・检验与临床・ ２０１０年１２月第４８卷第３６期 应用ＥＰ７－Ａ２评价脱氢酶法测定乙醇浓度 周方满 赵笔辉 吴建平 千吴英 贺玲 （１．宁波市北仑 人民医院检验科，浙江宁波３１５８００；２．浙江大学医学院附属第一医院，浙江杭州３１０００３） 【摘要】目的评价乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）测定血液乙醇浓度抗溶血、抗黄疸、抗脂浊能力。方法根据美国临床实验室标准化协 会（ＣＬＳＩ）标准文件ＥＰ７一Ａ２的要求，采用“配对差异”试验的方法测定对照组与加入血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物后 乙醇浓度。结果血红蛋白≤５ｇ厂｜ 、肌红素≤３４２ ｍｏｌ／ｌ 对乙醇浓度测定结果无影响，甘油三酯３７ｍｍｏｌ／Ｌ时对结果存在正干 扰。结论溶血、黄疸对乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）测定血液乙醇浓度无干扰，高度脂浊标木对结果有影响。 ［关键词】干扰试验；ＥＰ７一Ａ２；乙醇；酶法 【中图分类号】Ｒ４４６ 【文献标识码］Ａ ［文章编号】１６７３—９７０１（２０１０）３６—９２—０２ 乙醇是酒的主要成份，一次过量饮酒可引起神经系统抑制， ２ ３应用 共济失调、昏迷，甚至呼吸、循环麻痹危及生命，长期酗酒叮导致 心血管、消化、肝脏等疾病，严匪危害人ｆｆ】身体健康；汹后驾驶员 动作失常、判断能力下降，诱发交通事故。我院检验科承担北仑 参照仪器和试剂说明书进行，主要测量参数：速率法，标本 １０ Ｔ ，试剂ｌ １２５ Ｌ，试剂１Ｉ １２５ Ｌ，主波长３４０ｎｍ，副波长 ７００ｎｍ，第一测量点１ ５，第一测量点２２。按交互顺序分析测试（Ｔ） 样本和对照（Ｃ）样本（Ｃ１Ｔ１．Ｃ２Ｔ２．Ｃ３Ｔ３……．ＣｎＴｎ）。 ２．４数椐处理 地区酒后驾车认定的检测任务，乙醇浓度检测不 于一般 人 的检验，被检测者多是餐后被强制柃查，餐后血液脂浊等可能会 干扰检验引起检测结果的差异，评价其ｆ扰物质对测定的影响 具有现实的意义。作者试用美国ＣｋＳｌ（临床实验室标准化研究 应用Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｅｘｃｅｌ软件进行数椐处理。 ２．５判断 所）２００５年发布的ＥＰ７一Ａ２文件【ｌＪ对酶法测定乙醇的干扰性进行 分析，现报告如下。 如果点竹汁值ｄｏｂｓ小于或等于ｄｃ值（ｃｕｔ—ｏｆｆ值），可以得出 某种物质引起的偏倚小于ｄｍａｘ；否则，接受检验假设，说明由该 物质引起十扰的似没成立。 １ 材料 １．１ 标本来源 ２．６剂量效应曲线 对判断为干扰的干扰物进一步测定其剂量效应曲线。 北仑区交警大队送来的疑似酒驾、醉酒驾车的驾驶员，基础血 清为本院体检中心体检结果健康者空腹１２ｈ后采集的混合血清。 １．２仪器 ３结果 ３．１ 血红蛋白、胆红素、甘油三酯对乙醇浓度测定的干扰 日本Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ６４０生化分析仪。 １．３ 试剂 表１结果显 ，血红蛋白≤５ｇ门Ｌ、胆红素≤３４２ ｍｏｌ／Ｌ对乙 醇浓度测定结果无影响，甘油三酯３７ｍｍｏｌ／Ｌ时对结果有正干扰。 表１血红蛋白、胆红素、甘油三酯对酒精浓度测定的干扰 德国罗氏诊断有限公司（批号为６１７ ７２８—０１）及标准液（批 号为１５３３８５） １．４干扰物贮存液 扰物 脏红蛋白 胆红素 甘油三酯 对照 均值 ＳＤ 测定 １０５．０ ０ ７６ 对照 １ ０３．