ｖｃｖｃｗ，ｃｈｉｎａｄａｉｒｙ．ｎｅｔ中国乳品工业ｄａｉｒｙＩＮＤＵＳＴＲＹｚｇＩｐｇｙ（孕１６３．ｃｏｒｎＨＰＬＣ法快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素Ｂ１■红，王浩（国家食品质量毒全监督检验中心，北京１０００９４）摘要：建立了快速测定耍幼儿配方奶粉中维生素Ｂ１的高效液相色谱测定法。采用ＺｏｒｂａｘＸＤＢ—Ｃ１８（５Ｉｘｍ。４．６ｎｕｎｘ２５０衄ｉ．ｄ）反相色谱柱．以浓度为Ｏ．０５ｍｏｌ／Ｌ乙酸钠水溶液与甲醇比为６５：３５（体积比，调ｐＨ值为４．５）为流动相，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，进祥量２０¨．Ｌ。方法定量限为０．５ｒｎｇ／ｋｇ。加标回收率９２．１％－１０３．８％。线性范围Ｏ．Ｏｐｌ．００ｍｇ／Ｌ，相对标准偏差为４．３４％。该法具有样品预处理简单，灵敏度高，分析时间短等优点，适用于耍幼儿配方奶粉中维生素Ｂ１的快速测定。关键词：高效液相色谱仪；婴幼儿配方奶粉；雏生索Ｂ１中图分类号：ＴＳ２５２．７文献标识码：Ａ文章编号：１００１—２２３０（２０１０）１１—００４６—０２ＳｔｕｄｙＣＡＯｏｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＶｉｔａｍｉｎＢ１ｉｎｉｎｆａｎｔＨａｏＳｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎａｎｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒｂｙＨＰＬＣＨｏｎｇ，ＷＡＮＧＦｏｏｄ（ＮａｔｉｏｎＱｕａｌｉｔｙ＆ＳａｆｅｔｙＣｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｉｓｔｈｅｓｉｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｒａｐｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＶｉｔａｍｍＢ１ｉｎｉｎｆａｎｔｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ．Ｉｎｔｈｅｍｅｔｈｏｄ．出ｅａｎａｌｙｓｉｓｃｏｌ—ＸＤＢ—Ｃ１８（５“ｍ，４．６ｍｍｘ２５０ｌ＇ｎｌｎｕｎｍｉｓｒｅｖｅｒｅｄ—ｐｈａｓｅｃｏｌｕｍｎｏｆＺｏｒｂａｘｉ．ｄ）．ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｉｓ０．０５ｍｏｌ／ＬＣＨ３ＣＯＯＮａｗａｔｅｒｓｏｌｕ－ｔｄｏｎ：Ｍｅｔｈａｎｏｌ（６５：３５，Ｖ／Ｖ，ｐＨ４．５），ｔｈｅｆｌｏｗｉｓ１．０ｍＬ／ｍｉｎ，ａｎｄｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｉｓ２０斗Ｌ．ＴｈｅｌｉｍｉｔｏｆｌｉｎｅａｒｐｌｏｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｅｔｗｅｅｎｑｕａｎｔｉｔａｆｉｏｎＷａｓ０．５ｍｇ／ｋｇ，Ｔｈｅ（ｎ２６）ｖａｌｕｅ００．Ｏ斗ｇ／ｍＬａｎｄ１．００斗∥ｍＬ．Ｏｖｅｒａｌｌｍｅｄｌｏｄｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９２．１％ａｎｄ１０３．８％，ａｎｄＰ．ＳＤｃａｒｌｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ４．３４％．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＢ１ｉｎｉｎｆａｎｔｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ．Ｋｅｙｗａｓｓｅｍｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ。ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｑｕｉｃｋ，ｗｈｉｃｈｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＶｉｔａｍｉｎｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｉＩｌ】赫ｔｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ；ＶｉｔａｍｉｎＢ１０引言维生素Ｂ１又称硫胺素或抗神经炎素。由嘧啶环和噻唑环结合而成的一种Ｂ族维生素。其在体内的含量虽然很少，但在人体生长、代谢、发育过程中却发挥着重要的作用，因而成为婴儿配方奶粉的重要组成部分。目前测定食品中维生素Ｂ１的方法主要有：荧光分光光度法、液相色谱法１１ｔ２１。其中。婴儿配方奶粉中维生索Ｂ１的国标测定方法（ＧＢ／Ｔ５４１３．１１－２０１０）为液相色谱法，该法样品需要在稀盐酸环境水解，酶解过夜，费时，回收率偏低。本文将样品经酸沉蛋白后直接用碱性铁衍生。正定醇萃取。ＨＰＬＣ法进行直接测定，获得较满意的结果。样器，Ｇ１３２１Ａ荧光检测器。试剂：甲醇，冰醋酸，盐酸．氢氧化钠，乙酸钠，铁。以上均为分析纯。维生素Ｂ１。样品为婴幼儿配方奶粉。１．２色谱条件色谱柱：反相ＺｏｒｂａｘＸＤＢ－Ｃ１８色谱柱；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ：柱温为２５℃；激发波长３７５ｎｍ，发射波长４３５ｎｍ；进样量为２０“Ｌ；流动相：０．０５ｍｏｌ／Ｌ乙酸钠比甲醇为６５：３５（体积比，调ｐＨ值为４．５）。１．３样品处理准确称取５ｇ样品，用２５．０ｒｒｔＬ５０ｏＣ热水溶解，超声１０ｒｎｉｎ．用浓度为５ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液调节ｐＨ值至１．７，放置２ｍｉｎ后．再用浓度为２．５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调１材料与方法１．１材料仪器：Ａ西ｅｎｔｌｌ００型高效液相色谱仪，配置自动进收祷日期：２０１０—０８—３０作者简介：曹红（１９５１一），女，高级工程师，从事食品安全与营养检验的研究工作。通讯作者：王浩节其ｐＨ值至４．５。将样品溶液移至５０ｍＬ容量瓶中，用水定容至刻度后．倒入漏斗用快速定性滤纸自然过滤，弃去最初滤液．在５０ｍＬ锥形瓶中收集滤液，并充分混匀．待用；取上述滤液１０．０ｍＬ于２５ｍＬ具塞比色管中，加１０．０札正丁醇，强烈振荡后静置约１０ｍｉｎ。充分分层．吸取正丁醇于５０００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｍｉｎ。取上清液用０．４５斗ｍ滤膜将样液过滤，进样２０“Ｌ进行色谱分析。４６２ａ７０万方数据－ｇｘ，Ｉ－‘ｇｐ’ｔ“ＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓ测定方法１．４定性定量方法采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性．采用外标法以峰面积计算定量．依次配制不同浓度的标准溶液进样分析．以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。２结果与讨论２．１前处理方法的优化维生素Ｂ１为水溶性物质．而婴儿配方奶粉中蛋白质含量较高，因此，本方法先用５０℃热水超声提取，再经酸沉蛋白后直接用碱性铁衍生．正定醇萃取待测液中的维生素Ｂ１：国标测定方法（ＧＢ／Ｔ５４１３．