・临床研究・ 白药膏对膝骨关节炎患者血清中ｌ Ｌ一１ ｆ３， ＴＮ Ｆ—ＯＬ及Ｍ Ｍ Ｐ一９含量的影响 王永乐戴七一 覃学流 梁景云龙飞攀梁庆华 广西中医药大学附属瑞康医院 ５３００１１南宁市华东路ｌＯ号 摘要 目的：观察白药膏对膝骨关节炎血清中ＩＬ一１１３，ＴＮＦ一 ，ＭＭＰ一９水平的影响，初步探讨白药膏治 疗膝骨关节炎的临床疗效和可能的作用机制。方法：４０例膝骨关节炎患者随机分为２Ｏ例白药膏治疗组和２Ｏ 例塞来昔布对照组，治疗前后抽血，采用夹心酶联免疫吸附法测定ＩＬ一１１３，ＴＮＦ—Ｏｔ及ＭＭＰ一９含量；观察两组 患者膝关节功能的改善情况。结果：两组治疗后膝关节功能均较治疗前明显提高（Ｐ＜Ｏ．０５），但两组疗效无 显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。与治疗前比较，两组治疗后血清中ＩＬ—ｌ８，ＴＮＦ一 含量均明显下降（Ｐ＜０．０５），ＭＭＰ一９ 含量治疗前后无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。治疗组治疗前后ＩＬ一１１３，ＴＮＦ—Ｏｔ含量的差值与对照组比较，有显著性 差异（Ｐ＜０．０５）。结论：白药膏治疗膝骨关节炎疗效良好，可能与其对细胞因子的影响有关。 关键词 膝骨关节炎；白药膏；ＩＩ，．１Ｂ；ＴＮＦ— ；中医药疗法 中图分类号：Ｒ６８４．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—０７１９（２０１４）０２—００１２—０３ 对照组２Ｏ例２８膝。两组的性别 骨关节炎（Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＯＡ） 节。４ｏ例均符合《关节炎概要》中膝 膝，的发病机制至今未完全明了，但近 骨关节炎的诊断标准 ］：近１个月 构成、年龄、病程等一般资料经比 年的研究提示白介素一１（ＩＬ＿１）、肿 内反复膝关节疼痛；年龄＞４０岁；骨 较无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５），具有可 瘤坏死因子一 （ＴＮＦ－仅）、基质金属 赘形成。４０例患者按随机数字表分 比性。见表１。蛋白酶（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ， 为对照组和治疗组。治疗组２Ｏ例３ １ ＭＭＰｓ）等细胞因子在ＯＡ的发病中 起主要作用…。中医治疗膝ＯＡＩ［￣ 床疗效明显，不良反应少。笔者采 用白药膏治疗膝ＯＡ患者２Ｏ例３ｌ 膝，并设塞来昔布胶囊治疗的２Ｏ例 ２８膝为对照组，观察两组疗效和检 测两组患者血清中ＩＬ一１１３，ＴＮＦ—Ｏｔ 表１两组一般资料比较 （ 螺） ２纳入标准符合膝骨关节炎 肝、肺、肾、造血系统等严重疾病及 及ＭＭＰ一９的水平，初步探讨白药膏 １．诊断标准并同意治疗观察者；膝关 精神病患者。 的作用机理，现报道如下。 节肿痛明显者。 １．３剔除标准 已采用其他口服 ２方法 治 ２．１治疗组予白药膏敷贴。白 １．１一般资料４ｏ例观察对象来 药、注射剂及关节镜等治疗者；加用其他 药膏为广西中医药大学附属瑞康 自广西中医药大学附属瑞康医院 疗中不能遵守约定规则，１临床资料 ２０１２年９月至２０１３年５月门诊及住 方法同时治疗，或不能坚持完成治 医院院内制剂（批准文号：２０８１６），由煅石膏粉、冰片、花 先天或后天性因素引起 ２０１院患者。男性８例，女性３２例，年龄 疗疗程者； 生油、凡士林等按比例调成膏状， ４５ ８７岁，病程１—２０年，共５９膝关 关节明显畸形者；合并心脑血管、基金项目：广西卫生厅中医药科技专项课题（编号：ＧＴＡｒｌ＇１２２６） 通讯作者 ・１２・（总９２） 广西中医药２０１４年４月第３７卷第２期 备用。