８ ０．９３ 测定 １ ０５．０ １．９９ 对照 ９５．４ ０．７３ 测定 １０２ ８ ０．３７ 血红蛋白溶液，胆红素溶液，甘油三酯溶液。 １０４．１ ０．３６ ０ ８７ １ ２２ ２方法 ２．１原理 Ｉ）０ｈｓ Ｄｃ １．２０ １．２２ ７．４０ １．２２ 乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）催化乙醇氧化成为乙醛， 时将氧化型 辅酶Ｉ（ＮＡＤ＋）还原为还原型辅酶Ｉ（ＮＡＤＨｊ，在３４０ｒｉｍ波长处检 测ＮＡＤＨ的变化，对照标准计算乙醇的浓度。 ２．２抗干扰性分析 判断 无ｆ：扰 无ｒ扰 干扰 ３．２甘油三酯对乙醇测定干扰影响的剂量效应曲线 将甘油二酯３７ｒａｍｏＩ／Ｌ稀释成不同浓度加入到乙醇浓度 １００ｍｇ／ａＩ 血清中与不加甘油三酯的对照管同时测定，结果见表 ２，图１。 根椐美国临床实验室标准化研究所（ＣＬＳＩ）制定的临床化学 干扰试验应用指南第二版（ＥＰ７一Ａ文件）的要求对脱氢酶法测定 的乙醇浓度进行抗干扰性分析，根椐附录Ｂ确定分析物乙醇的 合适浓度为１００ｍｇ／ｄＬ，根椐附录Ｃ、附录Ｄ确定十扰物的浓度 ４讨论 中国是酒的故乡，儿仃悠久的酒文化。改革开放以来，我国 （血红蛋白溶液５＃Ｌ，胆红素溶液３４２ ｍｏｌ／Ｌ，甘油三酯溶液 ３７ｍｍｏｌ／Ｌ），确定重复测定的次数。 ９２中国现代医生ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ 的经济快速增长，人仃Ｊ生活水平提高，嗜酒者不断增多，１９８２年 我国成人人群中所占比例仅为０．２１％，２０００年浙江地区酒精性 ２０１０年１２月第４８卷第３６ 一．【 、 占 ５ ４ ０ ２ ｌ ０ Ｏ Ｏ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ・检验与临床・ ０ ０ 表２不同浓度甘油三酯对乙醇测定干扰影响 直接血清法测定结果，尽管在分析中可以采取双波长、双试剂、 设置样本空白等方法来抵消脂浊的影响，但无法彻底消除其干 扰，与张红霞ｐ吸胡云良 等报告的结论有差异，可能与选择的干 扰物浓度有关，本研究采用的是Ｅｆｙ７一Ａ２推荐的甘油三酯作为干 扰物的合适浓度是３７ｍｍｏｌｌＬ。 乙醇浓度也可通过呼气、尿液、唾液等标本无创的方法来测 定，但易受多种外界条件及受测者生理因素影响，结果不如血液检 测准确。血液检测的方法有均相免疫法、偏振免疫法、散射能量衰 减法、化学传感器法、色谱法、速率法、干化学法、酶电极法等 ，但 一般实验室最常用的仪器是生化分析仪，应用生化分析仪来测定 乙醇浓度，无需增添仪器，操作方便。德国罗氏诊断有限公司生产 蠢 盆 錾 赫 １ ０ １ ０ ０ １ ９ ０ ２８ ０ ３ ０ 的乙醇脱氢酶法试剂具有重复性好、可检测范围宽、成本低等优 点，基本上能满足临床需要，适合常规检查；但对高度脂浊标本建 议同时检测甘油三酯浓度并根椐剂量效应曲线进行校正。 【参考文献】 ［１］黄瑞勋，黄慧萍．应用ＥＰＩＯ Ａ文件对乙醇测定方法的初步评价［Ｊｊ． 齐鲁医学检验，２００５，１６（５）：１６－１７． 【２］厉有名．中国酒精性肝病研究现状【Ｊ１．现代消化及介入诊疗， ２００７，１２（４）：２３５－２３６． 甘油三酪辞｛度（ｍｍｏｌ／Ｌ） 图１ 甘油三酯对乙醇测定干扰影响的剂量效应曲线 肝病流行病学调查显示，嗜酒者占受调查人群的１４．８％。人群酒 精性肝病患病率为４．３４％，其中酒精性肝硬化占１６％，酒精性肝 炎占３４％，酒精性脂肪肝占２２％，轻症酒精性肝损伤占２８％口。 