2010年第12期
中国食物与营养Food and Nutrition in China
No.12，2010
高效液相色谱—质谱法测定对虾组织中
*
磺胺类药物残留
张立坚1，肖 英2，蔡 春1
（1广东医学院分析中心，湛江 524023；2湛江巨恒水产食品有限公司，湛江 524001）
摘要：利用高效液相色谱-质谱联用技术,建立了对虾组织中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉残留的分析方法。样品加入无水硫酸钠和乙腈后,进行匀质和提取, 再用乙腈饱和的正己烷脱脂净化。通过优化色谱条件，以选择离子方式进行定量。选择离子分别为m/z 300.9, 280.8, 278.8, 250.8。磺胺检测的线性范围是0.05～0.50mg/Kg，检测限为5μg /Kg，回收率为74.2～99.8％，RSD小于6.1％。
关键词：磺胺；对虾；药物残留；高效液相色谱-质谱磺胺类药物是应用最早的一类人工合成抗菌药物, 具有抗菌谱广、疗效强、方便安全等优点, 作为预防与治疗用药广泛地用于食用动物中，在对虾养殖中应用非常广泛。 但是磺胺类药物能够产生过敏和造血紊乱等副作用，临床应用逐渐减少，而作为兽药和饲料添加剂却一直在应用。目前中国、欧盟、美国、日本等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中使用的药物,其最大残余限量一般为50～100μg/ kg，其中日本对磺胺二甲嘧啶的最大残余限量要求小于10μg/ kg [1]。我国现有磺胺类药物残留的液相色谱分析法（SN 0208 – 93）[2]的行业标准，以及运用液相色谱/串级质谱检测的研究方法报道[3-6]。未见液相色谱单级质谱仪分析动物组织中磺胺类药物的残留检测。
本研究针对对虾输入国家对磺胺类药物残留的要求,采用高效液相色谱—质谱法（HPLC/MS），建立了检测对虾中4种磺胺类药物（磺胺嘧啶SD、磺胺二甲嘧啶SDM、磺胺甲氧嘧啶SMM、磺胺喹恶啉SQX）残留的方法。本方法通过乙腈提取和简单的液-液萃取、净化, 很好地实现了残留药物的提取与净化，样品基质干扰小。试验结果表明，液体上色谱单级质谱较好解决了液相色谱分析灵敏度不高的问题，在缺乏昂贵的液相色谱串级质谱的条件下，可以很好满足对虾中磺胺类药物残留量检测的要求，适合大批量样品的快速测定。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂
液相色谱-质谱联用仪：Waters1525液相色谱仪；Waters2487紫外检测器；MicromassZQ4000质谱检测器；MasslynxTM3.5质谱管理系统，美国Waters公司。旋转蒸发器：RE52-99,上海亚荣生化仪器厂。
磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉对照品，Sigma公司；乙腈、乙酸：色谱纯，MERCK公司；其他试剂均为分析纯。1.2 标准溶液的配制
精密称取磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉标准品各10mg，用乙腈配成约200μg/ml对照品储备液；储备液混合后再用乙腈稀释成混合标准溶液。该混合标准溶液含每种磺胺分别为0.05，0.125，0.25，0.50μg/ml。1.3 样品的提取与净化
称取5.00g均匀试样，加入0.5ml10％硫酸钠水溶液和4.4ml乙腈-氯仿混合溶剂（10+1），匀浆，离心3min（3 500r/min）。用乙腈-氯仿混合溶剂两次提取，将上清液合并，＜40℃氮气吹干。向残渣添加1ml2％硫酸钠水溶液和2ml正已烷，混合使残渣溶解。离心3min。提取水相加入3ml乙腈-氯仿混合溶剂，混合，离心3min。将下层有机相＜40℃氮气吹干。用乙腈
* 基金项目：广东省科技计划项目（2009B020316005）。
作者简介：张立坚（1968～ ），女，副教授，主要从事出药物分析研究。
46中国食物与营养
-0.1％甲酸（1∶4）溶解残渣，并准确定容至1ml。离心5min（16 000r/min）。上清液进液相色谱质谱分析。1.4 分析条件
色谱条件： Waters SunfireTMC18色谱柱（150mm×2.1mm，3.5µm）； 柱温：30℃；流动相：乙腈（A）、0.1％甲酸（B），流速0.2ml/min；进样量：20µl。梯度洗脱程序：0min（A:B=20:80）；5min（50:50）；10min（50:50）； 20min（20:80）。
质谱条件： 电离方式：电喷雾电离源（ESI+）；离子源温度：140℃；脱溶剂温度：280℃；毛细管电压：3.50KV；锥孔电压：36V；气体流速：300L/h；萃取锥孔电压：5V；选择离子监测（SIR）质荷比m/z 300.9，280.8，278.8，250.8。
谱。按保留时间依次是磺胺嘧啶（SD，3.36min）、磺胺二甲嘧啶（SDM，4.32min）、磺胺甲氧嘧啶（SMM，5.22min）、磺胺喹恶啉（SQX，6.92min）
附图 空白样品加入四种标准品的SIR色谱图
2 结果与分析
2.1 色谱图
