第52卷第年13期湖北农业科学圆园137月湖匀ubei北粤gricultural农业杂ciences科学灾燥造援2013Jul援袁圆园1352No.13年一株产黑色素海洋细菌的初步鉴定赵昌会员渊员援湖南科技学院袁湖南永州源圆缘员园园曰圆援国家海洋局第三海洋研究所袁刘斌圆袁叶德赞辕海洋生物遗传资源重点实验室圆袁福建厦门猿远员园园缘冤摘要院从波罗的海近海海水中分离出员株产黑色素的海洋细菌遥该菌株可利用麦芽糖尧蔗糖尧葡萄糖等碳源袁匀圆名为砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬杂尧灾援孕援及明胶液化试验呈阴性泽责援园怨月杂在月原怨袁并对其产生的黑色素作了初步研究袁酶触试验呈阳性袁为革兰氏阴性细菌遥袁经员远杂则阅晕粤初步鉴定后命关键词院海洋细菌曰黑色素曰鉴定曰砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬中图分类号院匝怨猿原猿文献标识码院粤文章编号院0439原愿114渊圆园13冤13原3046-03PreliminaryIdentification燥枣葬酝葬则蚤灶藻月葬糟贼藻则蚤葬孕则燥凿怎糟蚤灶早酝藻造葬灶蚤灶在匀粤韵悦澡葬灶早原澡怎蚤员渊员援匀怎灶葬灶哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠燥枣杂糟蚤藻灶糟藻葬灶凿耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早袁再燥灶早扎澡燥怎源圆缘员园园袁袁蕴陨哉匀怎澡葬灶袁月蚤灶圆袁再耘悦澡蚤灶葬曰圆援阅藻原扎葬灶圆蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣酝葬则蚤灶藻月蚤燥早藻灶藻贼蚤糟砸藻泽燥怎则糟藻泽袁杂贼葬贼藻韵糟藻葬灶蚤糟粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁载蚤葬皂藻灶栽澡藻栽澡蚤则凿猿远员园园缘袁陨灶泽贼蚤贼怎贼藻云怎躁蚤葬灶袁燥枣韵糟藻葬灶燥早则葬责澡赠悦澡蚤灶葬冤辕栽澡藻运藻赠粤遭泽贼则葬糟贼院粤皂葬则蚤灶藻遭葬糟贼藻则蚤怎皂憎葬泽蚤泽燥造葬贼藻凿枣则燥皂糟燥葬泽贼葬造憎葬贼藻则燥枣月葬造贼蚤糟杂藻葬袁憎澡蚤糟澡糟葬灶怎泽藻糟葬则遭燥灶泽燥怎则糟藻袁泽怎糟澡葬泽皂葬造贼燥泽藻袁憎澡蚤糟澡泽怎糟则燥泽藻葬灶凿早造怎糟燥泽藻援栽澡藻泽贼则葬蚤灶糟葬灶鸳贼责则燥凿怎糟藻葬泽匀砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬圆杂袁猿原匀赠凿则燥曾赠原圆原遭怎贼葬灶燥灶藻泽责援园怨月杂在月原怨葬灶凿早藻造葬贼蚤灶澡赠凿则燥造赠泽蚤泽藻曾糟藻责贼澡赠凿则燥早藻灶责藻则燥曾蚤凿藻袁憎藻则藻运藻赠憎燥则凿泽责则蚤皂葬则蚤造赠蚤泽郧则葬皂院皂葬则蚤灶藻则藻泽藻葬则糟澡藻凿援灶藻早葬贼蚤增藻葬灶凿憎葬泽蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿遭赠员远杂则阅晕粤袁葬灶凿皂藻造葬灶蚤灶责则燥凿怎糟藻凿遭赠在月原怨遭葬糟贼藻则蚤怎皂曰皂藻造葬灶蚤灶曰identification曰砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬黑色素广泛存在于自然界生物体内袁是一类离于波罗的海由蕴原多巴尧酪氨酸和半胱氨酸氧化或聚合而成的天然或合成