取丹参幼苗18株，分3组处理:A组幼苗在正常培养液下生长；B组在加有200mmol/L NacL 的培养液里生长；C组在同时加有200mmol/L NacL与1mmol/LSA的培养液里生长。1d后取各 处理幼苗分别测定各处理的丹参幼苗叶片相对含水量﹑ 叶绿素含量 ﹑过氧化氢酶CAT 活性、 过氧化物酶POD活性、脯氨酸含量﹑ 电导率等。取得数据进行分析得出结果。
（一）形态指标 NaCl 处理后，每天测定其单株鲜重、单株干重等，并计算植株含水量。
植株含水量（%）＝（单株鲜重－单株干重）/单株干重×100%
（二）理化指标（1）过氧化物酶POD的测定：称取植物(丹参叶片)材料0.1g，加20mmol/LKH2PO45mL, 于研钵中研磨成匀浆，以10000r/min离心10分钟，收集上清液保存在
冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO45mL溶液提取一次， 全并两次上清液。取比色皿2只， 于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上 述酶液1mL(如酶活性过高可适当稀释)，立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值， 每隔30s读数一 次。以每分钟表示酶活性大小，即以△OD470/min.mg蛋白质表示，蛋白质含 量测定按Folin法进行。以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA470/[min.g(鲜重)] 表示之。也可以用每min内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)表示。 过氧化物酶活性[u/(g.min)] =
式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化。 W——植物鲜重，g。 VT ——
提取酶液总体积，mL。Vs ——测定时取用酶液体积 ,mL。 t——反应时间，min。
(2). 过氧化氢酶CAT活性测定: 1.酶液提取：称取新鲜丹参叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。 2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。 管 号 S0 S1 S2 粗酶液(ml) pH7.8磷酸(ml) 0.2（煮死酶液） 1.5 0.2 1.5 0.2 1.5 蒸馏水(ml) 1.0 1.0 1.0 25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活力。 3、计算 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。过氧化氢酶活力
A240VT(u/gFW/min)=0.1V1tFW
(AS1AS2)2式中 A240 = AS0－
A—加入煮死酶液的对照管吸光值；
AS1, AS2—样品管吸光值；Vt—粗酶提取液总体积（ml）； V1—测定用粗酶液体积（ml）； FW—样品鲜重（g）； 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 (3) 叶绿素含量的测定: 取新鲜叶片, 用蒸馏水洗净, 滤纸吸干多余水分。剪碎称取0.1 g
S0
放入20 ml 试管中加10 ml 提取液( 乙醇∶丙酮∶水=4.5∶4.5∶1) , 于黑暗条件下浸提24 h。 用分光光度计测定OD663、OD5 值。叶绿素含量(mg/g)=( 叶绿素浓度×提取液总体积) / 样品质量。
(4) 膜相对透性实验：参照李锦树的方法[13]，称取0.25g川丹参叶片，用去离子水将其洗净后剪成0.5－1.0cm的组织切断，置于10ml带塞子的试管里，并加入10ml去离子水，真空渗透20min（中途放气2-3次），在室温下定容至25ml、净置1h，用DDS—Ⅱ型电导率仪测定电导率（Ri）。然后将样品管放在沸水浴中煮5min，冷却到室温后再测总电导率（Rt），用相对电导率R0（R0＝Ri /Rt），即以样品煮前电导率与煮后电导率的比值（电解质外渗率）表示质膜透性。
(5) 脯氨酸含量的测定：1. 标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）。 2. 样品的测定 （1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置大管中，然后向各管分别加入
5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。（2）吸取2ml提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即呈红色。（3）冷却后加入4ml甲苯，摇荡30S，静置片刻，取上层液至10ml离心管中，在3000rpm下离心5min。（4）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度
计上520nm波长处比色，求得吸光度值。3.结果计算 根据回归方程计算出（或从标准曲线上查出）2ml测定液中脯氨酸的含量（Xμg/2ml），然后计算样品中脯氨酸含量的百分数。计 算公式如下： 脯氨酸含量（μg/g）＝[X×5/2]/样重（g）。
丙酮、乙醇、NaCl、水杨酸SA、磷酸、H2O2、愈创木酚、KH2PO4、磷酸缓冲液(pH6.0)、NAOH、石英砂、茚三酮、冰醋酸、甲苯、磺基水杨酸、脯氨酸标品。
紫外分光光度计、秒表、电子天平、离心机、研钵、容量瓶（250ml 1个、50ml 6个）、小烧杯2个、带塞试管5个、10ml试管3支、恒温水浴、量筒 、移液管（5 ml、1 ml、2 ml）、电导率
注：颜酸：我和杨洁的器材及试剂是一样的，你再看看差不差，差的话你就再看看哈。谢谢了….
