国外医药抗生素分册２０１３年１１月第３４卷第６期 ．２５９． 产ＥＳＢＬｓ１］￣炎克雷伯菌的耐药基因研究 郝家砚，程邦宁 （安徽省立儿童医院检验中心，合肥２３００５１） 摘要：目的研究产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性以及ＥＳＢＬｓ的基因表型。方法对５００株产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯 菌的可疑临床分离株进行ＥＳＢＬｓ确证，并采用琼脂稀释法进行药敏试验；采用聚合酶链（ＰＣＲ）反应分析３６８株产ＥＳＢＬｓ肺炎克 雷伯菌株的ＥｓＢＬｓ基因（ｂｌａ Ｍ、ｂｌａｓ ｖ￣Ｉｂｌａｃ ），分析产ＥｓＢＬｓ肺炎克雷伯菌的耐药性及ＥＳＢＬｓ的基因表型情况。结果产 ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌筛选试验初步筛出５００株，通过进一步确认试验３６８（７７．２％）株确认为出产ＥＳＢＬｓ菌；３６８株产ＥＳＢＬｓ肺炎 克雷伯菌株中有１５８株（４０．９３％）检测到６ 。Ｈ ，１６５株（４２．７５％）￣ＪｌｂｌａＴ ，１７３株（４４．８２％）检测到６，ａｃＴｘ；除阿米卡 星、加替沙星、环丙沙星、左旋氧氟沙星外，产ＥＳＢＬｓ￣＊炎克雷伯菌株和不产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌株对其他８种抗生素的耐药率 不同（Ｐ＜０．０１）；结论产ＥＳＢＬｓ￣ｇ炎克雷伯菌其耐药性高于非产ＥｓＢＬｓ肺炎克雷伯菌；我院ＥｓＢＬｓ肺炎克雷伯菌６ 略高。 比例 关键词：肺炎克雷伯菌； ＥＳＢＬｓ； 整合子； 耐药 中图分类号：Ｒ３７８．９９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１．８７５１（２０１３）０６．０２５９．０４ Ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ＥＳＢＬｓ Ｇｅｎｅ ｏｆＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａ Ｈａｏ Ｊｉａ—ｙａｎ，Ｃｈｅｎｇ Ｂａｎｇ－ｌｉｎ （Ａｕｈｕｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｅｆｅｉ ２３００５１） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＥＳＢＬｓ ｉｎ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ５００ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋ／ｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ。 ａｎｄ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｅｓｔ ｂｙ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｇａｒ ｄｉｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ（ｂｌａＴＥＭ，ｂｌａｓＨｖ ａｎｄ ｂｌａＣＴＸ Ｍ）－ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＥＳＢＬｓ ｉｎ ＥＳＢＬｓ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ３６８ ｓｔｒａｉｎｓ（７７．２％）ｉｎ ｔｈｅ ５００ ｓｔｒａｉｎ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ａｆｔｅｒ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ；Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ １ ５８ ｓｔｒａｉｎｓ（４０．９３％１ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅ ｏｆ ｂｌａｓ｝Ⅳ，１６５ ｓｔｒａｉｎｓ（４２．７５％）ｗｉｔｈ ｂｌａＴＥＭ，ａｎｄ １７３ ｓｒｔａｉｎｓ（４４．