(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 111297805 A(43)申请公布日 2020.06.19
(21)申请号 201911318554.5(22)申请日 2019.12.19
(71)申请人 赵洁
地址 256603 山东省德州市黄河二路661号
滨州医学院附属医院(72)发明人 崔建国 梁淑芹 齐洁 胡梦芬
赵洁 (74)专利代理机构 北京东方昭阳知识产权代理
事务所(普通合伙) 11599
代理人 吕玉健(51)Int.Cl.
A61K 9/127(2006.01)A61K 31/4468(2006.01)A61P 25/16(2006.01)
权利要求书1页 说明书5页 附图1页
CN 111297805 A(54)发明名称
一种匹莫范色林的脂质体及其制备工艺(57)摘要
本发明涉及药剂领域，具体涉及一种抗伴随帕金森氏病治疗幻觉和妄想的匹莫范色林的脂质体及其制备工艺。本发明采用薄膜水化法制备了匹莫范色林的脂质体，将匹莫范色林和磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，于适宜的温度下减压旋蒸成膜；然后采用磷酸盐缓冲液振摇并超声水化，最后挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜得到脂质体。本发明制备的匹莫范色林脂质体可显著增加匹莫范色林的溶解度，包封率高，制剂稳定性好，载药量较高；且制备工艺简单，辅料经济且较为安全。可进一步将本发明的脂质体通过如冷冻干燥等技术制备成脂质体粉末，以后续用于胶囊剂、片剂的制备。
CN 111297805 A
权 利 要 求 书
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1.一种匹莫范色林的脂质体，其由匹莫范色林、脂质体材料组成，其中脂质体材料为磷脂和胆固醇。
2.如权利要求1所述的脂质体，其特征在于，磷脂包含大豆卵磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)。
3.如权利要求2所述的脂质体，其特征在于，磷脂选自氢化大豆卵磷脂或磷脂酰乙醇胺中的一种或两种。
4.如权利要求1或3所述的脂质体，其特征在于，磷脂和胆固醇的重量比例为10:1-1:5；优选地，磷脂和胆固醇的重量比例为8:1-1:1；进一步优选地，磷脂和胆固醇的重量比例为5:1-2:1。
5.如权利要求1所述的匹莫范色林的脂质体的制备工艺，该制备工艺为薄膜水化法。6.如权利要求5所述的制备工艺，其特征在于，将匹莫范色林和磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，于适宜的温度下减压旋蒸成薄薄的一层膜；然后将事先配置好的磷酸盐缓冲液加入旋蒸瓶中，振摇并超声水化得到脂质体预产物，然后采用挤出器依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜得到脂质体终产物。
7.如权利要求6所述的制备工艺，其特征在于，有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、乙腈、乙酸乙酯；优选地，有机溶剂选自二氯甲烷。
8.如权利要求7或8所述的制备工艺，其特征在于，其中，药物与脂质体材料的用量重量比为1：(1-100)；优选为1：(5-50)；更优选为1：(10-20)。
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说 明 书
一种匹莫范色林的脂质体及其制备工艺
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技术领域
[0001]本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种抗伴随帕金森氏病治疗幻觉和妄想的匹莫范色林的脂质体及其制备工艺。
背景技术
[0002]匹莫范色林(Pimavanserin)是美国FDA批准的首个应用于治疗伴随帕金森氏病治疗幻觉和妄想药物。其由Acadia制药公司研发，于2016年4月获批上市。匹莫范色林水溶性差，临床用药形式为其酒石酸盐。
