结果：在此条件下，黄芩苷的进样量在Ｏ．１５～０．５５１￣ｇ时，与峰面积呈良好的线性关系（ ０．９９９９）。平均回 收率为９９．６４％．ＲＳＤ为１．０５％。结论：该方法可作为黄芩素的质量控制手段。 关键词：ＨＰＬＣ黄芩素黄芩苷含量测定 中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１ ６７２－８３５１（２０１ ５）０５－００１ ５—０２ ５７４７９、５８１９６、５７６８０、５７８９５，ＲＳＤ（％）＝０．６８％。 黄芩素为唇形科植物黄芩干燥根中黄酮类的总提取物【ｌ＿，具 积分别为：５７１６３、５重复性实验：取同一批样品，称取６份，按拟定的含量测定方 有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之效［２１。本文以黄芩苷为定量 ２．指标，采用ＨＰＬＣ法测定黄芩素中黄芩苷的含量，并进行了方法 法，进行提取、分析，测得值为７５．４３％、７５．９８％、７５．２４％、 学研究。 １材料与方法 ７４．７２％、７４．９１％、７５．１５％，ＲＳＤ（％）＝０．５９％。 ２．６样品测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各５ ｌ，进样， 表１黄芩素中黄芩苷含量（％） １．１仪器：日本岛津ＬＣ一６Ａ高效液相色谱仪，ＳＰＤ一６ＡＶ可见紫 结果见表１。 外检测器，Ｃ—Ｒ３Ａ型数据处理机；Ｅｔ本岛津ｕＶ一２１００紫外分光 光度仪。 。１．２色谱条件：色谱柱：ＯＤＳ—ＨＧ一３（ｉｄ４．６ｍｍｘ７５ｍｍ）；流动相：甲 醇：水：冰醋酸（５０：５０：１）；流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：２８０ｎｍ；进样 量：均为５ ｌ；柱温：室温。 １．３药品与试剂：黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所， 批号：０７１５—９７０７。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为去 离子水；样品由天津中新药业提供。 ７回收率测定：精密称取黄芩苷含量８０．２３％的批次样品５份， ｌ－４对照品溶液的配制：精密称取黄芩苷对照品５ｍｇ，置１００ｍｌ ２．８０ｍｒＪｍｌ黄芩苷对照品溶液各 量瓶中，加５０％的甲醇超声处理３０ｍｉｎ冷却至室温，并稀释至 每份７ｍｇ，分别加入浓度为２．２ｍｌ，依含量测定方法提取、测定，计算回收率，结果见表２。 刻度摇匀，即得（每ｌｍｌ含黄芩苷５ｏ￣ｇ）。 １．５样品供试液的配制：取本品约１４ｍｇ，精密称定，置１００ｍｌ量 瓶中，加５０％的甲醇超声处理３０ｍｉｎ冷却至室温，并稀释至刻 度摇匀。精密量取５ｍｌ置１０ｍｌ量瓶中，加５０％的甲醇稀释至刻 度摇匀，用０．４５１￣ｍ滤膜过滤，即得。 ２检查与测定 表２回收率实验结果（ｍｇ） ２．１对照品来源及纯度检查：黄芩苷对照品购自中国药品生物 制品检定所，批号：０７１５—９７０７。 按照高效液相色谱法（《中国药典》一部），配置黄芩苷对照 平均回收率＝９９．６４％，ＲＳＤ＝Ｉ．０５％。 品溶液并测定，纯度为９９．６３％。 ８稳定性实验：将制备好的供试品溶液每小时进样１次，供试 ２．２定性分析：采用薄层色谱法。据文献口】取本品适量，加甲醇， ２．结果见表３。 制成每ｌｍｌ含０．２ｍｇ的溶液，作为供试品溶液。按照薄层色谱法 品溶液的吸收面积基本无变化，测试，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 ２．３线性关系考察：精密吸取黄芩苷对照品溶液（浓度为０．０５ｍｇ／ ｍ１）３￣ｌ、５ ｌ、７ ｌ、９ ｌ、１ｌｌｘｌ，进样分析： ①进样量（Ｉｘｇ）：０．１５、０．２５、０．３５、０．４５、０．５５。 ②峰面积积分值：３２６７７、５７１６３、８３２６４、１０６２８４、１３２０４９。 经统计学计算得回归方程：Ｙ一４４６５．３５＋２４７８６５Ｘ，ｒ＝ ０．９９９９。说明在０．１５～０．５５１ｘｇ之间黄芩苷呈线性关系。 ２．４精密度实验：对照品重复进样每次５ ｌ共５次，测定吸收面 表３稳定性实验结果 ３讨论 ３．