８２％）ｗｉｔｈ ｇｅｎｅ ｏｆ ｂｌａｃＴｘ—Ｍ；Ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ８ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｗａｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｎ－ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｅｘｃｅｐｔ ａｍｉｋａｃｉｎ，ｇａｔｉｌｆｏｘａｃｉｎ，ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ ａｎｄ ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ ＜０．０ １）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｉＳ ｈｉｇｈ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｎ—ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ；Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｉｓ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｈｉｇｈｅｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｋ／ｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａ： ＥＳＢＬｓ； ｉｎｔｅｇｒｏｎ；ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ 本研究对产ＥＳＢＬｓ）］ｉ￣炎克雷伯菌临床分离株的 １．１．１菌株 安徽省立儿童医院２０１０年１月至２０１２年ｌ２月临 耐药性以及ＥＳＢＬｓ的基因表型进行研究，以探讨产 ＥＳＢＬｓ菌及其耐药基因在我院的分布情况。 １材料与方法 床分离的５００株产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌。临床标本分 布情况见表１。阳性质控菌株和阴性质控菌株分别为 １．１材料 收稿日期：２０１３—１０．０１ ＥＳＢＬｓ阳性菌株肺炎克雷伯菌ＡＴＣＣ７００６０３和ＥＳＢＬ 作者简介：郝家砚，硕士研究生，研究方向：临床检验诊断学。 ，通讯作者：程邦宁，硕士研究生，研究方向：临床检验诊断学。 ．２６０． Ｗｏｒｌｄ Ｎｏｔｅｓ ｏｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２０１ ３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．６ 表１临床标本分布 １．２．２ ＥＳＢＬｓ表型筛选 按美国临床实验室标准委员会（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮＣＣＬＳ）标准进行判 断，凡头孢泊肟或头孢他啶的抑菌环直径５２２ｍｍ， 或头抱曲松５２５ｍｍ，氨曲南或头孢噻肟＜２７ｍｍ，均 应高度怀疑为产ＥＳＢＬｓ菌株，需进一步做确证试验 来加以确证。 １．２．３ ＥＳＢＬｓ表型确证 阴性菌株大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２。 按照标准纸片扩散法药敏试验，将菌液涂布到 Ｍｕｅｌｌｅｒ．Ｈｉｎｔｏｎ平板，用头孢他啶和头孢他啶＋克拉 １．１．２弓』物序列来源 Ｏ．￣ｂｔａｓＨｖ、ｂｌａＴＥＭ￣ｎｂｌａｃＴＸＭ的ＥＳＢＬｓ基因类型 ．维酸、头孢噻肟和头孢噻肟＋克拉维酸药敏纸片分 别对可疑菌株进行试验，测量两种纸片及加克拉维 酸后的抑菌环直径。当任何复合抗生素药敏纸片的 抑菌圈直径比单…抗生素药敏纸片的抑菌圈直径 序列设计引物序列，均由宝生物工程（大连）有限 公司提供（详见表２）。 １．１．３主要试剂与仪器 药敏纸片均由英国ＯＸＯＩＤ公司提供；Ｍｕｅｌｌｅｒ— ＞５ｍｍ，即可确认为ＥＳＢＬＳ￣Ｆ］性菌株。 １．２．