生堡塞堕处型苤查！Ｑ！！生！！旦筮！！鲞筮！！塑鱼丛！』垦婴！！！ｇ：Ｑ！！！里！竺垫！！：！！！：！！：型！：！！小剂量衣霉素诱导的内质网应激预处理对大鼠缺血再灌注心肌局部炎症的影响周涛谢晓勇冯旭向道康作者单位：５５０００２贵阳，贵州省人民医院心外科（周涛、向道康）；５３００２１南宁，广西医科大学第一附属医院胸心外科（谢晓勇、冯旭）通信作者：向道康，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｎｇｄａｏｋａｎｇ＠ｒｉｐ．ｓｉｎａ．ＣＯＢＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—９０３０．２０１６．１２．０３１【摘要】目的观察小剂量衣霉素诱导内质网应激预处理对缺血冉灌注损伤（Ｉ／Ｒ）大鼠心肌局部炎症的影响。方法４０只成年雄性ｓＤ大鼠，随机分为假手术组（Ｓｈａｍ组）、Ｉ／Ｒ组、单纯衣霉素处理组（ＴＭ组）及衣霉素＋Ｉ／Ｒ组（ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组），每组各１０只。Ｉ／Ｒ组及ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组通过结扎左冠状动脉前降支并再灌注的方法建立Ｉ／Ｒ模型，ＴＭ组及ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组模型建立前３０ｍｉｎ腹腔注射衣霉素０．６ｍｒ－／ｋｇ，分别于开胸后和再灌注２ｈ取颈动脉血，使用比色法检测血清肌酸激酶同工酶（ＣＫ—ＭＢ）及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性。再灌注２ｈ后处死大鼠摘取心脏，使用原位缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）法观察心肌细胞凋亡，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测心肌半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ）一１２、核因子（ＮＦ）．ＫＢｐ６５蛋白的表达。结果Ｓｈａｍ组、ＴＭ组ＣＫ．ＭＢ、ＬＤＨ活性再灌注２ｈ时与开胸后比较变化差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｉ／Ｒ组及ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组ＣＫ—ＭＢ、ＬＤＨ活性均较开胸后上升，两组问比较，Ｉ／Ｒ组高于ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组（Ｐ＜０．０５）；Ｓｈａｍ组、ＴＭ组、Ｉ／Ｒ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组细胞凋亡指数依次为（２．４±０．３）％、（７．７±０．６）％、（２９．４±３．１）％和（１２．８±１．９）％。Ｉ／Ｒ组、ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组与Ｓｈａｍ组比较，细胞凋亡指数较高，差异有统计意义（Ｐ＜０．０５），Ｉ／Ｒ组与ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组比较更为显著（Ｐ＜０．０５）；再灌注２ｈ后Ｓｈａｍ组心肌组织Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢ０６５蛋白呈低表达，Ｉ／Ｒ组、ＴＭ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组中均呈高表达，与Ｓｈａｍ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），其中ＴＭ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组均低于Ｉ／Ｒ组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论小剂量衣霉素诱导内质网预处理可能通过减轻缺血再灌注心肌的内质网应激，降低ＮＦ．ＫＢ通路激活，减轻心肌局部炎症，从而产生一定的心肌保护效果。【关键词】心肌缺血再灌注损伤；内质网应激；预处理；炎症基金项目：贵州省自然科学基金（黔科合Ｊ字［２０１３］２１７５号）Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｎｌｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌｏｗｄｏｓｅｔｕｎｉｃａｍｙｃｉｎａｔｔｅｎｕａｔｅｓｍｙｏ．ｃａｒｄｉａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙＺｈｏｕＴａｏ，ＸｉｅＸｉａｏｙｏｎｇ，ＦｅｎｇＸｕ．ＸｉａｎｇＤａｏｋａｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉａｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２，Ｃｈｉｎａ（ＺｈｏｕＴ，ＸｉａｎｇＤＫ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒ－ｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３ＤＤ２Ｊ，Ｃｈｉｎａ（ＸｉｅＸ】，，ＦｅｎｇＸ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＸｉａｎｇＤａｏｋａｎｇ，Ｅｎｔａｉｌ：ｘｉａｎｇｄａｏｋａｎｇ＠ｒｉｐ．ｓｉｎａ．ｅｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃ．ｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓ（ＥＲＳ）ｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｕｎｉｃａｍｙｃｉｎ（ＴＭ）ａｇａｉｎｓｔｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｌ／Ｒ）ｉｎｊｕｒｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｏｒｔｙＳｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓ：Ｓｈａｍ，ＴＭ，Ｉ／Ｒ，ａｎｄＴＭ＋Ｉ／Ｒ．ＴｈｅｍｏｄｅｌｏｆＩ／Ｒｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎｏｆｔｈｅｌｅｆｔａｎｔｅｒｉｏｒｄｅ．ｓｃｅｎｄｉｎｇｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｆｏｒ０．５ｈｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ２ｈｉｎＩ／ＲｇｒｏｕｐａｎｄＴＭ＋Ｌ／Ｒｇｒｏｕｐ．ＴＭｇｒｏｕｐａｎｄＴＭ＋Ｉ／ＲｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｅｄｂｙＴＭ０．６ｍ∥ｋｇａｔ３０ｍｉｎｂｅｆｏｒｅｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＢＩｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｗｉｔｈｄｒａｗｎｆｒｏｍｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｙａｆｔｅｒｔｈｏｒａｃｏｔｏｍｙａｎｄ２ｈａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．ｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅ１ｅｖｅｌｓｏｆｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅｉｓｏｚｙｍｅ（ＣＫ—ＭＢ）ａｎｄｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）．Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｙｓｔｅｉ．ｎｙｌａｓｐａｒｔａｔｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ（Ｃａｓｐａｓｅ）一１２ａｎｄｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ（ＮＦ）一ＫＢｐ６５ｉｎｈｅａｒｔａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅＩ／ＲｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＷｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇｉｎａｌｌｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘ（ＡＩ）ｕｓｉｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｎｉｃｋ—ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎａｌｌｇｒｏｕｐｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＣＫ—ＭＢａｎｄＬＤＨ，ＡＩ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＣａｓｐａｓｅ一１２ａｎｄＮＦ—ＫＢｐ６５ｐｒｏｔｅｉｎｉｎ１／Ｒｇｒｏｕｐ［（５４６±６９）Ｕ／Ｌ，（２０９４－ｔ－３２８）Ｕ／Ｌ，（２９．４±３．１）％，０．４６ｌ±０．０４６，ａｎｄ０．２８７±０．０３２ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ］ａｎｄＴＭ＋Ｉ／Ｒｇｒｏｕｐ［（９７７±１０３）Ｕ／Ｌ，（３１９８±４１７）Ｕ／Ｌ，（１２．