现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．４ 婴幼儿奶粉中维生素Ｂ１的检测方法研究 吴轶’，孙凯峰 ，袁波’，陈欣钦 （１．上海市食品研究所，上海２００２３５）（２．上海市质量监督检测技术研究院，上海２００２３３） 摘要：本文建立了一种快速测定婴幼儿奶粉中维生素Ｂ１的高效液相色谱检测方法。该方法使用Ｃ１８色谱柱分离维生素Ｂｌ，以 离子对流动相改善色谱分离度和峰形，流速为１ ｍＬ／ｍｉｎ，在紫外检测器２４２ Ｂｉｎ处检测。实验表明该方法可以达到以下指标：相关系 数ｒ＞０．９９９０，精密度＜３％，加标回收率７９％一８５％，满足要求。 关键词：维生素Ｂ１；高效液相色谱法；婴幼儿奶粉；快速测定 文章篇号：１６７３．９０７８（２０１０）４－４２１４－２２ ＤｅｔｅｒｍｉＤｅｔｅｒ ｎａｔｉ０ ｎ ｏｔ “Ｖｉｖｉｔａｍｉｎ Ｂ１１ ｉ Ｉｎｆａｎｔ …’Ｐｏｗｄｅｒ ｌ ｎ ｌｎｌａｎｔ Ｍｉｌｋ Ｏ ｂｙ～ＨＩ＂Ｌ一Ｃ ＷＵ Ｙｉ ，ＳＵＮ Ｋａｉ－ｆｅｎｇ‘，ＹＵＡＮ Ｂｏ ，ＣＨＥＮ Ｘｉｎ—ｑｉｎ （１．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３５ Ｃｈｉｎａ） （２．Ｓｈａｎｇｈａｉ ｎＩｓｔｉｕｔｔｅ ｏｆＱｕａｌｉｔｙ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３３．Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＶｉｔａｍｉｎＢ１ｉｎｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．ＡｆｔｅｒｐｒｏｔｅｉｎｐｒｅｃｉｐｉｔａｆｉｏｎｂｙＩｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＣＡ），ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｏｎＣ１８ ｃｏｌｕｍｎｕｓｉｎｇａｎｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ （ｐＨ４．４）ｃｏｎｍｉｎｉｎｇ ｉｏｎ－ｐａｉｒ ｒｅａｇｅｎｔ ｄｉ ａｔ ２４２ ｎｌＴ１．Ｔｈｅ ＲＳＤ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆｔｈｅ ｍｅｈｔｏｄ ｗｅｒｅ ＞０．９９９０，＜３％ａｎｄ ７９％－８５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｔｈｉａｍｉｎｅ，ＨＰＬＣ，ｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ，ｒａｐｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ＶＢ 是婴幼儿喂养阶段配方奶粉必须添加的营养 级，瑞士ｓｉｇｍａ公司）、 二辛基丁二酸磺酸钠（Ｄｉｏｃｔｙｌ— 成份之一，测定配方奶粉中ＶＢ１含量相当重要。目前， ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎａｔｅ Ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ（ＤＯＯＳ），分析纯。瑞士ｓｉｇｍａ 我国的国家法定方法中对婴幼儿奶粉中测定ＶＢ１的方 公司）、氢氧化钾（分析纯，上海国药化学试剂有限公 法有ＧＢ／Ｔ ５４１３．