１波长的选择：测定黄芩苷的紫外吸收光谱图，确定为２８０ｎｍ 处有最大吸收，故选择此波长为检测波长。 ３．２流动相的选择：选甲醇：水：冰醋酸比例５０：５０：１，样品中黄芩 定方法，并对该方法进行了方法学验证，进行了阴性干扰试验对 为提取溶剂时，栀子苷和欧前胡素的含量均最高，超声３０ｒａｉｎ即 比，证明该方法简单、可行。因此，增加含量测定项目有助于完 可提取完全。 善黄连上清片的质量标准，提高药品的质量。 参考文献 ３．２由于栀子苷的最大吸收波长为２４０ｎｍ，欧前胡素的最大吸收 【１】国家药典委员会．中国药典【ｓ】．’一部，北京：中国医药科技出版 社，２０１０：１０６７—１０６８． 波长为３００ｎｍ，所以，采用ＰＤＡ检测器进行检测。 ３．３以不同比例的甲醇、乙醇为溶剂，以栀子苷含量和欧前胡素含 ［２］师永清，师永花．双波长ＲＰ—ＨＰＬＣ同时测定黄连上清片中栀 量分别为指标，观察回流（０．５ｈ、１．０ｈ、１．５ｈ）、超声（１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、 子苷和黄芩苷的含量【Ｊ】．中国现代应用药学，２０１１，１１（２８）： ３０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ）、冷浸（１ｈ、２ｈ、３ｈ）不同的提取方法；结果表明甲醇 】０４１－１０４４． ｌ６ 北方药学２０１５年第１２卷第５期 活力源片微生物限度检查方法的验证 李 敏 乐正永（遵义市食品药品检验所遵义５６３００２） 摘要：目的：建立活力源片微生物限度检查法。方法：细菌计数按养基稀释法（０．５ｍｌ／皿）进行验证，霉菌及酵母菌按常规法（１ｍｌ／￣） 进行验证，控制菌按常规法验证。结果：细菌按培养基稀释法（０．５ｍｌ／￣－）计数，霉菌及酵母茵按常规法（１ｍｌ／￣－）计数。试验组的回收 率均达７Ｏ％以上；大肠埃希茵及大肠菌群按常规法均能检出。结论：该方法可用于活力源片的微生物限度检查。 关键词：活力源片微生物限度检查验证常规法培养基稀释法 中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—８３５１（２０１５）０５—００１６—０２ 活力源片 由人参茎叶总皂苷（以纯品计）２５ｇ、黄芪５０ｇ、麦 ３．１．１常规法（１ｍｌ／ｌｌ￣） 冬２４０ｇ、五味子１２０ｇ、附片５ｇ组成，益气养阴、强心益肾，适用 ３．１．１．１试验组：分别取１：１０的供试液ｌｍｌ和不大于ｌＯＯｃｆｕ的菌 于气阴两虚心肾两亏的健忘失眠、记忆力减退、冠心病、慢性肝 液ｌｍｌ注入同一平皿，平行做２个平皿，加入培养基，按相应温 炎、糖尿病及更年期综合征而见上述证候者。据文献口卅报道，黄 度和时间培养，计数平均菌落，结果为ａ。 芪、麦冬、五味子对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌有较强 的抑菌作用，对白色念珠菌也有抑制作用。在检验工作中，由于 种种原因无法索取微生物限度检查验证资料，为了工作的需要， 我们按２０１０版《中国药典》对该产品进行了微生物限度检查的 方法验证，现报道如下。 １材料 ３．１．１．２菌液组：取不大于ｌＯＯｃｆｕ菌液ｌｍｌ注入平皿，平行做２ 个平肛，加入培养基，按相应温度和时间培养，计数平均菌落，结 果为ｂ。 ３．１．１．３供试品对照组：取１：１０的供试液ｌｍｌ注入平皿，平行做２ 个平皿，加入培养基，按相应温度和时间培养，计数平均菌落数， 结果为Ｃ。 １．１供试品：活力源片（规格：Ｏ．２６ｇ，批号：１４１２０１、１４０８０１、 ３．１．１．４阴性对照组：取ｐＨ值７．０无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液 １４０４０１，西安仁仁药业有限公司），由遵义市食品药品监督管理 ｌｍｌ注入同一平皿，平行做２个平皿，加入培养基，按相应温度 局抽送。 和时间培养观察，不得有菌落生长。 １．２菌种：金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）［ＣＭＣＣ（Ｂ） ３．１．２培养基稀释法（０．５ｍｌｉｆＩＩ．） ２６ ００３］、枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１］、大 ３．