８±１．９）％，０．２６９±０．０４ｌ，ａｎｄ０．１５３土０．０３ｌ万方数据・２７２５－・实验研究・。ｚ，ｚｏ。主堡塞鳖生Ｅ型盘圭垫Ｉ！生！！旦筮塑鲞筮！！塑垦！堕』坠＆！！婆：里望！翌！垦！！！查，∑塑：塑：盟！：！！ｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｊｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＳｈａｍｇｒｏｕｐ［（５５９±８１）Ｕ／Ｌ，（２４５９±２３１）Ｕ／Ｌ．（２．４±０．３）％．０．０６７４－０．００９，ａｎｄ０．０４９±０．００６ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ］ａｎｄＴＭｇｒｏｕｐ［（５７２±８１）Ｕ／Ｌ，（２３３５±２４１）Ｕ／Ｌ，（７．７±０．６）％，０．１４９±０．０３１，ａｎｄ０．０８２±０．０１０ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ—ａｔ２ｈａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）．ＡｌｌｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｄｅｘｅｓｉｎＩ／ＲｇｒｏｕｐｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＴＭ＋Ｉ／Ｒｇｒｏｕｐａｔ２ｈａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈＥＲＳｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌｏｗｄｏｓｅＴＭａｔｔｅｎｕａｔｅｓｍｖｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ．ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｄｕｃｅｄＩ／Ｒｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｔｉｏｎｉｎｇ；ＭｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｊｕｑ＇；Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓ：Ｐｒｅｃｏｎｄｉ—Ｆｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｅ（『２０１３］２１７５）心肌局部的炎症反应在心肌缺血再灌注损伤（ＶＲ）过程中起重要作用１１Ｊ，其机制涉及多种信号传导通路的变化；炎症反应通路特别是核因子（ＮＦ）．ＫＢ通路和内质网应激（ＥＲＳ）‘２。之间存在着广泛的联系，研究结果表明ＥＲＳ是重症哮喘等炎症相关性疾病发生的重要机制。３ｏ，ＥＲＳ对缺血再灌注损伤心肌局部炎症反应亦有一定的影响。本研究旨在探讨小剂量衣霉素诱导ＥＲｓ预处理是否通过减轻大鼠缺血再灌注损伤心肌局部炎症反应减轻心肌的损伤。材料与方法１．材料：健康成年雄性清洁级ＳＤ大鼠４０只（体重２００—２５０ｇ，广西医科大学实验动物中心提供）；衣霉素（ＴＭ，美国Ｓｉｇｍａ公司）；肌酸肌酶同工酶（ＣＫ—ＭＢ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；原位缺ＶＩ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）试剂盒（德国Ｒｏｃｈｅ公司）；半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ）．１２、ＮＦ．ＫＢｐ６５多克隆抗体（美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）。２．实验分组：大鼠在模型建立前适应性喂养２４ｈ，使用数字表法将大鼠随机分为假手术组（Ｓｈａｍ组）、单纯衣霉素处理组（ＴＭ组）、缺血再灌注组（Ｉ／Ｒ组）及衣霉素处理＋Ｉ／Ｒ组（ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组）４组，每组１０只。Ｓｈａｍ组和ＴＭ组在手术过程中只穿线，不结扎冠状动脉，依分组不同分别腹腔注射生理盐水或衣霉素０．６ｍｌｆｋｇ；Ｉ／Ｒ组在结扎冠脉前３０ｍｉｎ腹腔注射生理盐水０．６ｍｌ／ｋｇ，结扎左冠状动脉前降支３０ｒａｉｎ，再灌注２ｈ；ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组在结扎冠脉前３０ｍｉｎ腹腔注射衣霉素０．６ｍｇ／ｋｇ，结扎左冠状动脉前降支３０ｒａｉｎ，再灌注２ｈ。大鼠在最后一次取完血样后处死，摘取心脏。３．模型建立：模型建立前大鼠禁食１２ｈ，自由饮水，３％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，气管插管进行机械通气，分离左颈总动脉，将预充肝素的聚乙烯塑料导管插入左心室，通过压力换能器与多导联生理记录仪连接，监测血流动力学指标。