[0003]CN1078472A和US20190084935A1等通过制备匹莫范色林的酒石酸盐以及其新晶型以克服匹莫范色林的水溶性差的问题，该方法虽然从源头上一步到位解决了药物难溶性问题，但是一方面，将匹莫范色林制备成酒石酸盐，且为了保证该药物的稳定性进而制备成特定晶型大大增加了原料药(API)的生产成本，且该特定盐和晶型的原料药的可及性远远低于匹莫范色林；另一方面，目前对于从源头上改善匹莫范色林的盐型和晶型研究已经较为完全，需要通过另外的增溶方式以寻找专利布局的突破点。而从制剂层面对药物增溶则是药物研发人员最容易想到的方式。如CN2016102965003制备了半酒石酸匹莫范色林的固体分散体，其可提高匹莫范色林的溶解度和生物利用度，但是固体分散体中药物的潜在析晶、转晶体问题可能会对制剂的效果产生影响。[0004]制剂层面对药物增溶的方式还有很多，如微粉化、环糊精包合、脂质体等，其中微粉化技术能耗高，对于一些静电作用强的药物不适用，且其仅仅涉及物理层面，增溶效果往往差强人意；环糊精通常对酸性条件不稳定，且其由于主要依靠物理包合，对药物分子大小要求较高且稳定性较差；脂质体是近年来新兴的一种药物制剂，其利用磷脂的双分子层结构形成囊泡，将难溶性药物包封于脂质体的磷脂双分子层内，或将水溶性药物包封于双分子层封闭成的小室内。由于其对难溶性药物的增容效果好，包封率较高，其结构组成类似于细胞膜，生物相容性好，容易被细胞所内吞，且可在表面进行各种修饰以提高脂质体在体内的滞留时间和靶向性，因此受到了越来越多的关注。[0005]脂质体的常见制备工艺有薄膜水化法、乙醇注入法、逆向蒸发法、硫酸铵梯度法等。其中薄膜水化法由于工艺成熟、简单，重复性强因此最为常见；乙醇注入法需要将溶解有药物的乙醇注入水相，对于温度、搅拌和注入速度的要求较为严格，因此不容易控制均匀的粒径；逆向蒸发法相对于前两种方法制备工艺较为复杂，制备过程中容易乳化；硫酸铵梯度法是主动载药法，其制备出的脂质体载药量可进一步提高，但是劣势在于工艺复杂。发明内容
[0006]本发明为克服匹莫范色林原料药的水溶性差的技术问题，采用最常用的薄膜水化法制备了匹莫范色林的脂质体，并通过单因素试验法优选出了最优辅料组成和制备工艺条件。
[0007]本发明的一个方面在于提供一种匹莫范色林的脂质体，其由匹莫范色林、脂质体
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说 明 书
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材料组成。[0008]其中，脂质体材料为磷脂和胆固醇。[0009]其中，磷脂包含大豆卵磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；优选地，磷脂选自由大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油组成的组；进一步优选地，磷脂选自氢化大豆卵磷脂或磷脂酰乙醇胺中的一种或两种。[0010]其中，磷脂和胆固醇的重量比例为10:1-1:5；优选地，磷脂和胆固醇的重量比例为8:1-1:1；进一步优选地，磷脂和胆固醇的重量比例为5:1-2:1。
[0011]本发明的另一个方面在于提供一种匹莫范色林的脂质体的制备工艺，该制备工艺为薄膜水化法。
[0012]其制备工艺为：将匹莫范色林和磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，于适宜的温度下减压旋蒸成薄薄的一层膜；然后将事先配置好的磷酸盐缓冲液加入旋蒸瓶中，振摇并超声水化得到脂质体预产物，然后采用挤出器依次挤压通过0.45、 0.22μm微孔滤膜得到脂质体终产物。
[0013]其中有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、乙腈、乙酸乙酯；优选地，有机溶剂选自二氯甲烷。
[0014]其中，药物与脂质体材料的用量重量比为1：(1-100)；优选为1：(5-50)；更优选为1：(10-20)。
[0015]本发明首次将匹莫范色林制备成脂质体，并通过单因素试验筛选出了制备脂质体最优的辅料种类和制备工艺参数。制备的匹莫范色林脂质体可显著增加匹莫范色林的溶解度，包封率高，可达90％以上，制剂稳定性好，载药量较高。且制备工艺简单，辅料经济且较为安全。另外，可进一步将本发明的脂质体通过如冷冻干燥等技术制备成脂质体粉末，以后续用于胶囊剂、片剂的制备。附图说明
[0016]图1为本发明实施例1制备的脂质体的粒径分布图。
具体实施方式[0017]I、辅料相容性影响因素试验[0018]将大豆卵磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)，磷脂酰甘油(PG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、和药物充分混合，分别计为SPC组EPC组、HSPC组、PE组、DPPC组、PG组，另外，以纯药物组作为对照组。按照中国药典2015版四部9001原料药物与制剂稳定性试验指导原则对上述混合物在高温、高湿、光照条件下测试其辅料相容性。其中，药物和辅料用量重量比为1:5。[0019]表1辅料相容性影响因素试验结果
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[0020]
通过上表可知，药物在高温和光照下相对较为稳定，在高湿条件下相对较不稳定。
所有辅料中除磷脂酰甘油外，其他几个磷脂的相容性较好。虽然PE和DPPC 和匹莫范色林的相容性相对更优，但是与SPC、EPC、HSPC没有显著差异。因此后续选用SPC、EPC、HSPC、PE、DPPC作为脂质体成膜材料。[0022]II、单因素试验：[0023]1、溶剂的筛选
[0024]考察薄膜分散法中常用有机溶剂的种类对制剂的粒径和包封率的影响。有机溶剂选择氯仿、二氯甲烷、乙醇、乙腈、乙醚、乙酸乙酯，磷脂选定为大豆卵磷脂，并加入胆固醇，控制磷脂与胆固醇比例为5:1。
[0025]各组制备工艺按照如下步骤进行：[0026]将匹莫范色林和大豆卵磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，于适宜的温度下在旋蒸仪上减压旋蒸，缓缓旋干成薄薄的一层膜；然后将事先配置好的磷酸盐缓冲液 (pH＝7)加入旋蒸瓶中，振摇水化得到脂质体预产物，然后采用挤出器依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜得到脂质体终产物。采用鱼精蛋白凝聚法测试脂质体包封率，采用马尔文纳米粒度仪测试脂质体的粒径分布。
[0027]实验过程以及结果显示，不同溶剂对磷脂、胆固醇和匹莫范色林的溶解度差别较大，其中乙醚即便经过超声处理依旧未能将三者完全溶解，故舍去。其余溶剂均可较好溶解匹莫范色林和脂质体材料。其中不同溶剂导致的成膜状态、脂质体状态、包封率、粒径数据参见表2。
[0028]表2不同有机溶剂对制剂的粒径、包封率等的影响结果
[0021]
[0029]
[0030]
注：#表示其半透明状态稍差于其他组。[0031]由此可知，不同溶剂对于脂质体的粒径分布和外观无显著性影响。虽然所有脂质体均为半透明状态，但是仔细观察后仍可发现乙醇为溶剂的脂质体的外观透明性略差于其他组。不同溶剂对于匹莫范色林的包封率有较大影响，其中乙醇作为溶剂时其包封率最差，这可能导致其对于脂质体外观有造成了一定影响；氯仿作为溶剂包封效果最好，二氯甲烷和乙腈次之，乙酸乙酯稍差。由于氯仿见光易分解产生剧毒光气，乙腈沸点高，综合安全、经
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济、能耗考虑，优选二氯甲烷作为溶剂。[0032]2、磷脂的筛选
[0033]选择辅料相容性试验中通过的SPC、EPC、HSPC、PE、DPPC按照以下工艺制备脂质体并测试其包封率和粒度分布：
[0034]将匹莫范色林分别和不同的上述磷脂，以及胆固醇溶于二氯甲烷中，于30℃在旋蒸仪上减压旋蒸，缓缓旋干成薄薄的一层膜；然后将事先配置好的磷酸盐缓冲液(pH＝7)加入旋蒸瓶中，振摇超声水化得到脂质体预产物，然后采用挤出器依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜得到脂质体终产物。采用鱼精蛋白凝聚法测试脂质体包封率，采用马尔文纳米粒度仪测试脂质体的粒径分布。其中，控制磷脂与胆固醇比例为5:1。不同磷脂导致的成膜状态、脂质体外观、包封率、粒径数据参见表3。[0035]表3不同磷脂对制剂的粒径、包封率等的影响结果