１．２．１试验组：分别取１：１０的供试液０．５ｍｌ和不大于１００ｃｆｕ的 肠埃希菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］、白色念珠菌 菌液ｌｍｌ注入同一平皿，平行做４个平皿，加入培养基，按相应 （Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃｎｓ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００１］、黑曲霉菌（Ａ ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ 温度和时间培养，计数平均菌落，结果为ａ。 ｎｉｇｅｒ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００３］，均为第二代，由贵州省食品药品检验 ３．１．２．２菌液组：取不大于ｌＯ０ｃｆｕ菌液ｌｍｌ注入平皿，平行做２ 所提供。 个平皿，加入培养基，按相应温度和时间培养，计数平均菌落，结 １．３培养基与缓冲液：ｐＨ值７．０氯化钠一蛋白胨缓冲液、营养琼 果为ｂ。 脂、改良马丁琼脂、玫瑰红钠琼脂、曙红亚甲蓝琼脂、胆盐乳糖培 ３．１．２．３供试品对照组：取１：１０的供试液０．５ｍｌ注入平皿，平行 养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、ＭＵＧ培养基，由 做４个平皿，加入培养基，按相应温度和时间培养，计数平均菌 北京三药科技开发公司提供。 落，结果为Ｃ。 １．４仪器：ＤＳＸ一２８０ＫＢ３０型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医 ３．１．２．４阴性对照组：取ｐＨ值７．０无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液 疗器械厂）；电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）； ｌｍｌ注入同一平皿，平行做２个平皿，加入培养基，按相应温度 ＢＨＣ一１３００ＩＩＡ２型生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）； 和时间培养观察，不得有菌落生长。 ＧＨＰ一９１２６型电热恒温培养箱（惠科电子有限公司）；ＳＰＸ一１５０ ３．１．３计算试验组的回收率：试验组回收率％＝（ａ—Ｃ）／ｂｘｌ００％。 型生化培养箱（惠科电子有限公司）。 ３．１．４结果：常规法（１ｍｌ／］１］］．）及培养基稀释法（０．５ｍｌ／Ｉｌｌ１）的验证 ２试验准备 结果，分别见表１、表２。 ２．１菌液：按照《中国药典）２０１０年版一部附录制备。 。 表１常规法（１ｍＹｉｌｌ１）验证结果（ｎ＝３） ２．２培养基与缓冲液：取上述培养基与缓冲液，按标签配制，灭 菌、备用。 ２．３供试液制备：取供试品１０ｇ，加ｐＨ值７．０氯化钠一蛋白胨缓 冲液研磨，并稀释至１００ｍｌ，即得１：１０的供试液。 ３方法 与结果 ３．１细菌、霉菌和酵母菌计数方法的验证 苷的分离效果好，保留时间为５ｍｉｎ左右。 【３】于船，等．黄芩不同炮制品有效成分的薄层层析［Ｊ］．中国兽医杂 ３．３文献报道，黄芩苷的含量测定方法有薄层层析法目、紫外分光 志，１９８６，１２（６）：４１—４３． 光度法［４１、ＨＰＬＣ一电化学法 、ＲＰ—ＨＰＬＣ法［６３等，而用高效液相色 谱法测定，操作简便、准确，重现性好。 参考文献 【ｌ】天津市卫生局．天津市药品标准［ｓ】．天津市卫生局，１９９０：２９３． 【２】国家药典委员会．中国药典【ｓ］．一部，北京：中国科技出版社， ２０１０． ［４】陈遇英．紫外分光光度法测定辛芩口服液中黄芩苷的含量ｆＪ］． 中成药，１９９８，２０（９）：１４—１５． 【５］何心．ＨＰＬＣ一电化学法测定双黄连粉针中黄芩苷和黄芩素的 含量［Ｊ］．中国中药杂志，１９９７，２２（１０）：６０４—６０５． ［６】柳文媛，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定黄芩中黄芩素、汉黄芩素的含量 ｆＪ］．中国药科大学学报，１９９７，２８（３）：１６２—１６５．