取胸骨左侧切Ｅｌ，左侧第三～第四肋间进胸，左冠状动脉前降支根部穿５－０Ｐｒｏｌｅｎｅ线备用。依分组不同腹腔给予０．６ｍＬ／ｋｇ的生万方数据理盐水或ＴＭ，３０ｒａｉｎ后将结扎线打活结结扎，关闭胸腔，结扎３０ｒａｉｎ后打开胸腔，松开结扎线，再灌注２ｈ。通过观察结扎后缺血区心肌组织颜色变化和心电图明显的ＳＴ段抬高判定动物模型建立成功。４．大鼠心肌损伤标志物检测：各组在开胸后通过颈动脉第１次取血，Ｉ／Ｒ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组在再灌注２ｈ时、Ｓｈａｍ组和ＴＭ组在相应时点再次颈动脉采血，标本在４℃、３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｒａｉｎ，取上血清液，使用比色法检测血清ＣＫ．ＭＢ和ＬＤＨ活性，具体操作过程严格按照试剂盒说明书进行。５．ＴＵＮＥＬ法观察心肌细胞凋产：大鼠在最后１次取完血样后处死，摘取心脏，使用冰生理盐水冲净血液，取左心室前壁部分心肌组织分成两份，１份使用１０％中性多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋并切片，厚４¨ｍ，４℃保存备用，另ｌ份置于液氮中保存备用。检测时取心肌组织石蜡切片，使用ＴＵＮＥＬ试剂盒，严格按照说明书观察心肌细胞凋亡，在光镜（×４００）下观察，正常心肌细胞核染成深蓝色，如细胞核中有棕褐色视为细胞凋亡阳性，每张切片随机选择４个互不重叠的高倍视野，采用ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓ６．０图像分析软件，计算心肌细胞凋亡指数（ＡＩ）：ＡＩ（％）＝凋亡细胞数／细胞总数×１００％。６．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白表达：提取心肌组织总蛋白定量后分装，提取上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，将电泳分离后蛋白质电转移至纤维素膜上，经封闭、洗脱后加入一抗（１：１０００），室温孵育，洗膜后二抗孵育，抗原一抗体复合物用增强型化学发光试剂（ＥＣＬ）法显示，胶片曝光，常规方法显影、定影，Ｉｍａｇｅ．ＰｒｏＰｌｕｓ图像分析软件分析蛋白条带的积分吸光度（Ａ）值，以靶蛋白Ａ值／甘油醛．３．磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）Ａ值的比值反映Ｃａｓｐａｓｅ．１２、ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白的相对水平。７．统计学方法：应用ＳＰＳＳ１７．０统计软件分析；计量数据采用均数±标准差（孟±ｓ）表示，各组间比较采用方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果１．大鼠心肌损伤指标结果：Ｓｈａｍ、ＴＭ组ＣＫ．ＭＢ、生堡塞堕处型苤圭！！！！生！！旦箜塑鲞筮！！塑垦！也』垦苎巳！！强：旦！！！些竺！！！！：！！！：！！：盟！：！！・２７２７・ＬＤＨ活性在再灌注２ｈ时与开胸后比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｉ／Ｒ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组均明显上升，与开胸后比较差异有统计学意义（Ｐ＞０．０５）。Ｉ／Ｒ组较ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表１。●－＿＿＿－，●■■●●●ｌ●■●●●一、…）ｌｌ●——■●●—●●＿●－表１各组ＣＫ—ＭＢ、ＬＤＨ水平变化（Ｕ／Ｌ，ｎ＝１０，ｘ±ｓ）１：假手术组；２：单纯衣霉素处理组；３：缺血再灌注组；４：衣霉素＋缺血再灌注组；Ｃａｓｐａｓｅ一１２：半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶一１２；ＮＦ—ＫＢｐ６５：核因子一ＫＢｐ６５；ＧＡＰＤＨ：甘油醛－３・磷酸脱氢酶图１各组Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢ０６５蛋白的表达伤标志物ＣＫ．ＭＢ与ＬＤＨ的释放相对较少，ＥＲＳ介导的心肌细胞凋亡也较轻，说明小剂量衣霉素预处理后缺血一再灌注心肌的损伤相对较轻。心肌局部炎症反应是心肌再灌注损伤发生的重要机制，研究结果表明注：Ｓｈａｍ组：假手术组；ＴＭ组：单纯衣霉素处理组；Ｉ／Ｒ组：缺血再灌注组：ＴＭ＋Ｉ／Ｒ：衣霉素＋缺血再灌注组；ＣＫ－ＭＢ：肌酸激酶同Ｔ酶；ＬＤＨ：乳酸脱氢酶；与Ｓｈａｍ组比较，８Ｐ＜０．０５；与ＴＭ组比较，“Ｐ＜０．０５；与１／Ｒ组比较，。Ｐ＜Ｏ．０５；与同组开胸后比较，。Ｐ（０．０５ＥＲＳ过程中的未折叠蛋白反应可诱导炎症反应，同时炎症反应也可诱发ＥＲＳ的发生，影响细胞代谢状态，引起更强烈的炎症反应，因此炎症与ＥＲＳ之间形成恶性循环，加重细胞损伤。在细胞炎症反应中，具有多向调节作用的转录因子ＮＦ．ＫＢ起重要作用。本研究结果提示，缺血．