色素咱员暂遥它是医药尧农业及化妆品行业的一员援员援圆渊耘员圆援远愿苑缘毅袁晕缘源援源圆怨愿毅冤海水遥酶等购自主要试剂和仪器栽葬噪葬则葬公司曰孕悦砸阅晕粤纯化试剂盒购自酝葬则噪藻则尧凿晕栽孕泽尧韵皂藻早葬栽葬择种生产原料遥从动植物体内提取黑色素的生产过程公司曰月蚤燥皂藻贼则藻公司孕悦砸扩增仪渊栽猿冤曰耘责责藻灶凿燥则枣公繁琐尧成本高袁而微生物所产的黑色素一般是由胞司微型台式离心机曰日本允耘韵蕴公司允耘酝原员圆猿园透内酶催化形成的氨基酸的衍生物遥产黑色素的微生射式电镜曰德国月则怎噪藻则公司栽耘晕杂韵砸圆苑型红外光物资源丰富袁生产工艺简单易行袁产品无毒害袁稳谱仪定性好遥因此研究微生物发酵产生黑色素具有很大的优势咱圆-源暂员援员援猿遥酪素培养基培养基咱远暂多袁对海洋中产黑色素的微生物报道较少遥人们对陆境产黑色素的微生物研究较遥本试验半配制袁员圆员益尧蕴月圆圆员远耘灭菌培养基均按人工海水和蒸馏水各细菌培养基尧栽赠则发酵培养基咱缘暂尧猿园皂蚤灶遥研究从波罗的海分离的一株着色菌科细菌袁该菌具员援圆有产黑色素的能力袁在生理生化特征及员远杂则阅晕粤序列等方面与砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬糟澡蚤则燥灶燥皂蚤相近袁以期为员援圆援员方法株参照文献咱苑尧愿暂海洋微生物黑色素研发提供理论依据遥员援圆援圆在月原怨生理生化指标的测定进行生理生化实验测定遥对菌员材料与方法蕴月观察菌体形态并拍照培养基形态特征观察及发酵袁圆源益培养将菌株在月原怨接种于员援员员援员援员材料菌种来源菌株在月原怨由本实验室的刘斌分圆源员援员援猿益活化遥圆将菌株涂布于凿袁利用显微镜及透射电镜圆圆员远耘平板袁的源种液体培养基中圆凿袁转接试管培养袁圆源圆益袁员缘园凿袁再将菌液接种于则辕皂蚤灶摇瓶培收稿日期院圆园员圆原园苑原圆源基金项目院国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室开放研究基金项目渊匀再圆园员园园缘冤曰湖南科技学院校级青年课题作者简介院赵昌会渊员怨愿园原冤袁男袁陕西洛南人袁讲师袁主要从事微生物生理生化研究袁渊电话冤员缘缘愿员猿苑圆愿圆圆渊电子信箱冤扎糟澡怎蚤员员圆岳员远猿援糟燥皂遥.com.cn. All Rights Reserved.第13期赵昌会等院一株产黑色素海洋细菌的初步鉴定3047养至菌液呈黑色员援圆援猿提取参照文献员远杂则阅晕粤遥圆苑云袁员源怨圆砸曰孕悦砸咱怨暂序列分析的方法遥细菌基因组阅晕粤的缘远产物经益源园反应条件院怨缘孕悦砸益扩增的通用引物缘皂蚤灶袁怨源益源园s袁院员豫s袁苑圆的琼脂糖凝胶电泳检测益圆皂蚤灶袁猿园个循环曰苑圆袁试剂盒纯化后益员园皂蚤灶遥孕悦砸袁送交上海博亚生物技术有限公司完成序列测定遥所测得的序列提交至郧藻灶月葬灶噪袁获得登录号袁并与数据库月蕴粤杂栽耘扎栽葬曾燥灶杂藻则增藻则列作为参比对象比对分析袁袁选取同源性较高的灾藻则泽蚤燥灶圆援员中已有序列进行运用阅晕粤酝粤晕进行多重序列分员远杂则阅晕粤序析袁通过酝耘郧粤源援园软件袁采用邻接法构建系统进化树员援圆援源咱员园暂遥法提取黑色素黑色素的提取与鉴定曰取少量提取的黑色素纯品参照文献咱员员尧员圆暂袁用溴化方钾压片法测其红外吸收光谱遥圆结果与分析圆援员菌株的生理生化特征挑新鲜菌落于猿豫的运韵匀中出现拉丝现象袁为革兰氏阴性菌袁匀酶触试验呈阳性圆袁杂尧灾援铜离子孕援渊园援员及明胶液化试验呈阴性早辕蕴冤会抑制其生长袁遥对麦芽糖尧蔗糖及纤维二糖利用较好袁不能利用淀粉尧柠檬酸渊表员冤