干扰物质可分为内源性（标本中存在的）和外源性（外界污 染的）两类，干扰试验方法有“配对差异”试验和采用病人标本的 实验方法，本资料参照ＣＬＳＩ ＥＰ７一Ａ２文件设计的“配对差异”试 ［３］张红霞，杨芒壮．酶法在血液酒精浓度检测中的应用 （医学分册），２００７，２（２）：４８ 健康大视野 ｆ４］胡云良，王慧燕，张立，等．改良乙醇脱氢酶法测定血清中微量乙醇【ＪＪ． 中华卫生检验杂志，２００８，１８（１）：１０６． ［５］李世杰，郑雯，冯其光．血液中乙醇浓度检测方法［Ｊｌ＿预防医学情报 杂志，２００７，２３（１）：１２４—１２６． 验方法…，即将不同浓度的十扰物加入到实验标本中，然后分别 测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物 浓度与乙醇测定偏差程度的关系。本实验显示，血红蛋白≤５ｇ／Ｉ 、 ［６］李琼，谢国明，徐华建，等．血乙醇浓度分析方法及其评价［Ｊ１．分析仪 器，２００５，３５（３）：５７—５９． 胆红素≤３４２ ｍｏｌ／Ｌ对乙醇浓度测定结果无影响，甘油三酯 ３７ｍｍｏｌ／Ｌ时对结果存在正干扰。鉴于目前自动生化分析仪采用 （上接第４０页） ２．３不良反应 （收稿日期：２０１０－０８—１３） 还有抗炎作用，可降低Ｍｓ患者的血清ｃ一反应蛋白，减少２型糖 尿病患者的动脉粥样硬化风险 。同时还有降低血脂及抑制食 欲、减轻体重的作』｝＋ｊ，故它对Ｍｓ的血脂改善是多方位的。 在冶疗过程巾有６例出现不同程度的胃肠道反应，均为轻 度和暂时性。有２例出现轻度血清Ａ 升高，予以适当保肝降酶 口服治疗后，恢复正常。ＴＢ、ＢＵＮ、Ｃｒ均无 著变化。 综上分析显示，阿托伐他汀联合二甲双胍治疗Ｍｓ加强了降 血脂作用，并提示随着治疗时间的延长，治疗效果则越显著，且 安全性高。 【参考文献】 ［１］邹大进．超重和肥胖一代谢综合征的主要原因ｆＪ］．国外医学：内分泌 学分册，２００３，２５（３）：１４５． ３讨论 代谢综合征（Ｍｓ）发病机制迄今仍未明确，但有研究表明内 脏脂对胰岛素敏感性降低，过多的流离脂肪酸（ＦＦＡ）进入胰岛 素，敏感细胞异位沉积，超过细胞的氧化能力，被再脂化为ＴＧ， 大量堆积于这些细胞，导致胰岛素功能障碍日。阿托伐他汀除肯 定的降血脂作用外，还具有不依赖于胆固醇降低非调脂性抗动 脉硬化的机制，如改善内皮功能、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁 移、抗炎症反应、促进斑块稳定、抑制血小板聚集等，可显著降低 冠心病发病、脑卒中和心血管事件以及总死亡率 。 而二甲双胍在临床上多作为降糖药物用于治疗２型糖尿 病。近来有研究表明，它的耙分子是ＡＭＰ激活的蛋白激酶 （ＡＭＰＫ），通过ＡＭＰＫ的介导，二甲双胍可诱导脂肪的氧化及减 少脂肪的合成，增加周围组织对葡萄糖的吸收作用，同时抑制肝 糖异生和肝糖输出，改善胰岛素敏感性和糖代谢；另外二甲双胍 ［２］中国成人血脂异常防治指南制订联合委员会．中国成人血脂异常防 治指南ＩＪＪ．中华心血管病杂志，２００７，３５（５）：３９０—４１９． ［３］祝之明．代谢综合征的诊断和治疗ＩＪＪ．中华心血管病杂志，２００４，３２ （１２）：１６３． ［４］高润霖．汀类药物在急性冠状动脉综合征的应用『ＪＪ．中华心血管病 杂志，２００３，３１（８）：６３５． ［５］肖新华．胰岛素抵抗的病理牛理机制和治疗选择［Ｊ１．国外医学：内分 泌分册，２００５，２５（３）：１７９． （收稿日期：２０１０—０８—３０） ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ中国现代医生９３