再灌注模型心肌ＮＦ—ＫＢｐ６５的含量增加，表明缺血一再灌注过程中存在心肌炎症反应，但使用小剂量衣霉素预处理组ＮＦ－ＫＢ０６５表达相对减轻，提示内质网应激预处理有利于抑制心肌ＮＦ—ＫＢ激活，推测可以减少促炎性细胞因子的释放，减轻炎症反应时各种炎性因子彼此影响、彼此加强形成恶性循环的正反馈体系，从而抑制心肌炎症和心肌损伤间彼此影响的恶性循环，减轻心肌的损伤。本研究结果表明，心肌缺血－再灌注过程中存在心肌局部炎症反应，小剂量衣霉素预处理可能通过减少内质网应激，减少ＮＦ．ＫＢ激活、阻断局部炎症介质网络体系，减轻心肌局部炎症，从而具有一定的心肌保护效果。参考文献［１］ＷｕＸ，ＺｈａｎｇＢ，ＦａｎＲ，ｅｔａ１．Ｕ５０，４８８Ｈｉｎｈｉｂｉｔｓｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌａｃｃｕｍｕ—ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｓｃｈｅｍｉａ・ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｒａｔ２．大鼠心肌细胞凋亡：Ｓｈａｍ组、ＴＭ组、Ｉ／Ｒ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组细胞凋亡指数依次为（２．４±０．３）％、（７．７±Ｏ．６）％、（２９．４±３．１）％和（１２．８±１．９）％。Ｉ／Ｒ组、ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组与Ｓｈａｍ组比较，细胞凋亡指数较高，差异有统计意义（Ｐ＜０．０５），Ｉ／Ｒ组与ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组比较更为显著（Ｐ＜０．０５）。３．大鼠心肌Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白的表达：再灌注２ｈ后Ｓｈａｍ组心肌组织Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白呈低表达，Ｉ／Ｒ组、ＴＭ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组中均高表达，与Ｓｈａｍ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），其中ＴＭ组和ＴＭ＋Ｉ／Ｒ组表达均低于Ｌ／Ｒ组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，表２，图１）。表２各组Ｃａｓｐａｓｅ一１２、ＮＦ—ＫＢ０６５蛋白的表达（ｎ＝１０，ｘ±ｓ）ｌａｔｉｏｎａｎｄＴＮＦ—ｄ注：Ｓｈａｍ组：假手术组；ＴＭ组：单纯衣霉素处理组；ＩｆＲ组：缺血再灌注组；ＴＭ十Ｉ／Ｒ：衣霉素＋缺血再灌注组；Ｃａｓｐａｓｅ－１２：半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶一１２；ＮＦ—ＫＢ０６５：核因子－ＫＢｐ６５；与Ｓｈａｍ组比较，８Ｐ＜０．０５；与ＴＭ组比较，“Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｉ／Ｒ组比较，。Ｐ＜Ｏ．０５［３］［２］ｈｅａｒｔ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２０１ｌ，５６（２）：５０３－５０７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｃｙｔｏ．２０１１．０７．０１５．孙忠东，宋玉娥，景丽．酸性复灌液对缺血再灌注心肌内质网应激细胞凋亡的影响［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１３，３０（４）：７５３－７５５．ＳｕｎＺＤ，ＳｏｎｇｔｏｓｉｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｅｎｄｏｐａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍＹＥ，ＪｉｎＬ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｃｉｄｉｃｒｅｐｅｆｆｕｓａｔｅｍｅｄｉｕｍｏｎａｐｏｐ・ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｘｐＳｕｒｇ，２０１３．３０（４）：５５７－５５９．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１３．０４．０３４．ＫｉｍＳＲ，ＬｅｅＹＣ．Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｌｉｎｇｎｅｔｗｏｒｋｓｉｎｓｅｖｅｒｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｓｉｇｎａ－讨论ａｓｔｈｍａ［Ｊ］．ＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ，２０１５，７（２）：１０６—１１７．ＤＯＩ：１０．４１６８／ａａｉｒ．２０１５．７．２．１０６．本研究结果显示，小剂量衣霉素预处理组心肌损（收稿日期：２０１６－０３．１９）万方数据