４药敏测定 药敏试验参照美国临床实验室标准化研究所 （ＣＬＳＩ）推荐标准，采用琼脂稀释法进行测定各抗 Ｈｉｎｔｏｎ琼脂平板和血平板由贝瑞特生物技术（郑州） 有限公司提供；Ｌｕｒｉａ—Ｂｅｒｔａｎｉ培养基由上海川翔生 物科技有限公司提供；ＭｉｃｒｏＳｃａｎ４全自动微生物 分析仪由德国西门子公司提供；Ｂｅｙｏｔｉｍｅ质粒抽提 试剂盒、ＴＡＥ（５０Ｘ）、ＢｅｙｏＲｅｄ ＤＮＡ上样缓冲液 （６Ｘ）、Ａｇａｒｏｓｅ琼脂糖由碧云天生物技术研究所 提供；ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒ、ｄＮＴＰｓ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶由 生素对各菌株的最低抑菌浓度（Ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣｓ）。操作方法参照美国实验室 标准化委员会ＣＬＳＩ的法规进行，结果解释标准参照 ＣＬＳＩ的临界值判定敏感、耐药、中介［１ｊ。 １．２．５质粒ＤＮＡ的提取 Ｌｕｒｉａ．Ｂｅｒｔａｎｉ琼脂培养基上挑取单个菌落，将其 移种至含５０ｇＬ／ｍＬ的Ａｍｐ的３ｍＬ Ｌｕｒｉａ—Ｂｅｒｔａｎｉ肉汤培 养液中，３７℃，２５０ｒ／ｍｉｎ振荡培养过夜，取１．５ｍＬ菌 液１００００ｒ离，ｌ￣，５ｍｉｎ，生理盐水洗涤后离心，严格按 质粒抽提试剂盒说明进行操作，将所得模板ＤＮＡ分 装 ２０。Ｃ保存。 大连宝生物工程有限公司；ＡＢＩ ７３００实时荧光ＰＣＲ 仪由美国ＡＢＩ公司提供；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ￣通ＰＣＲ仪由德 国Ｅｐｐｅｎｄｏｒ 司提供；ＢＩＯ—ＲＡＤ电泳仪由美国ＢＩＯ— ＲＡＤ公司提供；凝胶成像系统由美国ＢＩＯ—ＲＡＤ Ｇｅｌ Ｄｏｃ ＸＲ提供。 １．２方法 １．２．１菌种鉴定 全部菌株以及Ｅ Ｓ Ｂ Ｌ 阳性菌株肺炎克雷伯 菌ＡＴＣＣ７００６０３和ＥＳＢＬ 阴性菌株大肠埃希菌 ＡＴＣＣ２５９２２质控菌株均采用ＭｉｃｒｏＳｃａｎ４全自动微生 物分析仪进行鉴定。 １．２．６ ＰＣＲ扩增ＥＳＢＬｓ基因 根据表１所列ｂｌａｓＨｖ、６ ＴＥＭ、６ ｃＴｘ的引物对 Ｍ．ＥＳＢＬ 阳性菌株肺炎克雷伯菌提前的质粒ＤＮＡ模板进 行扩增。总反应体系体积为１００ｇＬ：含ｌＯｌＬ １０×ＰＣＲ 表２用于鉴定整合子；￣ＩＪＥＳＢＬｓ基因类型序列设计引物序列 国外医药抗生素分册２０１３年１１月第３４卷第６期 ．２６１． 缓冲液，１．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇ ，２００ｇｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ，１．２５ ｇｍｏｌ／Ｌ￣Ｉ物，２Ｕ Ｔａｑ酶，１０ｕＬ质粒ＤＮＡ模板；ｐＨ ８．０。具体反应条件见表３。ＰＣＲ扩增产物用加入溴 乙锭的１．０％琼脂糖凝胶电泳，在１×ＴＡＥ缓冲液中电 泳，电压为３Ｖ／ｃｍ，１．５ｈ。电泳完毕后，用凝胶图像 分析系统在紫外线下进行分析。 的分布情况具体结果见表５。 ２．３肺炎克雷伯ＵＥＳＢＬ 菌株－９非产ＥｓＢＬ 菌株的药 敏试验结果 除阿米卡星、加替沙星、环丙沙星、左旋氧 氟沙星外，产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌株和不产ＥＳＢＬｓ 肺炎克雷伯菌株对其他８种抗生素的耐药率不同 （Ｐ＜０．０５），具体结果见表６。 ３讨论 １．３统计学分析 使用ＳＰＳＳ １７．０统计软件进行数据的统计分析。 计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验。 Ｐ＜０．０５在统计学上有显著性差异。 ２结果 Ｋｐｎ是医院获得性肺炎和社区获得性肺炎的重要 致病菌［ｚ］。近年来，由于各种抗菌药物的广泛使用， 导致肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物产生了耐药性［３］。 国家细菌耐药监测网曾报道对８个省、市自治区的５７ ２．１ ＥＳＢＬｓ鉴定结果 产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌筛选试验初步筛出５ｏ０ 株，通过进一步确认试验３６８（７７．２％）株确认为出 产ＥＳＢＬｓ菌（表４、。 所三级甲等医院进行耐药性调查，肺炎克雷伯菌分 离率列第３位，占８．２％［ 。 表５ ＥＳＢＬｓ表型的检测结果 ２．２ ＥＳＢＬｓ表型的检测结果 对３６８株产ＥＳＢＬｓ菌株分别用６， ｓＨｖ、ｂｌａＴＥＭ、 ｂｌａ ３类基因的特异性引物进行扩增，其中有１５８ 株（４０．