每次取２０ ｇ，将白药膏平摊 涤后用底物ＴＭＢ显色。ＴＭＢ在过氧 ４５０ ｎｍ处测定ＯＤ值。以ＴＭＢ空白 于６ ｃｍｘ８ ｃｍ敷料上，敷贴于病变 化物酶的催化下转化成蓝色，并在 显色孔作为对照，所有的标准品和 关节的肿痛处，以绷带或胶布固 酸的作用下最终转化成黄色。颜色 样品的吸光值减去ＴＭＢ空白显色 定，每Ｅｌ １次。 的深浅和样品中的ＭＭＰ一９，ＩＬ—ｌ、 孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲 ２．２对照组 予塞来昔布胶囊 ＩＬ一６呈正相关。已稀释好的亲和 线，以吸光值作为纵坐标，浓度作 （辉瑞制药有限公司生产，国药准 素一过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）工作 为横坐标，根据样品的吸光值求出 字Ｊ２Ｏ１２ＯＯ６２）口服治疗，每次１粒， 液和ＴＭＢ显色液在加入酶标板孔前 对应的浓度。每日１次。 应预先在３７℃中平衡至少３０ ｍｉｎ。 ２．５统计学分析采用ＳＰＳＳ １８．０ 两组患者均连续治疗２周后观 精密吸取１０ ０００，５ ０００，２ ５００， 软件进行统计学分析。正态分布计 察疗效。 １ ２５０，６２５，３１２，１５６ ｐｓ／ｍｌ的标 量资料以均数±标准差（ 虹）表 ２．３标本的采集与保存所有受 准品溶液各０．１ ｍｌ依次加入同一排 示，两组均数之间比较采用 试对象均于治疗前、治疗后空腹抽 ７孔中。酶标板加上盖，３７ ｃＩ＝反应 样本ｔ检验，Ｐ＜０．Ｏ５为有统计学 取静脉血３ ＩＩＩｌ，注入试管中，低温 ９０ ｍｉｎ。反应后用自动洗板机吸去 意义。 离心（１ ８００ ｒ／ｒａｉｎ）后，吸取血清放 酶标板内液体，将ＭＭＰ一９，ＩＬ一１， 入ｅｎｄｏｆｉ￣管中一７０℃液氮冰箱中 ＩＬ一６抗体工作液按每孔Ｏ．１ ｒＩｌｌ依次 ３疗效观察 １疗效标准［。］通过对膝关节 保存，以备统一检测。采用ＲＴ一 加入（ＴＭＢ空白显色孔除外），于 ３．ｎ。以０．０１ ＭＴＢＳ 的疼痛（总３Ｏ分）、活动范围（总２０ ６０００酶标分析仪（深圳雷杜公司提 ３７℃中反应６０ ｍｉ供，博士德生物生产试剂盒）检测 洗涤３次，每次浸泡１ ｍｉｎ左右 分）、主动伸展受限（总１Ｏ分）、步行 血清中ＩＬ一１Ｂ，ＴＮＦ一 及ＭＭＰ一９的 （３００ １）。将准备好的ＡＢＣＩ作液 能力（总２０分）、日常生活（总２０分）按每孔Ｏ．１ ｍ脓次加入（ＴＭＢ空白显 等五方面进行评分，评价膝关节功 ２．４检测方法预先包被的抗体 色孔除外），于３７℃反应３０ ｍｉｎ。 能。每个项目又根据不同程度分别 ０１ ＭＴＢＳ洗涤５次，每次浸泡１～ 赋予不同分值。１ｏ０分为完全正常； 和检测相抗体都是亲和纯化级多 ０．含量。 克隆抗体。检测抗体经生物素 ２ ｍｉｎ左右，按每孔９０ ｐ，１依次加入 ９１—９９分为优；７５～９０分为良；５０—７４ 小于５０分为差。 （ｂｉｏｔｉｎ）标记。样品盒生物素标记 已在３７ ｃＩ＝平衡３０ ｍｉｎ的ＴＭＢ显色 分为可；３７℃避光反应２５—３０ ｍｉｎ。按每 ３．２两组治疗前后膝关节功能评 抗体先后加人酶标板孔反应后， 液， ＰＢＳ洗涤。随后加入过氧化酶标记 孔０．１ ｎ１ｌ依次加人ＴＭＢ终止液， 分结果见表２。的亲和素反应；经过ＰＢＳ的彻底洗 此时蓝色立转黄色。用酶标仪在 表２ 两组治疗前后膝关节功能评分结果 匕较 （分，面±ｓ） 注：与同组治疗前比较，①Ｐ＜Ｏ．０５ 表２结果显示，两组治疗后膝 组间比较无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。 ３．４治疗前后两组血清中ＩＬ一 ３两组疗效比较见表３。 １１３，ＴＮＦ— 及ＭＭＰ一９的水平比较 关节功能均明显提高，与治疗前比 ３．较均有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），但两 表３ 两组疗效比较 （例） 见表４。 两组治疗后血清中ＩＬ—ｌＢ， ＴＮＦ一０【均明显降低，与治疗前比较 有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；而ＭＭＰ一９ 含量治疗前后无明显变化（ ．ｏ５）。 注：两组疗效比较，经ａｉａｉｔ￣，ｕ＝Ｏ．２６０２，Ｐ＞Ｏ．０５，表明两组疗效相当 治疗组治疗前后血清中ＩＬ一１Ｂ， ＴＮＦ—ｏ【的差值与对照组比较有显 广西中医药２０１４年４月第３７卷第２期 取材方便，价钱低 表４两组治疗前后血清中ＩＩ，－１ ，ＴＮＦ 及ＭＭＰ＿９含量的比较（ｐｇ／ｍｌ。 ±ｓ） 我国分布广泛，廉，外敷安全且有良效，值得临床 推广应用。 参考文献 ［１］杜国辉，贺艳丽，陈建英，等．骨关节 炎早期诊断的生化指标［Ｊ］．中国生 化药物杂志，２００９，３０（３）：２０９—２１１． ［２］施桂英．关节炎概要［Ｍ］．北京：中国 中医药科技出版社，２０００：３３９． 注：与同组治疗前比较，①尸＜Ｏ．０５；与对照组治疗前后差值比较，②Ｐ＜Ｏ．０５ ［３］王亦璁．膝关节外科的基础和临床 著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５ ｏ ３．５不良反应 白药膏用药后局 部无皮肤过敏现象，服用塞来昔布 组有２例出现胃肠道反应。 ４讨论 膝ＯＡ在中医学中属于“痹证” 范畴。《素问・四时刺逆从论》日： “太阳经气有余则病骨痹。”目前对 膝ＯＡ的中医药治疗基本原则为 “急则治其标，缓则治其本”，可分 为祛风散寒胜湿的蠲痹法、补益肝 肾的固本法、益气补气的补养法和 活血化瘀的通络法等，也不乏既祛 风湿、止痹痛，又补肝肾、壮筋骨， 或兼益气活血等综合治法。 目前许多研究认为，ＩＬ—ｌＢ启 动了骨关节炎中关节软骨的破坏。 ＩＬ一１ Ｂ在关节软骨的代谢中有多方 面的作用，它一方面促进透明软骨 型胶原的降解，另一方面促进纤维 软骨型胶原的增生，同时还抑制蛋 白聚糖的合成，促进其分解，是直 接介导软骨破坏的细胞因子［ 。 ＴＮＦ— 是众多细胞因子中作用活 跃和具有广泛生物学活性的致炎 因子，在关节创伤后的退行性病变 过程中，ＴＮＦ一０ｌ及ＴＮＦ—ＯＬ受体在关 节滑膜组织中以自分泌和旁分泌 的方式大量表达，能使软骨蛋白多 糖降解和合成减少，致关节软骨损 害；减少滑膜细胞凋亡，并促使其 增殖，诱导成纤维细胞增殖分化， 介导增生和血管翳形成，致关节软 ・１４・（总９４） 骨和骨质破坏、关节强直［５】。 ＭＭＰ一９属于ＭＭＰｓ超家族中的明 胶酶Ｂ，又称Ⅳ型胶原酶，具有降 解变性Ｉ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的能力，也 可切割天然细胞外基质中的Ⅳ、 Ｖ、Ⅶ、Ｘ和Ⅺ型胶原，对蛋白聚糖 核心蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋 白、明胶和间质胶原等小分子细胞 外基质成分也有降解作用［ 。 现代研究表明：几乎所有ＯＡ 患者的滑膜中都有局部或散在性 炎症反应…；细胞因子在ＯＡ的发 生与发展过程中起着重要的作用。 塞来昔布是目前临床上常用的一 种消炎止痛药，能抑制炎性刺激， 如细胞因子和促炎分子，以达到抗 炎、改善膝ＯＡ患者患肢功能的目 的［８引。本临床观察结果表明，白 药膏外敷治疗膝ＯＡ的疗效与塞来 昔布比较无显著性差异，且在改善 血清中ＩＬ一１Ｂ，ＴＮＦ—ｏｔ水平方面优 于塞来昔布，提示白药膏外敷疗效 可能与其对细胞因子的影响有关。 