１１—１９９７《婴幼儿配方食品及乳粉中 司）、三氯乙酸（分析纯，上海国药化学试剂有限公司）、 维生素Ｂ１的测定》，在该方法中采用两个检测方法， 氢氧化钾溶液（５０％）、三氯乙酸溶液（２０％）、ＶＢ１ 有荧光法和高效液相色谱法，这两个方法都是基于 盐酸盐标准物质（德国ｓｕｐｌｃｏ公司）。 ＶＲ】经过碱性铁衍生，生成荧光衍生物，进行 １－３流动相及标准溶液 定量检测，操作步骤较为复杂，不易掌握。 ｌ＿３．１流动相Ａ 本实验方法通过研究，采用三氯乙酸沉淀奶粉中 在１ Ｌ的烧杯中，加入３００ｍＬ水、５５０ｍＬ水、 蛋白质和脂肪，经过Ｃ１８色谱柱分离，在波长２４２ ｎｎｌ １０ ｍＬ甲酸和１．０ ｇ二辛基丁二酸磺酸钠（ＤＯＳＳ），溶 处检测，操作简便，可以实现快速检测。 解混合均匀，滴加氢氧化钾溶液（５０％）来调节ｐＨ １ 实验部分 值，ｐＨ值应在４．４￣０．０５：艺间，然后转移至１ Ｌ容量瓶， 加水至１ Ｌ，混合均匀，在脱气前，再测定１次ｐＨ值。 １．１主要仪器和设备 １．３．２ ＶＢ１标准溶液母液（Ｔ１） 高效液相色谱仪带紫外检测器（Ａｇｉｌｅｎｔ １ １ ００型， 称取１００ ｍｇ ＶＢｌ盐酸盐标准物质至１００ ｍＬ容量 美捷司）；ｐＨ计（瑞士梅特勒公司）；纯水机 瓶，加入５０ ｍＬ水和２０ ｍＬ三氯乙酸（２０ ）溶液， （美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司，ＤＱ３ＵＶ）；Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ—Ｃ１８ 溶解，再加水至１００ ｍＬ定容，混合均匀。该母液能 色谱柱，５ｐｍ，４．６ ｍｍｘｌ５０ ｍｍ（美捷司）。 够在４℃条件下保存１周。 １．２试剂及标准品 １．３＿３、 ｌ标准工作液（Ｔ２） 甲醇（色谱级，美国Ｍｅｒｃｋ公司）、甲酸（色谱 吸取５ ｍＬＶＢ１标准母液（Ｔ１）至１００ ｍＬ容量瓶， 收稿日期：２００９－１卜３０ 加入２０ ｍＬ ２０ 的三氯乙酸溶液，用水定容至１００ 作者简介：吴轶，１ ９７９－，助理工程师，从事食品检测分析工作 ｍＬ，混匀，得到ＶＢ】标准工作液（Ｔ２）。 ４２１ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．４ １．３．４＼ １标准工作序列 分别吸取ＶＢ１标准工作液（Ｔ２）２ｍＬ、４ｍＬ、１０ ｍＬ至１００ｍＬ容量瓶，分别加入２０ｍＬ２０％的三氯乙 素Ｂ１的测定第二法》，该方法是采用荧光检测器检 测，样品经过酶解、水解、过滤、衍生、提取等多个 前处理步骤，操作步骤比较繁琐。 酸溶液，加水至１００ ｍＬ，分别得到ＶＢ１标准工作液序 列Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３，根据配制的标准序列溶液，进行液相 本检测方法仅采取一次前处理步骤，即使用三氯 乙酸沉淀蛋白，取澄清滤液进行测定，另外本方法采 色谱测定，以所测得的色谱峰的峰面积与其对应浓度 作图，绘制标准工作曲线。 １．４样品前处理 称取１０ｇ婴幼儿奶粉至１００ｍＬ容量瓶，加入４０ 用紫外检测器进行检测，各个实验室几乎都装备有此 类检测器，具有推广的实用价值，而荧光检测器较为 特殊，并不能普遍推广，使用范围有一定。 ２Ｉ３方法的指标 ｍＬ的温水（４０℃）溶解；再加入２０ｍＬ２０％Ｊ．氯乙 酸溶液，混匀，加水定容至１００ｍＬ。静置１５ｍｉｎ。用 滤纸过滤样品，取滤液待测。 １．５色谱条件 流动相：１００％流动相Ａ；柱温：５Ｏ℃；流速：１ ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：５０ ；洗脱方式：等度洗脱。 １．６计算方法 ， ＣＸＶ×１００×Ｆ ＝—— ｍ×１０００ 注：ｘ为样品中ｖＢ１的含量（１０ ｍｇ／ｇ）；ｃ为样液中ＶＢｌ 的浓度（￣ｇ／ｒｎＬ）；Ｆ为稀释倍数；Ｖ为定容体积（ｍＬ）；ｍ为 称样量（ｇ）。 ２结果与讨论 ２．１流动相ｐＨ值对ＶＢ】出峰的影响 由于采用离子对试剂加入流动相中，实验表明流 动相的ｐＨ值对待测化合物的出峰位置影响极大，ｐＨ 值变大将会使ＶＢ 的出峰时间延后，反之将使出峰时 间提前，因此在开始实验前，必须测定流动相ｐＨ值， 如果需要调节ｐＨ值，可以使用甲酸或氢氧化钾来调 节ｐＨ值。实验中ＶＢ】的出峰时间约８．０２ ｍｉｎ，见图１。 — ｌＵ Ｌ．．．．．．．．．．Ｌ——————．．．．Ｌ．．． ————．Ｌ ．．．．．．．．．Ｌ——— —— 。．Ｊ．．．．．．． ——Ｊ——． ．．．．．．』．．， ———— 。【．．．．．．．．—Ｊ ０ ５ ｌ０ ｌ５ ２Ｕ ２５ ３Ｏ ３５ ４０ ａｒｉｎ 图１ Ｖｍ的标准图谱（ｐＨ＝４．４３） Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｅｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆＶｎｌ（ｐＨ＝４．４３） ２．２本实验方法和国家标准方法差异比较 目前测定婴幼儿奶粉中ＶＢ 的国家标准方法是 ＧＢ，］ｒ ５４１３．１１—１９９７《婴幼儿配方食品和乳粉中维生 ４２２ ２‘３．１线性 依照方法配制成ＶｌＢｌ系列浓度的工作液０．８５５ ￣ｔｇ／ｒｒｍ、１．７１１￣ｔｇ／ｍＬ、２．５６５￣ｔｇ／ｒｒｍ、４．２７７ ，根 据峰面积与浓度拟合成线性回归方程和相关系数，见 表１。其线性可以大于０．９９９０以上。 表１线性及相关系数 Ｔａｂｌｅ １ Ｌｉｎｅａｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ 序号 ｌ ２ ３ ４ 浓度（ ｎＬ）０．８５５ １．７１１ ２．５６５ ４．２７７ 峰面积（ＡＵ） １００．７６ ２００．５０ ３０１．９２ ５０３．９６ 线性方程 Ｙ＝１ １８．Ｏ１Ｘ－Ｏ．８６３２ ｒ－０．９９９９ ２．３－２精密度 对同一标准样品ｆ０．４７￣ｇ／ｍＬ）进行连续八次重复 测定，根据峰面积计算精密度，见表２，ＲＳＤ小于２％。 表２精密度 Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 序号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ 峰面积／ＡＵ ５５．８７ ５５．４８ ５４．５０ ５５．０４ ５５．６２ ５６．４１ ５６．４２ ５５．３４ ＲＳＤ／％ １．１８ ２．３＿３添加回收率 分别做０．１ＯｘｌＯ ｍｇ／ｇ、０．２０ｘ１０。ｍｇ／ｇ、０．５０ｘｌＯ ｍｇ／ｇ三个水平添加回收，测定其加标回收率，实验采 用婴幼儿奶粉作为加标的本底，见表３。回收率在 ７９％～８５％之间。 表３加标回收率 Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆ０ｒ ＶＢｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 样品名称 样品含量加入量（ １０－２实测量（１ （ｒｔ￣－回收率（％） １０ ｍｇ／２一 ｇ） ｍｇ／ｇ） ｍｇ／ｇ） （下转第４１７页） 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．４ 定时样品与内标同时进样，绘制工作曲线，回归方程 为Ｙ＝５．２４２×１０ ＋５．０３２×１０－ ，相关系数ｒ＝０．９９９ ９。 可见在上述浓度范围内铬线性关系良好。采用消化样 品空白溶液，重复进样１０次，仪器显示仪器检出限 ＤＬ－－０．２２８ ３ ／Ｌ。 素的分析测定。 ２．４样品测定 样品用ＩＣＰ—ＭＳ法与国标法进行比对试验，试验 结果相吻合，如表５所示。