９３％）检测到６ ，，１６５株（４２．７５％）检测到 ｂｌａＴＥＭ，１７３株（４４．８２％）￣ＮＮｂｌａｃ＿ｒｘ＿Ｍ。ＥＳＢＬｓ￣ 表４肺炎克雷伯菌的ＥＳＢＬｓ鉴定结果 表６肺炎克雷伯产ＥＳＢＬＳ菌株与非产ＥＳＢＬＳ菌株的药敏试验结果（％） 产ＥＳＢＬｓ可导致肺炎克雷伯菌对第三代头孢头 中２０％产ＥＳＢＬｓ，以ＩＣＵ分离出的菌株产ＥＳＢＬｓ率最 孢菌素、单环酰胺类以及头孢菌素等氧亚氨 基Ｂ一内酰胺类抗生素耐药，而对碳青霉烯类以及头 霉素敏感，且这种耐药性可被Ｂ一内酰胺酶抑制剂如 高为３８．４％，国内华山医院报道［７］，ＩＣＵ等科室分离出 的肺炎克雷伯菌产ＥＳＢＬｓ率高达５１％。ＥＳＢＬｓ株分离率 有所差异，这种差异可能与不同医院、地区使用第三 代头孢菌素的种类、数量及时间不同而造成对ＥＳＢＬｓ 克拉维酸所抑制。肺炎克雷伯菌产ＥＳＢＬｓ率较高， 国外报道【５】其产酶率约１Ｏ％～４０％，最近有报道［６】黎巴 嫩一家大型医院临床分离出的１２４８株肺炎克雷伯菌 的筛选及诱导不同有关。在本研究中，产ＥＳＢＬｓ肺炎 克雷伯菌筛选试验初步筛出５００株，通过进一步确认 ．２６２． Ｗｏｒｌｄ Ｎｏｔｅｓ ｏｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．６ 试验３６８（７７．２％）株确认为出产ＥＳＢＬｓ菌，因此产 『４］ 杨怀，王予』ｌｈ郑金鼎，等．产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌的目标 性监测与分析［Ｊ］．中华医院感染学杂志，２０１２，２２（９）： １９ｌ８ ＥＳＢＬｓ菌肺炎克雷伯菌检出率比较高。我国以 ＣＴＸ—Ｍ型为主并兼有ＳＨＶ型报道［８＿９１。由于ＥＳＢＬ 可通 过质粒介导，其耐药基因经常与其他的耐药基因联结 而使耐药性更加复杂，使得临床治疗更加困难［ －］。 在本研究中，我们对本院产ＥＳＢＬｓ菌肺炎克雷伯菌的 基因分型检测结果显示，ｂｌａｃ Ｍ比例（４４．８２％）最 ［５］Ｐｏｉｒｅ １，Ｎａａｓ Ｌ Ｇｕｉｂｅｒｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒ—ｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＢ一１，ａ ｎｏｖｅｌ ｃｌａｓｓ Ａ ｅｘｔｅｎｄｅｄ— ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ａｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉｉｎｔｅｇｒｏｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００５， ４３（３）：５７３ 高，其次为６ｆ口ＴＥＭ（４２．７５％）和６ ｓＨｖ（４０．９３％），产 ＥＳＢＬｓ￣炎克雷伯菌株的耐药性比例高于ＥＳＢＬｓ肺炎 【６］Ｋａｒｉｕｋｉ Ｓ，Ｃｏｒｋｉｌｌ ＪＥ，Ｒｅｖａｔｈｉ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉＯｎ ｏｆ ａ ｎｏＶｅ１ Ｐ１ａｓｍｉｄ—ｅｎｃｏｄｅｄ 克雷伯菌株（Ｐ＜０．０１），和文献报道一致。 参考文献 ［１］ Ｓｏｌｏｍｅｎｎｙｉ Ａ，Ｓａｒａｌｏｖ Ａ．Ｃｌａｓｓ １ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ａｎｄ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｅｆｏｔａｘｉｍａｓｅ（ＣＴＸ－Ｍ一１ ２）ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｎｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｋｅｎｙａ【Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００１．４５（７）：２１４１ 『７］ 孟宪祥．ＩＣＵ病房产ＥＳＢＬｓ大肠杆菌的临床分布及耐药性 分析［Ｊ］．医学检验与临床，２００７，１８（６）：４２ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，２０１０，４１（２）：４３６ 『８１ 陈腊梅，刘文恩，李宪．某医院ＣＴＸ—Ｍ型超广谱Ｂ一内酰胺 酶的分子流行病学研究【Ｊ】．