大量制备质粒DNA（传统碱裂解法、PEG8000纯化）
适用于从100-250ul菌液中制备100-200ug高拷贝质粒
1． 涂板、挑取单克隆菌落，加入LB选择性培养基中（高拷贝质粒用100-250ml,低拷贝用500ml），37℃振摇12-16小时。
2． 收获菌液（用35ml离心管）：4℃ 5,000rpm 离心10min，弃上清，再次离心2min，吸除残留的培养液：（注意：这步可将离心沉淀后的菌斑-204℃ 冻存12-24小时，留待以后操作。）
3． 以10ml溶液I重悬细菌。
4． 加入溶液II 10ml,轻轻旋转、颠倒４－６次（不可过重，以免机械剪切基因组ＤＮＡ），室温放置５min（不可超过５min，避免过度消化）。
5． 加入冰预冷的溶液III 10ml，迅速颠倒4-6次混匀，冰上放置20min，以促进沉淀形成。
6． 4℃ 1，3000rpm（2，000g以上）离心30min，离心前应再次混合样品。（也可用过滤纸过滤。收集上清。）
7． 上清入新管，以与上一步相同的条件离心15min，充分去除沉淀。（如过滤此步可省）。
8． 上清入新管，加入60%体积的异丙醇（约18ml ,室温，已避免增加盐沉淀），混
匀，室温放置10min，4℃ 1，5000rpm离心30min（离心前应于管底作好标记），小心，缓慢地倒出上清，切勿将管底的DNA沉淀一并弃去。
9． 清洗：70%乙醇20ml清洗沉淀物，4℃ 1，5000rpm离心10min小心，缓慢地倒出上清，充分凉干，溶于1XTE溶液3ml 中。
10. 加入等体积 3ml预冷的5M LiCL溶液,充分混匀, 4℃ 10,000rpm离心10min。
11. 上清入新管，加入等体积的异丙醇（6ml）沉淀，室温条件下以10,000rpm离心10min，弃上清，以70%乙醇10ml清洗沉淀物，4℃ 1，5000rpm离心10min，凉干，溶于1XTE溶液500ul 中。(也可分成两管，每管500ul，做成两管抽提。)
12. 加入RNAse(20ug/ml),室温放置30min。
13．加入含13%（W/V）PEG8000的1.6M NaCl溶液500ul,充分混匀，室温静置20min, 4℃
1,2000rpm离心5min，以回收沉淀的质粒DNA。（可能肉眼看不见沉淀，沉淀在管壁上）。
14. 弃上清，以400ul 1×TE溶液溶解质粒DNA，用等体积的酚：氯仿异戊醇（200ul:200ul）, 4℃ 1,2000rpm离心10min，上清入新管,加入氯仿异戊醇400ul，4℃ 1,2000rpm离心10min，上清入新管。（氯仿中加入异戊醇可起到去除泡沫的作用，有利于防止吸出水相与油相之间的白色物质。）
15. 加入1/10体积（40ul）3M（或5M 25ul）的醋酸钾溶液，充分混匀，加入2
倍体积（800ul）的冰预冷的无水乙醇，冰上放置10min, 4℃ 1,2000rpm离心5min，以回收质粒DNA。
16. 弃上清，加入放置4℃ 70%乙醇200ul，稍加振荡，4℃ 1,2000rpm离心5min，重复该步骤3次。
17. 吸除上清，敞开管口，室温凉干。
18. 加入适量的1×TE溶液溶解质粒DNA。
19. 紫外分光光度仪定量。