１１—２０１０）样品需要在１２１ｏＣ下保持３０ｍｉｎ，待冷却至４０℃量２０“Ｌ时，峰形较好，响应值比较理想。综合以上三色谱条件的测定结果令人满意ｆ如图１所示）。２．２标准曲线线性范围和方法检测限将逐级稀释的标准工作液分别进样２０斗Ｌ，测定结果经线性回归．线性范围为０．００～１．００ｍｇ／Ｌ；线性相关系数为０．９９９９９：回归方程为ｙ＝８７３．３３ｘ－１４．８０，式中：ｙ为峰面积；ｘ为质量浓度。，进空白样．以基线３倍噪声值在标准曲线查得结果计算，按测定方法计算，本方法最低检出量为０．５ｍｇ／ｋｇ。２．３方法的回收率和精密度称取已知含量的同一样品６份。每份５．００ｇ。添加维生素Ｂ１标准品０．０３ｍｇ，按供试品制备方法处理后，进行测定，结果如表１所示。从表中可看出，样品加标回收率９２．１％＂１０３．８％，平均相对标准偏差为４．３４％（ｎ＝６）。表１加标样品回收率与相对标准偏差再酶解过夜，其后同本法。经过加标对比实验，国标测定方法平均回收率小于８０％．而本法平均回收率大于９２．０％．其原因可能为在维生素Ｂ１在１２１℃高温下可能会有所损失，造成国标测定方法平均回收率偏低。２．１色谱条件的优化据文献报道．可用于分离维生素Ｂ１的色谱柱主要包括Ｃ１８和ｃ８柱。本文分别采用上述两种色谱柱进行分离试验．发现Ｚｏｒｂａｘ较好的分离效果：维生索Ｂ１属于强极性化合物，在反相色谱柱上保留较弱．为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善．选用以浓度为０．０５ＩＴＩｏｌ／Ｌ乙酸钠与甲醇比６５：３５（体积比，ｉＪ§］ｐＨ值为４．５）为流动相：对维生素１３１标准溶液分别用激发波长为２８０，３１０，３７０，４９０ｎｍ；发射波长为３８０，４００，４３５，５００ｎｍ进行测定；发现激发波长为３７５ｎｍ，发射波长为４３５ｎｍ时。维生素Ｂ１标准溶液的响应值最大；通过不同体积进样量比较，发现进样样品编号样品质量分数添加质量分数检测质量分数加标回收率／％／（嵋‘１）／（¨ｇ・１）ｇ－ｇＸＤＢ－－Ｃ１８５埘维生素Ｂ１具有３结论建立了快速测定婴幼儿配方奶粉中维生索Ｂ１的高效液相色谱测定方法。该法样品经酸沉蛋白后直接用碱性铁衍生，正定醇萃取，ＨＰＬＣ法进行直接测定．样品加标回收率９２．１％～１０３．８％．平均相对标准偏差为４．３４％（ｎ＝６），适用于婴幼儿配方奶粉中维生素Ｂ１暑的快速测定。参考文献【１１常相娜，黄荣清，王正平，等．Ｂ族维生素测定方法研究进展【Ｊ】．科学ｔ｜ｍｉｔｔ图１维生素Ｂ１标准物质的色谱技术与工程，２００４。４（４）：３１２—３１５．［２１崔蓉，李皎，王洪玮．水溶性维生素的高效液相色谱测定方法的研究Ⅱ】．中国卫生检验杂志，２００５，１５０）：５５—５７．（上接第２６页）准并且实验操作简单，方便快捷，不会造成新的环境污染。中铜和锰Ⅱ】中国乳品工业，２００９，３７（１１）：４５—４７．ｆ４】蔡玉娥。蔡亚岐，牟世芬，等．高效液相色谱一脉冲积分安培电化学检测牛奶中的妥布霉素Ⅱ】．分析测试学报，２００６，２５（６）：１１７－１１９．【５】孙建民，于丽青，陈晓．壳聚糖超滤膜的研究【Ｊ】．膜科学与技术，２００４，２４（６）：７５—７７．参考文献：…ｌ陈伟，闰宁环，母智深．利用ｕＰＬｃ—Ｍｓ／Ｍｓ测定牛奶中２种青霉素类药物的残留量Ｕ】．中国乳品工业，２００９，３７（３）：５３—５６．【２】龚燕，吴杰．周霄，等．ＥＬＩｓＡ法检测乳制品中的三聚氰胺质量浓度Ⅱ１．中国乳品工业，２００９，３７（９）３０—３２．（３Ｊ蒋晓凤，嵇雅颖，盛梅．微波消解～石墨炉原子吸收光谱法测定奶粉【６】袁彦超，石光。陈炳稔．交联壳聚糖树脂吸附Ｃｕ２＋的机理研究Ｕ】离子交换与吸附，２００４，２０（３）：２２３－２３０．阴林友文，陈伟，罗红斌．羧甲基壳聚糖对铅离子的吸附性能研究Ⅱ】．离子交换与吸附，２００１，１７（４）：３３３—３３８．Ｖ０１．３８，Ｎｏ．１１２０１０—（ｔｏｔａｌ２—４０）４７万方数据