中国感染控制杂志，２００７，６ （３）： １４９ ［２］Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＮＣＣＬＳ． Ｐｅｒｆｅｒｍａｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｃａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ：Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＣＬＳＩ／ＮＣＣＬＳ 『９１ 季淑娟，陈亚岗．浙江省产超广谱ｐ一内酰胺酶大肠埃希菌 和肺炎克雷伯菌的基因分型Ⅲ．中华传染病杂志，２００５， ２３（２）：７５ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ１００一Ｓ１６［Ｓ］．ＣＬ５ １，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎａｙｌｖａｎｉａ， ２００６，２６（３）：３１ ［３］Ｐｅｎａ Ｃ，Ｐｕｊｏｌ Ｍ，Ａｒｄａｎｕｙ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ｈｏｓｐｉｔａｌ— ａｃｑｕｉｒｅｄ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｂａｃｔｅｒａｅｍｉａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ［１０］华杰，李艳霞．肺炎克雷伯菌医院感染及耐药性检测［Ｊ］＿ 中华医院感染学杂志，２００６，１６（１０）：１１７２ ｓｔｒａｉｎｓ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｅｘｔｅｎｄｅｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ ｌａｃｔａｍａｓｅ［Ｊ］． Ｈｏｓｐｉｔ Ｉｎｆｅｃｔ，２００１，４７：５３ 『１１］郭自强，何林，唐曙明，等．１１７株肺炎克雷伯菌的耐药性 分析［Ｊ］．医学检验，２００６，２１（４）：３２ （上接第２５８页） 肤消毒可基本消除皮肤定植菌群；②外科手术切口 感染原因复杂，与患者自身免疫状态、住院时间长 短、手术创伤面大小、医院环境卫生条件及护理质 量有着密切关系。 各种外科手术均为侵入性操作，在根治疾病的 同时，也打破了人体免疫屏障。手术患者因创伤或 手术造成失血、失液、伤口开放，被感染途径多， 且患者全身状况差，免疫力低下，更易引起内源性 与外源性病原菌入侵感染ｌ ６ｌ，因此，需要加强感染控 制管理。 ［１】Ｈｉｒｏｓｈｉ Ｎ，Ｍａｓａｙｏｓｈｉ Ｙ，Ｓｈｉｎｉｃｈｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ・Ｍｉｃｒｏ’ｏｒｇａｎｉｓｍ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｉｃ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｒｕｃｉａｔｅ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｉｃ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｓｕｒｇｅｒｙ，２０１２， ２８（５）：６６７ 类切口处皮肤金黄色葡萄球 ［２】 易林高，李克诚，陈晓孩，等．Ｉ菌的带菌率和耐药性调查【Ｊ］．中国药房，２０１２ ２３（１４）： １２７８ ｕｙｔｍａｎｓ Ｊ，ｖａｎ Ｂｅｌｋｕｍ Ａ，Ｖｅｒｂｒｕｇｈ Ｈ．Ｎａｓａｌ ｃａｒｒｉａｇｅ ［３］ Ｋｌｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｉｓｋｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，１ ９９７， １０：５０５ ［４】 吴养，杨雪英，吴春辉，等．外科手术切口感染调查及对策 ｆＪ］．中华医院感染杂志，２００６，１６（７）：７５８ ［５】 高新云，罗晓明，施安娜，等．手术切口感染病原菌分析及 参考文献 管理策略『Ｊ１．局解手术学杂志，２０１０，１９（６）：４９６ Ｊ］． ［６］ 吴小蔚，董玉林．外科手术切口感染的危险因素调查［中华医院感染学杂志，２０１０，２０（１９）：２９５０