将标准溶液作质谱全扫描图，根据质谱图选择m/z 300.9，280.8，278.8,250.8为特征离子，再进行选择离子监测。附图是空白样品加入4种标准品的选择离子色
2.2 标准曲线和回归方程
将混合标准溶液依次从低浓度到高浓度进样20µl，按上述色谱质谱条件进行分析，得到[M+H]+的峰面积和保留时间。取峰面积和标准液浓度绘制校准曲线，并计算回归方程和相关系数（表1）。
表1 4种磺胺药物标准工作曲线和线性范围
化合物名称
SDDSDMSMMSQX
回归方程6302.13x＋19447.52795.95x＋11113.83440.52x＋15133.38206.61x＋19565.9
相关系数0.9987970.9982460.9974210.996942
线性范围（mg/L）
0.05～0.500.05～0.500.05～0.500.05～0.50
2.3 方法回收率的测定
取空白虾肉分别加入混标液配制成浓度为0.05、
0.125、0.25mg/ml的样品，按照上述提取和净化步骤处理，取20µl进样，计算回收率（表2）。
表2 对虾中4种磺胺药物的回收率（n=3）
化合物名称
SD已知量
（μg/L）
50100200501002005010020050100200
测得量平均值（μg/L）
48.493.9149.6.691.1148.448.090.7168.449.993.9148.6
回收率平均值（％）
96.3.974.3.291.174.296.090.784.299.3.974.3
RSD（％）9.55.77.68.05.26.07.67.15.310.811..1
SDM
SMM
SQX
2.4 检出限
在5.00g空白对虾样品中加入不同量的4种磺胺标
准溶液，按1.3方法操作，以信噪比均大于3计算检出限，结果磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉的检出限为5μg/kg。
张立坚等：对虾组织中磺胺类药物残留的HPLC/MS测定47
3 讨论
本试验建立了HPLC/MS检测对虾中4种磺胺类药物残留的方法，样品前处理简单快捷，干扰少。采用MS定性、定量，检测限达5μg/kg，方法可靠。该方法可用于对虾中4种磺胺类药物残留的监测。◇
［3］王曼霞，林黎明，刘心同，等. 高效液相色谱法测定
动物组织中8种磺胺类药物残留量.化学分析计量，2004，13（2）:14～16.
［4］郭根和，潘葳，苏德森，等. 高效液相谱法测定对虾
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参考文献
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连海事出版社，2001：1309.
［2］SN 0208 - 93. 出口肉中十种磺胺残留量测定方法. 液相
色谱法.
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时测定家禽组织中16种磺胺残留. 分析化学，2005，33: 1252-1256.
Determination of Sulfonamides in Prawn Tissues by HPLC-MS
ZHANG Li-jian1，XIAO Yin2，CAI Chun1
(1Analysis Center, Guangdong Medical College, Zhangjiang 524023;
2
Forever Marrine Products corporation, Zhangjiang 524001)
Abstract: A new method was established for determining sulponamides residues in prawn includes sulfadiazine（SD），sulfadimidine（SDM），sulfamonomethoxine（SMM） and sulfaquinoxaline（SQX）. After being homogenized with sodium sulfate，the sample was extracted and cleaned by acetonitrile and hexane，and determined by high performance liquid chromatography mass spectrometry method. The conditions of HPLC-MS were optimized，and the selected ions were m/z 300.9，280.8，278.8，250.8. The liner range of the determination sulfonamide was 0.005～0.50mg/L，the recovery range was 74.2～99.8％，the detection limit was 5μg /Kg and the RSD was less than 6.1％.
Keywords：Sulponamide；Prawn；Drug Residue；HPLC-MS