遥菌株在酪氨酸培养基上适宜生长温度为源耀源园益遥菌落较小袁湿润尧光滑尧圆形突起尧边缘整齐袁菌体之间粘连成团袁易挑取整个菌落袁呈黑色渊起初白色袁产黑色素后呈黑色袁图员冤遥图员菌株在月原怨的纯化培养圆援圆菌株的形态及发酵特性菌体宽园援愿耀员援源滋皂袁长园援愿耀圆援源滋皂袁电镜下菌体周围有分泌物袁单端鞭毛渊图圆冤遥菌株在源种液体培养基中均产生黑色素袁其中较好的是栽赠则发酵培养基遥圆援猿菌株的鉴定结果郧藻灶月葬灶噪该菌株的员远杂则阅晕粤序列长度耘扎栽葬曾燥灶登录号为杂藻则增藻则灾藻则泽蚤燥灶匀酝缘远远园员源遥为员猿缘愿遭责袁圆援员相关序列进行将该序列与数据库月蕴粤杂栽图圆菌株在月原怨的细胞形态分析袁选取同源性高的怨株菌的员远杂则阅晕粤序列构建系统发育树袁如图猿所示袁该菌株与砸援糟澡蚤则燥灶燥皂蚤处于进化树的同一分支的同源性袁同源性怨怨援愿缘猿豫袁与砸援责葬糟蚤枣蚤糟葬其他生理生化及形态特征差别不大怨苑援园猿缘豫遥除产黑色素同砸援糟澡蚤鄄则燥灶燥皂蚤有别外袁遥图猿菌株在月原怨的系统发育树圆援源黑色素的鉴定结果员员远源园红外光谱分析表明远园园糟皂袁样品在猿猿园园耀猿源园园糟皂原员糟皂原员附近有强吸收峰袁在员猿愿圆糟皂原员尧原员尧圆怨园园糟皂原员附近有弱吸收峰曰员圆猿愿尧员源缘园耀糟皂原员附近有中强吸收峰渊图源冤遥据文献报道猿猿园园糟皂原员处员的远源猿吸收糟皂峰是因为-韵匀尧-晕匀原员处吸收峰主要是悦=悦尧-悦韵韵-尧悦=韵圆的伸展振动引起袁伸展振动引起袁与文献咱员猿暂的红外光谱图相似袁说明其主要功能团基本一致遥80706050403035003000250000015001000图源菌株在月原怨cm-12黑色素红外光谱图.com.cn. All Rights Reserved.3048湖北农业科学2013年猿讨论的基础上怨与砸援糟澡蚤则燥灶燥皂蚤袁结合员远杂则阅晕粤序列分析结果袁菌株在月原咱员源暂比较相似袁而与砸援责葬糟蚤fi糟葬差别在菌株的培养特征尧生理生化特征和细胞特征很大渊表员冤遥暂命名为砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬泽责援园怨月杂在月原怨遥表1菌株ZB-9和相关菌株的表型特性特征鞭毛ZB-9R.chironomi咱员源暂R.pacifica咱员缘暂R.soli咱员远暂R.tangshanensis咱员苑暂端生端生单根曰端生或侧生端生单根曰端生或侧生产色素黑色素无无无无阿拉伯糖柠檬酸ND---+-++麦芽糖葡萄糖+++--++-+蔗糖赖氨酸++W++甘油+-+N++D-+-+N淀粉果糖-NN+NN+海藻糖+N++纤维二糖+N++N-++产H2S实验-NN-NNN+注弱阳性N-院+院阳性曰W院曰-院阴性曰N院未测定.该研究首次发现色菌科细菌可产黑色素袁在酪氨酸存在的条件下黑色素产量较好遥黑色素越来越咱怨暂吴志红皂藻灶贼葬造法咱允暂援菌物系统袁酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁员怨愿圆袁源源渊源冤院怨怨圆-怨怨猿援汪天虹袁圆园园员袁圆园渊源冤院缘苑缘-缘苑苑援袁黄伟袁等援简单易行的丝状真菌阅晕粤提取受到人们的青睐袁与从动植物中提取的方式相比袁利用微生物发酵生产黑色素具有快速尧简便尧易提咱员园暂徐食品科学磊袁王长海袁圆园园远袁圆苑渊愿冤院员圆圆-员圆缘援援短梗霉黑色素的提取及其理化性质的研究咱允暂援取等特点袁且细菌尧放线菌产生的黑色素可分泌到胞外袁无需破碎细胞袁便于提取遥下一步将对在月原怨咱员员暂栽粤