样品分析结果表明，该方 法快速简便，测定结果准确可靠，具有较高的灵敏度 ２．３精密度和准确度实验 选取幼儿配方奶粉、高钙老年奶粉、孕妇配方奶 和较宽的动态线性范围，能够满足奶粉中铬常规检测 的需要。 表５不同方法测定奶粉样品中铬含量的结果 Ｔａｂｌｅ ５ Ｃｈｒｏｍｉｕｍ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ ｍｉｌｋ ｓａｍｐｌｅｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｆｆｄｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ 粉，每个样品消解前分别添加三种浓度的铬标准，每 个浓度做３个平行样，进行精密度和准确度试验，结果 见．表４。 表４分析方法的加标回收试验结果 Ｔａｂｌｅ４ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｄｄｉｉｏｎ ｔ参考文献 ［１】 齐颖．食品中铬的生理功能及其检测方法［Ｊ］．中国食物与营 养，２００６，（１）：３７．３８ ［２】 吕新之．铬污染与防治 ．菏泽师专学报，１９９８，２Ｏ（２）：７８—８０ ［３］ 刘鑫，陈春涛，马庆一，等．灰树花对铬生物富集作用的探讨 ［Ｊ】．现代食品科技，２００６，２２（４）：５４—５６ ［４］ 张凤珍，张媛英，史仁玖等．食品中铬元素的含量分析【Ｊ］．泰 山医学院学报，２００３，２４（１）：１８—２０ 表４实验结果显示，加标回收率在９５．６％一１０２．２％ 之间，相对偏差在０．９２－４．２１％之间，说明方法的精密 ［５］ ＧＢ／Ｔ５００９．１２３—２００３食品中铬的测定［Ｓ】 ［６］ 刘虎生，邵宏翔．电感耦合等离子体质谱技术与应用［Ｍ］． 化学工业出版社 度和准确度良好，建立的测试方法能满足奶粉中铬元 （上接第４２２页） 采用本方法对奶粉样品作了加标回收率测定，回 收率在７９￣／￣８５％，能满足食品卫生学评价的要求，具 ２．３．４最低检出限 用ＶＢ１制成相应浓度进样１Ｏ ，信噪比大于３， 仪器测量检出限为０．０３￣ｇ／ｍＬ，试样称样量为１０．００ ｇ， 则该方法检出限为０．０３ｘｌｏ。ｍｇ／ｇ。 ３结论 有较强的实用价值。 参考文献 ［１］Ｄ Ｃ Ｗｏｏｌｌａｒｄ，Ｈ Ｅ Ｉｎｄｙｋ，Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆＴｈｉａｍｉｎｅ， Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ，Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎｅ ａｎｄ Ｎｉａｃｉｎ ａｍｉｄｅ ｉｎ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａｓ ｂｙ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， 本文方法采用离子对试剂作流动相，用ＺＯＢＡＸ ＸＤＢ－－Ｃ１８分析柱在２４２ｎｍ处可将婴幼儿奶粉中ＶＢ１ 分离出来，而且峰型对称无拖尾现象。 ２００２，８５，（４）：９４５ ［２】 宓晓黎，丁贵平，李利东，荧光液相色谱法测定强化面粉中 维生素Ｂ１、Ｂ２和Ｂｌｌ【Ｊ］，现代食品科技，２００５，２１（２）：１５０—１５２ ［３】 李克，王华娟，等，离子对反相高效液相色谱法同时测定复 该方法精密度好，ＲＳＤ小于２％，在１．００－１００ ￣ｔｇ／ｍＬ的浓度范围内线性关系良好，具有较高的灵敏 度，方法检出限在０．０３ｘｌ ｍｇ／ｇ。 合维生素片中４种水溶性维生素【Ｊ］，色谱，２００３，２１（１）： ４１７