白药膏由我院制剂室配制，以 煅石膏粉、冰片、花生油等按比例 调成膏状备用。石膏是传统中医临 床常用的一味中药，性味辛甘、寒， 入肺、胃经［１０］。《本草经疏》：“石 膏，辛能解肌，甘能缓热，大寒而兼 辛甘，则能除大热。”冰片性辛、苦、 微寒，归心、肝经，具开窍醒神、清 热、止痛功效。《本草纲目》：“气香 窜，能通诸窍脏腑，故其能辟一切 不正气。”石膏、冰片、花生油等在 ［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９９９： ５５２． ［４］Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ Ｊ Ｐ，Ｄｉｂａｔｔｉｓｔａ Ｊ Ａ，Ｒｏｕｔｌ１一 ｆｅｙ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａ－ ｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｌＪ］． Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ Ｄｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ，１９９３，１９ （３）：５４５—５６８． ［５］Ｏｅｇｅｍａ Ｔ Ｒ，Ｌｅｗｉｓ Ｊ Ｌ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｒ Ｃ Ｊｒ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｔｒａｕｍａ ｉｎ ｄｅｖｅｌ～ ｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ。１９９３，４０（３）：２２０． ［６］郭静。张文丽，李琪佳，等．基质金属 蛋白酶９及ＴＧＦ一８。ｍＲＮＡ和蛋自在 骨关节炎中的表达［Ｊ］Ｉ中国修复重 建外科杂志，２０１１，２５（８）：９９２—９９７． ［７］王力民，汤慧．骨性关节炎患者关节 囊滑液ＭＭＰ一３、ＰＧＥ：检测的临床意 义［Ｊ］．放射免疫学杂志，２０１０，２３ （１）：５９—６１． １８ Ｊ Ｌ．～Ｗ．Ｆａｎ，Ａ．Ｋａｉｚａｋｉ，Ｌ．一Ｔ．Ｔｉｅｎ，ｅｔ １ａ．Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｒａｉｎ ｉｎ－ ｌｆａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１３。１４（３／４）：２７—３８． ［９］Ｍ Ｎ Ｅｓｓｅｘ，Ｐ Ｂｈａｄｒａ，Ｇ Ｈ Ｓａｎｄｓ．Ｅｆ－ ｉｆｃａｃｙ ａｎｄ Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ｖｅｒｓｕｓ Ｎａｐｒｏｘｅｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｏｓ－ ｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｋｎｅｅ：ａ Ｒａｎｄｏｍ— ｉｚｅｄ，Ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，Ｄｏｕｂｌｅ－ｄｕｍｍｙ Ｔｒｉｍ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１２（４０）：１３５７ —１３７０． ［１０］江苏新医学院．中医药大辞典［Ｍ］． 上海：上海科学技术出版社，１９ｒ７７： ５９２． （２０１３—１０—２５收稿，编辑陈明伟） 广西中医药２０１４年４月第３７卷第２期