酝哉砸粤产黑色素的发酵条件做细化研究藻增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠运袁袁为其开发应用打咱员圆暂酝燥造藻糟怎造葬则郑晨娜月蚤燥造燥早赠早藻灶藻贼蚤糟泽阅哉阅蕴耘再葬灶凿葬灶葬造赠泽蚤泽允袁晕耘陨酝袁藻贼葬造援酝耘郧粤源院酝燥造藻糟怎造葬则耘增燥造怎贼蚤燥灶袁圆园园苑袁圆源渊愿冤院员缘怨远-员缘怨怨援渊酝耘郧粤冤泽燥枣贼憎葬则藻增藻则泽蚤燥灶源援园咱允暂援下基础遥参考文献院及理化性质袁方柏山咱允暂援袁华侨大学学报罗菊香袁等援链霉菌袁圆园园怨袁猿园渊猿冤院圆怨圆-圆怨远援郧原匀阅原源产黑色素的提取咱员暂咱员猿暂倪丽娜泽贼怎凿赠粤哉月砸再粤云援粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽燥枣圆园园源袁猿员渊员冤院缘缘-缘怨援援一株高产黑色素细菌的分离及鉴定咱允暂援微生物学通报袁悦澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠燥枣凿则怎早原皂藻造葬灶蚤灶葬枣枣蚤灶蚤贼赠糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠贼燥贼澡藻月袁圆园园圆袁苑远愿渊员冤院远苑-苑源援遭蚤灶凿蚤灶早蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽咱允暂援允燥怎则灶葬造燥枣咱员源暂咱圆暂皂藻造葬灶蚤糟粤郧韵阅陨责蚤早皂藻灶贼粤袁杂栽耘云粤晕蚤糟澡蚤则燥灶燥皂蚤匀粤蕴孕耘砸晕泽责援酝袁灶燥增援袁杂耘晕阅耘砸韵灾陨悦匀蚤泽燥造葬贼藻凿枣则燥皂再袁葬杂晕陨砸糟澡蚤则燥灶燥皂蚤凿杂援砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬渊阅蚤责贼藻则葬曰燥枣孕则燥贼藻怎泽杂袁皂蚤则葬遭蚤造蚤泽悦韵砸杂粤砸韵咱允暂援悦袁砸藻泽藻葬则糟澡藻贼葬造援杂贼怎凿赠蚤灶燥枣葬悦澡蚤则燥灶燥皂蚤凿葬藻冤蚤糟葬灶凿耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠藻早早皂葬泽泽咱允暂援酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园园苑袁缘苑渊愿冤院员愿苑圆-员愿苑缘援陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造允燥怎则灶葬造燥枣杂赠泽贼藻皂葬贼鄄咱猿暂燥造燥早赠袁员怨怨远袁员源苑渊猿冤院员远苑-员苑源援酝蚤糟则燥遭蚤鄄酝粤悦运陨晕栽韵杂匀咱员缘暂砸韵酝粤晕耘晕运韵蕴粤袁哉悦匀陨晕韵酝袁云粤蕴杂耘晕耘袁藻贼葬造援砸澡藻蚤灶鄄皂藻造葬灶燥泽燥皂藻泽允粤援皂藻造葬灶蚤灶栽澡藻葬灶贼蚤皂蚤糟则燥遭蚤葬造葬灶凿贼澡藻藻增燥造怎贼蚤燥灶责则燥责藻则贼蚤藻泽燥枣燥枣遭造葬糟噪皂藻造葬灶燥糟赠贼藻泽袁允燥怎则灶葬造晕韵杂粤晕悦匀哉运燥枣贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造葬灶凿允阅袁遭蚤燥造燥早赠袁圆园园员袁圆员员渊圆冤院员园员-员员猿援泽噪蚤灶咱允暂援澡藻蚤皂藻则葬责葬糟蚤fi糟葬泽责援灶燥增援袁葬灶燥增藻造澡葬造燥贼燥造藻则葬灶贼遭葬糟贼藻则蚤怎皂蚤泽燥鄄造葬贼藻凿枣则燥皂凿藻藻责泽藻葬憎葬贼藻则燥枣贼澡藻孕葬糟蚤fi糟咱允暂援咱源暂悦粤杂粤阅耘灾粤蕴蕴粤援栽澡藻糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣允燥怎则灶葬造燥枣杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟葬灶凿耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园园猿袁陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造缘猿渊远冤院员怨苑猿-员怨苑苑援咱缘暂缘渊源冤院圆园猿-圆圆猿援皂藻造葬灶蚤灶贼燥皂蚤糟则燥遭蚤葬造责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援悦藻造造怎造葬则酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园园猿袁咱员远暂砸再哉杂匀袁悦匀哉晕郧月杂袁李建波欣袁曲音波援产胞外黑色素菌株的筛选咱允暂援微生物泽责援学通报袁袁圆园园源袁猿员渊员冤院缘园-缘源援宋陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造灶燥增援袁葬早葬皂皂葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂孕粤砸运酝袁藻贼葬造援砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬泽燥造蚤允燥怎则灶葬造蚤泽燥造葬贼藻凿枣则燥皂泽燥蚤造蚤灶运燥则藻葬咱允暂援咱远暂王戈林酵条件研究袁宁咱允暂援华袁中国医药工业杂志沈萍袁等援酪氨酸酶基因工程菌产黑色素的发燥造燥早赠袁圆园园愿袁缘愿渊员园冤院圆圆苑员原圆圆苑源援燥枣杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟葬灶凿耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠酝蚤糟则燥遭蚤鄄袁员怨怨怨袁猿园渊源冤院员缘园-员缘源援咱员苑暂在匀粤晕郧泽蚤泽泽责援灶燥增援袁载袁杂哉晕葬则蚤糟藻蕴袁则燥燥贼原葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿匝陨哉云袁藻贼葬造援遭葬糟贼藻则蚤怎皂咱允暂援砸澡藻蚤灶澡藻蚤皂藻则葬陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造贼葬灶早泽澡葬灶藻灶鄄咱苑暂咱愿暂赵月哉悦运斌袁允何绍江阅援晕燥灶泽贼葬蚤灶蚤灶早援微生物学实验咱酝暂援北京院科学出版社袁圆园园源援允燥怎则灶葬造早则葬皂则藻葬糟贼蚤燥灶泽燥枣皂葬则蚤灶藻遭葬糟贼藻则蚤葬渊运韵匀冤咱允暂援皂藻贼澡燥凿粤责责造蚤藻凿枣燥则凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶葬灶凿耘灶增蚤则燥灶鄄燥枣缘愿渊员园冤院圆源圆园原圆源圆源援燥枣杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟葬灶凿耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园园愿袁渊责任编辑龚艳冤.com.cn. 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