[0036]
结果显示，不同磷脂作为成膜材料对脂质体的包封率有很大影响，也影响脂质体的粒径分布，其中天然磷脂中氢化大豆磷脂(HSPC)的效果最优，合成磷脂中PE的效果更好。综上，选择HSPC和PE作为优选的成膜材料。[0038]3、探究磷脂和胆固醇用量比例对包封率的影响[0039]分别设定20:1，10:1，8:1，5:1，2:1，1:1的HPSC和胆固醇比例，以二氯甲烷为有机溶剂，采用薄膜分散-挤出工艺制备脂质体，并测试药物的包封率和脂质体的粒径分布。结果如表4所示。
[0040]表4不同磷脂和胆固醇配比对包封率和粒径等的影响结果
[0037]
[0041]
磷脂和胆固醇配比对包封率影响很大，由于胆固醇可以调整脂质体膜的流动性，
故通常需要加入一定比例的胆固醇以使得脂质体更容易包封药物(尤其是脂溶性药物)；表4显示，(8-1):1的比例均可使得脂质体的包封率在80％以上， (3-2)：1的比例可使得采用HPSC的脂质体其包封率高达92％以上。[0043]III、制备实施例
[0044]以下是具备实施例，但是本领域技术人员应当理解的是，其仅仅属于示例性说明，并不构成对本发明保护范围的。
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实施例1：
[0046]将100mg匹莫范色林、1gHPSC、0.3g胆固醇加入10mL二氯甲烷中，加热至 35℃并搅拌溶解，然后将上述液体转移到旋蒸仪上减压除去有机溶剂，得到一层均匀分布的膜；加入50mLpH＝7的磷酸盐缓冲液振摇水化薄膜，超声30min，然后依次挤压通过0.45、0.22μm薄膜，获得匹莫范色林脂质体。经测试，该脂质体包封率为92.56％，载药量为6.61％，平均粒径为213.5nm，PDI为0.119。[0047]实施例2：
[0048]将100mg匹莫范色林、0.9gHPSC、0.3g胆固醇加入10mL二氯甲烷中，加热至35℃并搅拌溶解，然后将上述液体转移到旋蒸仪上减压除去有机溶剂，得到一层均匀分布的膜；加入50mLpH＝7的磷酸盐缓冲液振摇水化薄膜，超声30min，然后依次挤压通过0.45、0.22μm薄膜，获得匹莫范色林脂质体。经测试，该脂质体包封率为93.％，载药量为7.22％，平均粒径为211.0nm，PDI为0.112。[0049]实施例3：
[0050]将100mg匹莫范色林、1gPE、0.3g胆固醇加入10mL二氯甲烷中，加热至35℃并搅拌溶解，然后将上述液体转移到旋蒸仪上减压除去有机溶剂，得到一层均匀分布的膜；加入500mLpH＝7的磷酸盐缓冲液振摇水化薄膜，超声30min，然后依次挤压通过0.45、0.22μm薄膜，获得匹莫范色林脂质体。经测试，该脂质体包封率为95.23％，载药量为6.80％，平均粒径为209.7nm，PDI为0.102。[0051]实施例4：
[0052]将100mg匹莫范色林、0.9gPE、0.3g胆固醇加入10mL二氯甲烷中，加热至 35℃并搅拌溶解，然后将上述液体转移到旋蒸仪上减压除去有机溶剂，得到一层均匀分布的膜；加入50mLpH＝7的磷酸盐缓冲液振摇水化薄膜，超声30min，然后依次挤压通过0.45、0.22μm薄膜，获得匹莫范色林脂质体。经测试，该脂质体包封率为95.％，载药量为7.38％，平均粒径为211.7nm，PDI为0.111。
[0053]本发明将匹莫范色林制备成脂质体，并由以上辅料相容性试验和单因素试验获得了匹莫范色林的脂质剂中较优条件，其中，有机溶剂优选二氯甲烷；磷脂优选PE或HSPC或二者混合；磷脂和胆固醇比例优选(8-1):1，制备工艺选用常用的薄膜水化-挤出工艺。制备的匹莫范色林脂质体可显著增加匹莫范色林的溶解度，包封率高，可达90％以上，制剂稳定性好，载药量较高。且制备工艺简单，辅料经济且较为安全。另外，可进一步将本发明的脂质体通过如冷冻干燥等技术制备成脂质体粉末，以后续用于胶囊剂、片剂的制备。
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说 明 书 附 图
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